克百威单克隆抗体的制备及鉴定

本试验以人工合成的克百威免疫原免疫BALB／CF1小鼠,采用杂交瘤技术制备了5株能稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用培养扩增后的各建株细胞诱导小鼠生长腹水．腹水效价达10^-6～10^-7。琼脂双扩试验表明各单抗蛋白均为IgG,抗体蛋白均为IgG2a亚类。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体腹水,并测定抗体蛋白含量为3～8mg／mL;用SDS—PAGE进行纯度鉴定,电泳图谱均显示了IgG抗体及其重链和轻链条带,分离的抗体纯度在90％以上。对纯化的单抗5E2进一步做交叉反应试验,与其他氨基甲酸酯类杀虫剂残杀威、速灭威、灭多威、甲奈威、异丙威、仲丁威的交叉反应率分别为7．2％、4．5％、2．8％、7．9％、9．5％、8．9％,结果表明单抗5E2有较好的特异性。     

霍乱弧菌单克隆抗体研制及应用

采用霍乱弧菌菌株免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/O,在PEG作用下进行细胞融合,获得二株能分泌抗霍乱弧菌单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤株.体内外培养可用辣根过氧化物酶、亲和素生物素及荧光标记葡萄球菌A蛋白测定霍乱弧菌专一的单克隆抗体,经6个月传代培养和液氮冷冻复苏培养良好,产生抗体稳定.细胞培养液效价为1∶8,小鼠腹水效价1∶3200,经44株霍乱弧菌(EL Tor生物型)和10株其它肠道内致病菌检测结果,对霍乱弧菌有特异性抗体.经IgG亚型测定属IgG_3,杂交瘤细胞染色体稳定在95～105条。本文还对杂交瘤细胞分泌单克隆抗体若干问题,进行了讨论。     

肺癌血清标志物CK19单克隆抗体制备及初步应用

同肺癌相关的血清标志物CK19,其存在或量变不仅可以指示肿瘤性质,还可以指导肿瘤的诊断、分类、预后以及治疗。本次研究使用BALB/C小鼠进行免疫(使用CK19的重组抗原),血清滴度进入平台期后将骨髓瘤细胞与前期经过免疫的小鼠脾细胞融合,进一步将细胞克隆化,共得到6株杂交瘤细胞株(能持续稳定分泌抗CK19抗体)。对6株抗CK19的单抗株进行腹水诱导和扩大培养,并将诱导得到的腹水进行纯化,采用亲和层析法。为获得一个最灵敏的双抗体夹心单抗配对,将纯化后的单抗株做正交配对的筛选并制备酶标抗体。最终获得了最优配对:11E6+16A5-HRP。灵敏度分析的检测结果显示,该配对对CK19重组抗原的检测灵敏度为15.6ng/ml。     

环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定

为了制备抗环丙沙星单克隆抗体,首先采用碳二亚胺法合成了环丙沙星与载体蛋白偶联的免疫抗原和包被抗原,免疫BALB／c小鼠,取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合,HAT培养基筛选,有限稀释法克隆化,获得1株稳定分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测结果显示,杂交瘤细胞染色体数目平均102条,培养上清的效价为1：1．28×10^3,单抗腹水效价达1：1．024×10^6,IC50为68．31ng／mL,属于IgM型,轻链kappa,CI—ELISA法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性,提示获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。     

抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。     

抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体高表达细胞株的克隆筛选

目的:以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为宿主,构建高表达抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体的细胞株。方法:本研究将构建好的抗EGFR单克隆抗体轻链和重链的表达载体,通过优化的电转方法转入CHO宿主细胞,确定G418的工作浓度,在含G418的化学成分已知的培养基中进行克隆筛选,最后筛选后的转染库进行三次克隆筛选,获得稳定高表达抗EGFR抗体的细胞株。结果:通过进行表达量稳定性分析后,筛选出一株表达量较高的细胞株。结论:该克隆筛选方法可行,为抗EGFR抗体的生产提供了稳定高产的细胞系。     

分泌抗人B型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

杂交瘤技术在血液学的理论研究和临床实践中巳得到广泛的应用。就血型单克隆抗体而言,已见有不少报道。我们在继建立分泌抗人A型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株ZMC_9后,又建成了一侏能分泌抗人B型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,定名为ZMB_1。本文将对ZMB_1的建侏和初步鉴定结果作一报道。     

抗诺氟沙星单克隆抗体的制备及其性质的研究

为了监测诺氟沙星抗生素的滥用,我们开发了一种基于单克隆抗体的酶联免疫方法。将小分子抗原诺氟沙星NOR通过碳二亚胺法与载体蛋白BSA、OVA进行偶联。得到完全抗原NOR-BSA和NOR-OVA。用NOR-BSA对3只雌性小鼠进行免疫后,利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA法和间接竞争ELISA法筛选阳性细胞进行克隆,得到3株稳定分泌抗体的单克隆细胞株,分别命名为7C4,8G3,11G7。检测细胞的上清液和纯化后的腹水效价,分别为1:512,1:1024,1:1024和1:128000,1:128000,1:128000。对三株细胞的亚型鉴定为IgG2b,IgG2b,IgG1。建立的标准竞争曲线计算得IC50值为31.225 ng,其检测线性范围为5.011-630.95 ng/mL,最低检出量为2.75 ng。亲和力常数Kaff为4.6×10~8。诺氟沙星单克隆抗体与环丙沙星(27.22%)、恩诺沙星(11.29%)、奥比沙星(11.03%)、氧氟沙星(9.73%)、达氟沙星(7.38%)、沙拉沙星(2.57%)、二氟沙星(0.61%)几种抗菌药有较低的交叉反应率。     

分泌抗人A型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

采用淋巴细胞杂交瘤技术。继建立产生抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤ZMC_4后,又建立了一株能分泌抗人A型红细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,定名为ZMC_9。本文将对ZMC_9的建株作一简报。材料与方法以正常人A型Rh阳性的红细胞为抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与NSI小鼠骨髓瘤细胞在50％PEG(分子量4,000)作用下融合,经HAT选择性培养基培养,生成淋巴细     

抗人甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体的制备及其特性研究

采用亲和层析法纯化的ＡＦＰ抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合,获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系．用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定,杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条,三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型．经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体     

科研成果选登

“长叶车前花叶病毒单克隆抗体研制”通过鉴定由李德葆副教授主持、在浙江医学研究院免疫室李洸副研究员的协作下建立了5个能产生高效价特异RMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。应用上述细胞株产生的5株单克隆抗体将所测试的15个毒株划分为6个血清型,对植物病毒的诊断、鉴定、分类等具有实际和理论     

流行性出血热病毒的鉴定

报道了用长爪沙鼠从流行性出血热病人血液中直接分离到5株病毒,经直接荧光血清、单克隆抗体分型血清及电镜观察等鉴定,确定1株为家鼠型流行性出血热病毒,其余4株为野鼠型流行性出血热病毒。     

美研究发现抗多种流感病毒人单克隆抗体

美国研究人员说,他们发现了能中和多种流感病毒毒株的人单克隆抗体。这些抗体由单个B淋巴细胞分泌合成,可中和的流感病毒包括HSN1型高致病性禽流感病毒和季节性流感病毒,将来在此研究基础上有望开发出高效流感疫苗。组成流感病毒的血凝素蛋白共有16种亚型,他们发现的人单克隆抗体能中和其中9种,除了目前已知的4种禽流感病毒和季节性流感病毒,还包括造成1918年西班牙大流感的H1N1型流感病毒。     

犬腺病毒Ⅱ型弱毒疫苗株的分离、鉴定与筛选

应用犬肾传代细胞 (MDCK) ,通过人“O”型红细胞吸附和氯仿处理等方法 ,从美国犬四联弱毒疫苗中分离出一株腺病毒 ,经形态、理化及生物学特性等系统鉴定证明 :该毒株是犬Ⅱ型腺病毒 ,命名为CAV2 XN3 株。实验将该病毒复制成弱毒疫苗 ,免疫 8只 2月龄当地幼犬 ,经临床观察证明 ,试验犬未出现不良反应 ;免疫后 14天采血测定血清中和抗体效价达到 1∶12 8,免疫后 2 5天血清中和抗体效价达到 1∶2 5 6 ,免疫后 10个月降至 1∶32 ,但仍能耐受强毒攻击 ,而对照组 4只犬则发病死亡。表明该弱毒疫苗激发免疫快 ,免疫期长 ,安全有效。     

血小板生理机制的研究——血小板膜糖蛋白单克隆抗体的产生和应用

课题是由苏州医学院血栓与止血研究室阮长耿教授等申请并进行研究的。他们应用杂交瘤技术在国内首次成功地获得了14株抗人血小板单克隆抗体,其中SZ-2和SZ-21两株,经免疫和生化研究技术证明,分别作用于血小板膜糖蛋白Ⅰ和糖蛋白Ⅲ。     

TCTE3mRNA在人肝癌细胞株中的表达特征

探讨TCTE3 mRNA在人肝癌细胞株中的表达水平及意义。采用实时荧光定量PCR技术分别检测TCTE3基因在常规培养或缺氧诱导（CoCl2为诱导剂）的人肝癌细胞株中的表达情况。TCTE3 mRNA在常规培养的人正常肝细胞株L02,肝癌细胞株Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和QGY-7701中不表达或极低表达;但经缺氧诱导后,SMMC-7721细胞中的TCTE3 mRNA表达量逐渐升高,4h达到最大,随后逐渐降低,与HIF1a mRNA表达的曲线变化有一定相似之处,只是这种变化的时间要早于HIF1a基因。在缺氧状态下肝癌细胞TCTE3 mRNA表达增加,且这种上调表达可能对HIF1a mRNA的表达有一定的促进作用。     

重组酵母乙型肝炎疫苗对成本的免疫效果及安全性的调查分析

目的：了解重组酵母乙型肝炎疫苗(YDV)对成人的免疫效果及安全性。方法：随机抽取健康状况良好，乙肝三项指标均为阴性，体温正常的24-55岁的财务人员132名，按0、1、6个月程序，每剂5μg／0．5ml接种卫生部北京生物制品研究所生产的重组酵母乙型肝炎疫苗。结果：免疫后抗-HBs阳转事在7个月时达高峰，以后又急剧下降。3、7、12个月时，女性抗-HBs阳转率高于男性；小于35岁组的抗体阳转率高于35岁以上组，免疫后12个月时两者之间差异显著，免疫3天后局部和全身无不良反应。结论：重组酵母乙型肝炎疫苗对成人具有良好的免疫原性和安全性，其抗-HBs持续时间及抗体几何平均滴度变化情况有待进一步研究。     

MIF通过PI3K/AKT通路对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移的影响研究

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是否通过PI3K/AKT通路对肺腺癌A549细胞的增殖、凋亡、迁移产生影响。方法:免疫组织化学技术检测MIF抗体在肺腺癌癌组织和癌旁组织中的表达情况,DEME完全培养基培养肺腺癌A549细胞株作为对照组,加入不同浓度人重组巨噬细胞移动抑制因子(rh MIF)和PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002预处理作为实验组,应用MTT(噻唑蓝比色法)观察A549细胞株的增殖情况,(2) FCM(流式细胞仪技术)检测A549细胞株凋亡情况(3) Western-Blot测定A549细胞株PI3K、p AKT及相关抗凋亡抗体p53、Bcl-2蛋白表达情况。结果:(1)免疫组化发现MIF在肺腺癌癌组织中高表达,且高表达率与癌旁组织有显著差异(2)经rh MIF刺激后PI3K、p AKT、p53、Bcl-2表达更明显,迁移更显著;(3) rh MIF对A549细胞株作用均呈浓度-时间依赖性,rh MIF在50 ng/ml 24 h对A549细胞增殖率最高,LY294002在25μmol/L 24 h对A549细胞抑制作用最显著。结论:MIF在肺腺癌中高表达,肺腺癌细胞中加入rh MIF,rh MIF刺激A549细胞株增殖、迁移,抑制凋亡,与LY294002共同作用下,A549细胞株增殖率和迁移力下降、凋亡率升高,表明MIF有可能通过PI3K/AKT通路对肺腺癌细胞的增殖、凋亡和迁移产生影响。     

地表水系除锰菌株的筛选和除锰能力比较

该研究从高锰地区地表水系的水样和淤泥中分离得到了6株具有Mn (II)氧化能力的菌株MBR1～MBR6,利用甲醛肟法对6株菌株的除锰能力进行比较,发现MBR6＞MBR5＞MBR3＞MBR1＞MBR2＞MBR4,其中MBR3、MBR5和MBR6的除锰率均在30%以上,具有进一步研究价值。     

木薯抗叶片早衰的基因工程育种

以农杆菌介导的转化方法将一个抗叶片早衰的基因成功地导入木薯基因组 .将成熟培养 1 5天后的胚状体的子叶切碎 ,与农杆菌LBA44 0 4共培养 3天 ,然后转入器官发生培养基 (MS基本培养基附加BAP 1mg/L、IBA 0 .5mg/L)附加 3 0mg/LG41 8进行筛选 .三个星期后出现抗性的愈伤、芽 .将这些抗性芽连同外植体转入茎轴生长培养基促进苗的生长 ,最后转入生根培养基长成植株 .所得抗性株经PCR、Southern分析证实部分植株为转基因株 .