内皮祖细胞与血管新生

胚胎发育早期血管的形成有两种相延续的方式:首先是血管生成(vasculogenesis),即由中胚层衍生的原始的血管内皮细胞迁移、聚集、分化,在原位形成大小相同的原始毛细血管网;随后是血管新生(angiogen-esis),即在已形成血管床的基础上内皮细胞增殖、迁移并重塑形成新血管分支,并相互连接成血管网络[1].     

构建组织工程器官血管的新种子细胞-血管内皮祖细胞

血液循环中存在着骨髓来源的血管内皮祖细胞.血管内皮祖细胞参与血管新生,具有高增殖能力和成熟血管内皮细胞相似的特性,并且取材方便.血管内皮祖细胞可能是组织工程血管、血管植入物再内皮化以及构建组织工程器官血管网络的种子细胞的理想来源.本文简述了血管内皮祖细胞的来源、细胞表面标志、生物学特性及其在组织工程中的应用前景.     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及生物学鉴定

目的:探讨成体大鼠的间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养,为其应用提供理论依据.方法:用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增,对分离的细胞进行碱性磷酸酶的检测.结果:取得较高纯度的成体大鼠骨髓MSCs,并保持细胞的活性;成体大鼠骨髓MSCs在体外培养中为贴壁生长的单个核球形细胞,培养3～4d后开始大量增殖,并形成形态均一的细胞增殖集群,对分离后所获得的细胞进行AKP染色为强阳性.结论:采用密度梯度离心结合贴壁培养法可获得较高纯度的MSCs,是实用、便捷和可行的方法.并且在体外培养条件下能大量增殖,形成形态均一的细胞集落,可以成为进一步进行细胞扩增或其他实际应用的基础.     

骨髓间充质干细胞的研究进展

骨髓间充质干细胞主要存在于全身结缔组织和器官间质中,具有多种生物学特性及分离、培养的方法,在适宜的微环境里具有多向分化潜能．本文就骨髓间充质干细胞的分离、培养及其诱导分化的最新进展做一综述．     

黑素细胞的分离与培养综述

离体培养的黑素细胞被广泛应用于黑素细胞的细胞生理、色素代谢、各种理化因子对黑素细胞的增殖和色素代谢的影响等研究领域．对黑素细胞的生物学特征作了简单介绍，重点介绍了细胞的来源、分离、培养、纯化和鉴定方法，最后对影响黑素细胞分离和培养的因素进行了讨论，从而为相关研究提供重要的细胞模型。     

四种有机溶剂对小鼠骨髓来源细胞体外生长和活力影响的量效关系分析

目的：观察乙醇、1.2-丙二醇、二甲基亚砜、吐温80对小鼠骨髓基质细胞（BMSC）、粒-巨噬系祖细胞（CFU-GM）和内皮细胞系细胞（BMEC）体外生长和活力的影响。并分析量效关系。方法：分别设置不同终体积分数有机溶剂的细胞培养体系及其对照。检测成纤维形成单位（CFU-F）和CFU-GM的集落生成率,用MTT比色法和台盼蓝排斥试验测定BMSC和BMEC的细胞活力和活细胞率。结果：乙醇为1.6%、丙二醇为1.6%、二甲基亚砜为2％、吐温80为0．005％-0．01％时,CFU-F和CFU-GM集落产率与对照纽相比显著降低（P〈0．05或〈0．01）。乙醇和丙二醇为02％、0．4％、二甲基亚砜为0.5％-1.0%、吐温80为0．002％-0．005％时,BMSC和CFU-GM的细胞活力和活细胞率与对照组相比显著减低（P〈0．05或〈0．01）。随着这几种有机溶剂在上述体积分数上增加,各相应检测指标的减低率递增。结论：乙醇、丙二醇、二甲基亚砜,吐温80在细胞培养体系中达一定含量时,对小鼠骨髓BMSC、CFU-GM和BMEC细胞具有明显的生长抑制作用和（或）细胞毒性效应。含量增高则效应更显著。     

骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展

近年来研究认为骨髓中存在骨髓间充质干细胞,具有多项分化潜能,体内实验证明其不但能分化成骨、软骨、脂肪等中胚层起源的细胞,而且能分化为神经元和神经胶质细胞等外胚层起源细胞.本文将对骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展作一综述.     

骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展

近年来研究认为骨髓中存在骨髓间充质干细胞,具有多项分化潜能,体内实验证明其不但能分化成骨、软骨、脂肪等中胚层起源的细胞,而且能分化为神经元和神经胶质细胞等外胚层起源细胞.本文将对骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展作一综述.     

大鼠脑室下区神经干细胞的分离培养与分化

目的：从新生SD大鼠脑室下区分离并培养神经干细胞．观察其生长、增殖及分化．方法：采取无血清培养和单细胞克隆技术．采用原代贴壁及传代悬浮方法．培养获得细胞克隆．利用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞．结果：从新生SD大鼠脑室下区分离的组织,经原代和传代培养均可形成细胞克隆．且具有增殖能力．原代和传代细胞巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase．NSE)抗原呈阳性．神经干细胞可分化为神经元．结论：用上述方法分离的细胞具有自我更新能力和分化潜能以及很强的增殖能力．属于中枢神经系统的干细胞．     

一种小鼠原代肝细胞的分离与培养方法

目的:探索一种高效、稳定的小鼠原代肝细胞分离方法,并延长其体外培养的时间。方法:取成年雄性C57BL/6小鼠,以含双抗的D-Hanks灌流液经肝门静脉充分灌注肝脏,然后以0.2 mg/mL的Ⅳ型胶原酶灌注消化,接着过滤、离心、洗涤,获得小鼠原代肝细胞。通过台盼蓝染色检验小鼠原代肝细胞活率,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态变化,糖原染色鉴定细胞纯度,添加ITS-X和HGF细胞因子延长小鼠原代肝细胞的体外培养时间。结果:平均每只成年小鼠肝脏可提取获得原代肝细胞约2×107个,台盼蓝染色显示细胞活率均超过95%,糖原染色结果表明此方法获得的原代肝细胞纯度高于95%,通过添加HGF和ITS-X两种细胞因子能够有效地延长肝细胞形态的体外维持时间。结论:本实验在原有小鼠原代肝细胞两步灌流分离法和培养的基础上,经过优化,成功建立了一种高效、稳定的小鼠原代肝细胞分离和培养方法,为肝脏的体外研究提供了技术保障。     

大鼠睾丸支持细胞的分离培养及鉴定

目的:通过改进大鼠睾丸支持细胞的分离方法,获得高纯度支持细胞。方法:选用18~22日龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,去除睾丸被膜、剪碎组织块,采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶单次消化,分别在37℃水浴震荡消化15min、10min,经100目细胞筛过滤收集细胞,置于37℃、5%CO2培养箱中进行培养,24h后大多数细胞完全贴壁,观察细胞生长,待长满培养瓶80%进行传代培养。显微观察不同时间段、不同代睾丸支持细胞的形态,采用免疫荧光方法对睾丸支持细胞进行鉴定。结果:显微观察可见分离培养的支持细胞胞质呈不规则的多处突起,细胞核呈圆形或椭圆形,细胞之间交织成网状;免疫荧光Vimentin特异性表达鉴定显示,所分离培养的细胞为睾丸支持细胞,经显微镜下计数其纯度达95%以上。结论:缩短两步酶消化时间,培养24h后用预冷磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗换培养液,连续传代培养至第三代,此方法简化了分离培养支持细胞步骤,同时提高了支持细胞的纯度和细胞数量。     

胎盘源细胞治疗急性辐射骨髓衰竭研究

核辐射易造成人体造血系统损伤,为此建立急性辐射骨髓衰竭小鼠模型,通过单次腹腔注射异基因小鼠多份不同胎盘源细胞／细胞因子,明确其治疗急性辐射骨髓衰竭的疗效．实验将造模后小鼠随机分为胎盘源细胞治疗组、胎盘源细胞因子治疗组、胎盘源细胞联合细胞因子治疗组以及模型小鼠对照组4组,治疗后统计分析各组小鼠存活时间．结果表明,胎盘源细胞联合细胞因子可有效延缓急性辐射骨髓衰竭小鼠的寿命（P ＜0．05）．     

人胎盘AC133+造血干/祖细胞的集落形成能力

探究了人体胎盘组织AC133+造血干/祖细胞(HSPC)的集落形成能力.选用新鲜的人胎盘组织制成单个细胞(有核细胞)悬液,经流式细胞术(FCM)分析其AC133+造血干/祖细胞的纯度,采用免疫磁性分选法(MACS)分选AC133+和AC133HSPC,分别进行粒-单集落形成单位(CFU-GM)、红系集落形成单位(CFU-E)、混合集落形成单位(CFU-Mix)培养,以评价其增殖分化能力.结果显示胎盘组织AC133+细胞百分率为4.11％,其细胞亚群集落培养形成CFU-GM的集落数为(37±3)/1×103;形成CFU-Mix的集落数为(34±5)/1×103;形成CFU-E集落数为(33±4)/1×103.胎盘AC133细胞未见集落形成.结论:人胎盘组织含HSPC,AC133+细胞具有分化为CFU-GM、CFU-Mix、CFU-E的能力;AC133膜抗原可作为胎盘HSPC的分选标志.     

大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法建立及鉴定

目的:纯化和鉴定体外培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞.方法:取1~3天新生大鼠大脑皮层细胞进行体外培养,通过差速贴壁和传代去除成纤维细胞和神经元等,采用免疫组化法检测星形胶质细胞特异性蛋白—胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定星形胶质细胞.结果:培养的细胞具有典型的星形胶质细胞形态且生长旺盛,第3代95%以上为星形胶质细胞,特异性抗原GFAP表达阳性.结论:该方法操作简单,可靠,是一种有效的新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法.     

实验用微生物菌种的分离和培养

微生物实验材料，如菌种或菌株是微生物实验所必不可少的，一般可以通过以下几个途径获得：(1)去中科院微生物所、相关大专院校生物系或微生物教研室购买；(2)去各级卫生防疫站、酿造食品厂或兄弟学校购买或索要；(3)原有菌种的定期移植。但如果上述途径都无法实现或由于种种原因一时得不到现成的菌株，那么完全可以自己动手，进行微生物菌种的分离和培养。     

细菌的纯种分离与培养

以污水处理厂的剩余活性污泥作为实验材料,在环境专业本科生中开展细菌的纯种分离与培养实验,巩固了学生专业基础理论知识,锻炼了学生实验操作技能,激发了学生学习的热情,促进了学生创新能力的培养。     

阻滞和非阻滞品系小鼠早胚体外培养的比较

收集阻滞品系昆明(Kunming,KM)小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠受精卵,以及KM小鼠和B6C3F1小鼠交叉交配所得受精卵,进行体外培养,研究阻滞品系小鼠早胚体外发育阻滞原因。结果表明,卵母细胞内在因素对子一代早胚体外发育的能力影响较大,即体外培养是否发生2-细胞阻滞与卵母细胞有关。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离、培养和鉴定

目的:探讨胚胎神经干细胞的分离、培养和鉴定方法.方法:原代培养、培养细胞生长状况观察、组织化学鉴定、流式细胞仪进行细胞凋亡分析.结果:准确分离出了神经干细胞,了解其生长规律及细胞凋亡的情况.结论:用此方法分离胚胎神经干细胞实用、便捷和可行.     

雷公藤愈伤组织诱导与悬浮培养不定芽诱导

以雷公藤茎段为材料,进行了细胞悬浮培养及植株再生诱导的研究.结果表明:愈伤组织诱导培养实验中MS+2,4-D2mg·L-1+KT1.5mg·L-1+NAA0.02 mg·L-1这个处理组中对愈伤组织的诱导培养较为合适,将获得的愈伤组织转置于1/2MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1液体培养基中,黑暗振荡培养,建立细胞悬浮培养体系,更换6次培养液后,分化出芽:分化芽诱导生根后形成植株.