比较标记基因和DNA分子杂交在检测目的基因导入受体细胞中的应用

一、根据标记基因检测
　　1.载体构建
　　目的基因要导入受体细胞一般要用到载体,根据受体细胞的不同,载体主要有质粒、动植物病毒、λ噬菌体衍生物等。基因表达载体要有启动子、目的基因、终止子、标记基因和复制起点。以pKK223-3质粒为例：     

基因工程有关问题的剖析

<正>一、目的基因和标记基因在基因工程的设计和操作中,用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是目的基因,主要是指编码蛋白质的基因,如与生物抗逆性(抗旱基因等)、生产药物(人的胰岛素基因等)、毒物降解(抗除草剂基因等)、工业用酶(淀粉酶基因等)等相关的基因以及与优良品质相关的基因(肠乳糖酶基因等);标记基因指载体上用于鉴定和选择含有目的基因的受体细胞的基因,通常是一些抗生素抗性基因等,     

关于近年江苏高考试卷中基因工程题目的思考

基因工程操作程序主要包括4个步骤:目的基因的获取、基因的表达与载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。重组DNA技术(获取目的基因和基因的表达与载体的构建)是整个     

冷诱导调节元控制的（AFP）4基因植物表达载体pBCDG的构建

抗冻肽是一类能降低细胞间体液冰点的多肽或糖肽,植物表达载体pBCD中含有抗冻肽四联体基因,将GUS基因插入到载体pBCD中对其进行改进,构成新的表达载体pBCDG,并转化农杆菌,以便对被转化植物中抗冻肽表达部位和表达剂量的检测。     

运用社会性科学议题教学 促进核心素养发展——以“基因工程的基本操作程序”为例

以“基因工程的基本操作程序”为例,运用社会性科学议题(SSI)教学,通过核心议题形成、科学证据收集、知识体系构建、学习成果整合、教学评价实施等阶段,围绕目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞、目的基因及其表达产物的检测鉴定四部分展开教学,有助于发展学生的生物学核心素养并构建多元的评价模式。     

抑癌基因PTEN载体构建及在LOVO细胞中的表达

目的:构建抑癌基因PTEN的表达载体并在LOVO细胞中表达。方法:从人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出PTEN基因片段,将PTEN基因连入pLenti6/V5载体。测序鉴定后,经脂质体转染入LOVO细胞,对细胞株进行RT-PCR和Western blot检测。结果:DNA测序证实pLenti6/V5-PTEN表达载体为阳性克隆;该表达载体转染LOVO细胞后上调了PTEN mRNA和蛋白的表达。结论:成功构建了pLen-ti6/V5-PTEN表达载体,为进一步研究PTEN在LOVO细胞中的功能奠定了基础。     

基因工程专题辅导提纲

基因工程是指将某特定的基因(DNA片段),通过载体或其他手段送入受体细胞,使它在受体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。采用基因工程的方法,能够将一种生物DNA片段(外源基因)导入另一种生物体内,使两者的遗传物质结合起来,以改变其遗传结构,从而创造出新物种或新品种。1 基因工程操作的主要步骤1.1 获取目的基因(外源基因) 利用基因“剪刀”——DNA限制性内切酶,将外源DNA切成许多片段,从中获取所需要的目的基因。1.2 目的基因和载体连接载体是基因的“运输工     

农业转基因育种发展现状和展望

198 3年 ,一株含有抗生素抗体的转基因烟草的诞生 ,拉开了农业转基因育种的帷幕。所谓农业转基因育种就是根据育种目标 ,从供体生物中分离并提取出控制某种性状的基因 (目的基因 ) ,经ＤＮＡ重组与整合或直接运载进入受体作物的基因组 ,获得稳定表达的转基因株 ,再进入田间试验 ,培育成农业生产上能应用的转基因新品种 ,并实现大面积推广。转基因育种相对于传统的杂交育种、诱变育种和多倍体技术育种来说 ,不仅缩短了育种周期 ,而且能准确地选择任何一个目的基因 (植物、动物乃至人类 ) ,从而打破了遗传物质分类上门、纲、目、科属的界限 ,…     

例谈“选择限制酶”类试题的解题策略

对近年来高考试卷中考查“选择限制酶以成功构建基因表达载体”的试题进行分析,总结归纳出6条解题策略：酶切位点在目的基因两侧和载体上必须都存在;酶切不能破坏特殊序列;善用“双酶切”,注意方向性;合理对标记基因进行酶切;酶切后的末端必须能正常连接;巧用“同尾酶”。     

细胞质基因在"三系"遗传中的作用

真核生物的许多性状是由细胞核内的基因控制的 ,而细胞质中也有控制遗传性状的基因 ,称为细胞质基因。细胞质基因和核基因一样都具有稳定性、连续性。研究得知 ,有些细胞器中含有DNA分子 ,还有一些生物细胞中含有共生结构 ,细菌细胞中也常含有质粒 ,这些都具有细胞质基因的特点。真核生物的细胞质基因存在于细胞器中 ,其典型的载体是质体、线粒体。我国科学家利用三系配套的方法培育出了小麦、大麦、谷子、水稻等许多优势杂交种 ,取得了粮食生产方面的优质、高效。三系配套育种工作的成功 ,正是充分利用了真核生物的细胞质遗传。1　细胞质…     

人体中的激素作用原理和调节实例

<正>激素通过作用于靶细胞,强有力地改变靶细胞的生理活动。激素不能激活细胞新的化学反应,但是可以改变细胞化学反应的速度。内分泌细胞分泌激素进入细胞周围的组织液,然后进入血液,随着血液循环到达机体远处的靶细胞和靶器官。激素工作原理尽管激素可以运送到机体的各个细胞,但只能作用于某些特定的细胞,这些细胞称为靶细胞。靶细胞上含有激素受体,激素与受体特异性结合激活细胞内反应。每种激素只能影响特定的靶细胞,这些靶细胞表现含有该激素的特异性抗     

植物基因工程载体—Ri质粒

植物基因工程的发展,要求有一种简便、快速而有效的方法,以便把外源基因导入宿主植物细胞中,并尽快从转化细胞再生出完整的工程植株。为此,既要求探寻合适的外源基因载体和相应的受体,又要建立有效的转化系统。目前,这两方面都已取得了很大的进展。根癌农杆菌能感染双子叶植物、裸子植物和部分单子叶     

“转化”的定义与“影印法”——对2016年高考全国理综乙卷第40题的探讨

<正>1试题某一质粒载体如图1所示,外源DNA插入到Amp~r或Tet~r中会导致相应的基因失活(Amp~r表示氨苄青霉素抗性基因,Tet~r表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后,与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有3种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下     

分子标记及其应用

广义的分子标记 (molecularmarker)是指可遗传并可检测的DNA序列或蛋白质。而现在被人们广泛接受的是狭义的分子标记的概念 ,它只指DNA标记 ,不包括蛋白质标记。分子标记是近年迅速发展起来的一种技术手段 ,它的出现使人们对于基因的准确检测、目标基因的准确转移成为现实。1　理想分子标记的条件①具有高的多态性。②共显性遗传 ,即利用分子标记可鉴别二倍体中杂合和纯合的基因型。③能明确辨别等位基因。④遍布整个基因组。⑤除特殊位点的标记外 ,要求分子标记均匀分布于整个基因组。⑥选择中性 (无基因多效性 )。⑦检测手段简单、快速…     

Lumican 基因真核表达载体的构建及其对人子宫内膜癌细胞 HEC -1A 增殖的影响

目的：克隆人Lumican基因及构建Lumican基因真核表达载体并研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖的影响。方法：取人新鲜正常子宫内膜组织,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增Lumican基因,将该基因定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建真核细胞表达载体pEGFP-N1-Lumican,用限制性内切酶酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒;将测序正确的Lumican基因通过脂质体介导下转染人子宫内膜癌细胞HEC-1A;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot 检测转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA和蛋白表达。采用MTT法观察转染Lumican基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力。结果：重组质粒pEGFP-N1-Lumican经HindⅢ和BamHⅠ酶切,获得8311 bp片段和865 bp插入片段,序列分析表明插入的片段与Gene Bank发布的序列一致;荧光显微镜下可见转染的HEC-1A细胞有绿色荧光蛋白的表达;转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA表达上调,Lumican蛋白相对上调率为74．62％（P＜0．05）。与对照组细胞比较,转染Lumican 基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的抑制率为21．35％±2．78％。结论：成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Lumican,该载体在体外能有效抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力,为以Lumican基因为靶点研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A的恶性生物学特性提供实验基础。     

日本新发现一种植物生长激素受体

日本大阪大学研究人员新发现一种名为“CRE1"的植物生长激素受体，它在细胞表面与细胞分裂素结合后，会把信息传递到细胞内部，促使细胞增殖。 据日本媒体报道，大阪大学的柿本辰男等人在实验中把荠菜种子浸泡在药品溶液里，引起基因突然变异，然后从中挑选出即使给予细胞分裂素也不会发芽的植株。他们将这些植株的基因构成与已经绘出的荠菜基因组图进行比较，最终找到了“CRE1"基因。 研究人员把“CRE1"基因植入对细胞分裂素不发生反应的酵母细胞中，酵母细胞在接受细胞分裂素后便开始增殖。研究人员因此断定，他们找到了细胞分裂素的受体。 这种细胞分裂素受体，是迄今发现的第三种植物生长激素受体。研究人员认为，它的发现将有助于揭示植物的生长机制，并有助于培育早熟、高产和延迟老化的植物品种。     

RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植耐受的影响

目的:探讨RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植免疫耐受的影响。方法:通过shRNA干扰T细胞mTOR表达后,诱导T细胞向Foxp3+Tregs细胞分化。对60只雄性SD大鼠施行30次异位节段小肠移植,随机分为A组(mTOR-shRNA转染组)、B组(mTOR抑制剂RAD001干预)和C组(移植对照组、注射生理盐水)。观察小肠移植后受体大鼠的体重变化、生存时间及移植小肠病理切片评估排斥反应程度。结果:构建的mTOR-shRNA质粒表达载体在体外能有效地抑制大鼠骨髓细胞mTOR基因mRNA和蛋白的表达。RNA干扰大鼠T细胞mTOR基因可调节T细胞的定向分化,Tregs细胞增多,而Th17细胞分化减少。抑制mTOR基因可诱导大鼠异位小肠移植的免疫耐受,减轻受体抗移植物的排斥反应,显著延长移植物的存活时间。结论:RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植耐受的研究为mTOR抑制剂(RAD001)在移植后的临床应用提供理论和实验依据。     

农杆菌介导的TaLEA1 基因对拟南芥的遗传转化

将含有TaLEA1基因的表达载体pBI121-TaLEA1经根癌农杆菌介导,利用花粉管通道法转入拟南芥,得T0代种子,抗Kan筛选得转基因植株.经PCR检测,初步证明外源TaLEA1基因已整合到拟南芥基因组中.     

重组子是什么——对2016年课标理综卷(丙卷)第40题中术语的辨析

<正>1试题与答案2016年课标理综卷(丙卷)第40题摘选:图1中的3个DNA片段上依次表示出了Eco RⅠ,BamHⅠ和Sau3AⅠ3种限制性内切酶的识别序列与切割位点,图2为某种表达载体示意图(载体上的EcoRⅠ和Sau3AⅠ的切点是唯一的)。根据基因工程的有关知识,回答下列问题:(2)若某人利用图2所示的表达载体获得了甲、乙、丙3种含有目的基因的重组子,如图3所示。这3种重组子中,不能在宿主细胞中表达目的基因产物的     

绿色荧光蛋白及其在分子生物学上的应用

许多海洋无脊椎动物体内都含有绿色荧光蛋白,这种蛋白质结构很特殊,在受到蓝光或紫外线刺激时可以发射绿色荧光,并不需要任何协同因子、底物,适合用作普遍的报告标记,尤其适合于活体细胞或组织。而且它发出的荧光稳定,检测简单,结果真实可靠。并且GFP对光漂白、氧化剂、还原荆以及其他许多化学试剂具有极强的稳定性．易于构建载体。它独特的性质引起了生物学界的广泛关注。本文简要地概述了绿色荧光蛋白及其在分子生物学上的应用,包括蛋白融合,细胞筛选,定位标记,基因表达调控,计算细胞生长速度等。