质粒与载体

本文主要介绍了几种常见的天然质粒和人工质粒及它们作为基因工程载体的应用。     

植物基因工程载体—Ri质粒

植物基因工程的发展,要求有一种简便、快速而有效的方法,以便把外源基因导入宿主植物细胞中,并尽快从转化细胞再生出完整的工程植株。为此,既要求探寻合适的外源基因载体和相应的受体,又要建立有效的转化系统。目前,这两方面都已取得了很大的进展。根癌农杆菌能感染双子叶植物、裸子植物和部分单子叶     

遗传工程的重要载体—质粒

质粒的发现可追溯到40年代.1946年美国遗传学家Lederberg和Tatum在研究大肠杆菌的有性生殖过程时,发现遗传物质的传递总是单向的,只能由供体菌向受体菌转移.这一特性后来确定是由F因子引起的.F因子又叫性因子,其遗传行为和特点明显有别于细菌染色体.因此,Lederberg等推测它是独立于染色体外的DNA分子,并提出质粒(Plasmid)这一概念,代表存在于染色体外能进行自我复制的遗传单位.现已习惯用来泛指细菌、放线菌和酵母中染色体外的DNA分子.     

遗传工程中的载体分析

狭义的遗传工程专指基因工程，它包括外源基因的分离，转移，整合与表达等一系列步骤。其中外源基因的转移需要借助载体。本文综述了载体的基本条件，几种常用载体及构建，并进一步探讨了遗传工程中选择或构建载体应当考虑的一些问题。     

病毒基因转移载体——真核基因工程的工具

病毒载体是进行真核细胞基因工程的有力工具。 病毒载体介导的基因转移,是将需要转移的外源DNA插入病毒DNA或RNA中,借助病毒的浸染机制将其携带进入体细胞,并整合入体细胞基因组中。至于RNA病毒,则可通过逆转录酶的作用产生cDNA克隆,进而用来感染机体。通常采用的逆转录病毒载体当属典型代表,并且应用最广。植物病毒载体在基因转移中也有独到用途。 就病毒基因转移体而言,由于病毒基因组结构简单,分子背景比较清楚,易于改造和操作,转染率高,有较高的靶细胞特异性,这些都是其它载体系统所无法比拟的,故在真核细胞     

细菌都有质粒吗

人教版高中《生物》（选修）全一册有两个内容提到质粒,一是基因工程中经常使用的运载体有质粒,二是细菌的结构细胞质中含有质粒,对此学生常有疑问：质粒都可以作为运载体吗？细菌都有质粒吗？其他细胞也有质粒吗？质粒只有一个吗？这里对有关知识做一简单总结。     

质粒DNA提取及电泳检测实验改革

为进一步增强学科间的交叉与渗透,提高学生灵活运用多学科知识与方法的能力,对质粒DNA提取及电泳检测实验进行改革。在改进经典碱裂解法提取质粒DNA、琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的基础上,新增试剂盒方法提取质粒DNA、超微量分光光度计检测质粒DNA以及快速单酶切鉴定质粒DNA等实验内容。改革后的实验不仅促进经典与现代技术、方法的有机结合,而且增强学科间的相互融合,取得了良好的教学效果。     

通过载体进行的植物基因转移技术

本文就植物基因工程中，通过土壤农杆菌、CaMV和脂质体介质的转基因技术作了较为详细的介绍。     

多细胞动物可从细菌获得基因

<正> DNA 离开细菌嵌入宿主染色体对人和其他哺乳动物有无影响尚不得而知。英国罗切斯特大学的一项研究发现,一种称为沃尔巴克氏菌的细菌,其基因可寄生在宿主基因中,这一研究结果表明,生物有机体有可能通过大范围的基因转移,从而快速获得新基因。研究人员在比较了细菌和其他11种物种(包括4种线虫、4种果蝇和3种黄蜂)的基因遗传密码后发现,除了3种果蝇外,其他物种的 DNA 中都嵌入了细菌的基因片段。研究人员还研究了已知其他21种无     

植物基因工程研究进展 --目的基因的克隆与载体构建

20世纪80年代以来．基因工程技术在农业上的应用取得了斐然成果，植物基因工程已成为农业绿色革命的最重要技术手段，为此对植物基因工程中目的基固的克隆，载体构建的研究进展作了综合评述．     

质粒DNA快速提取法在基础课实验中的应用

本文对质粒DNA及其结构、形态和功能进行了综述，介绍了快速提取质粒DNA的基本步骤，并对其提取过程中的注意事项进行了剖析，分析了该方法的优点。     

运载体的种类与功能

本文综述了运载体的种类、构建方法和功能应用,并对运载体的发展进行了展望。     

农杆菌转化法中的“Ti质粒转化载体系统”的简介——一道江苏高考题的奥秘解读和拓展

以2009年江苏高考卷34题中的农杆菌转化法与教材中农杆菌转化法的区别为起点,依次分析了农杆菌转化法中需要构建Ti质粒转化载体系统的原由和Ti质粒转化载体系统的类型,以期促进中学教师和学生对农杆菌转化法的全部了解。     

小量提取质粒DNA的简易方法

碱裂解法是目前最为广泛应用的质粒DNA的提取方法,本人利用0.9%NaC l溶液代替常规方法中的溶液Ⅰ,并缩短了一些步骤的反应时间,既达到了快速、简便提取质粒DNA的目的,又可以满足分子生物学后续实验的要求.     

重组质粒DNA的提取和纯化方法研究

质粒ＤＮＡ的提纯是现代分子遗传学和基因工程的重要技术，本实验对质粒ＤＮＡ的提取和纯化方法进行了比较研究．并通过改进，建立了简便、快速提取和纯化质粒ＤＮＡ的方法．利用此法所提质粒ＤＮＡ收率大，纯度高，能适于细菌转化、细胞转染及酶切分析等进一步实验研究．     

重组质粒pRSET DNA纯化方法的比较

分别采用柱式小量质粒抽提纯化试剂盒和聚乙二醇沉淀法纯化重组质粒pRSET DNA,琼脂糖凝胶电泳和DU800核酸蛋白分析仪鉴定已纯化的重组质粒pRSET DNA的纯度.结果显示,采用聚乙二醇沉淀法纯化重组质粒pRSET DNA:A260/280=1.83,试剂盒所得结果:A260/280=1.91.与试剂盒相比,聚乙二醇沉淀法获得纯化质粒的纯度没有显著性差异,常规质粒纯化实验中可用此法代替昂贵的试剂盒.     

棒状杆菌表达载体的构建

ｐＧＡ４６－４是一个带有谷氨酸棒杆菌妄动功能片断的质粒。用ＰＣＲ技术从ｐｇａ４６－４中扩增该启动子片断，将该启动子Ｔ４噬菌体Ｐ３２基因的终止子克隆到大肠杆菌质粒ｐＫ１８上，再接入棒状杆菌粒ｐＸＺ１０１４２构建一穿梭表达载体。     

mCherry标签融合SATB1真核表达质粒的构建

核基质结合蛋白SATB1调控染色质的空间结构,参与真核生物基因表达。本论文通过PCR获得SATB1目的基因,然后与载体mCherry-C1同时用EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切后,用T4连接酶进行连接。连接质粒转入感受态宿主细胞并在Kana抗性的LB培养基中培养。分离获得Kana抗性单克隆菌株并进行扩大培养后提取重组质粒。对重组质粒进行双酶切验证和DNA测序检测。本论文成功构建mCherry-SATB1真核表达质粒,为后续研究SATB1的功能机制奠定基础。     

基于质粒模型的DNA计算机算法求解背包问题

DNA计算机在求解大型科学问题中DNA链数呈纯指数增长的瓶颈亟待解决。本文提出一种将分治策略应用求解背包问题的新的基于质粒DNA计算机算法,使DNA链数可达到亚指数的O（1.414n）,其中n为背包问题的维数。与已有文献结论进行的对比分析表明：本算法将穷举算法中所需的DNA链数从O（2n）减少至O（1.414n）,利用本算法将可破解的背包公钥的维数在试管级水平上从60提高到120。     

质粒DNA提取方法的比较

以含有原核表达载体pet21a和真核表达载体EGFP的DH5α系列菌株为材料,分别采用碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA,通过凝胶电泳分析,对两种质粒提取方法的各自特点进行了比较与分析。认为碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA均可进行后续试验,但试剂盒提取法具有省时、简洁、高效的优势。同时根据在实验过程中所遇到的问题,说明了在进行质粒DNA提取过程中应当注意的问题。