一种简易提取细菌质粒DNA的方法

对常规碱裂解法小量提取细菌质粒DNA的方法进行了改进,用生理盐水代替溶液Ⅰ重悬菌体,简化了试剂配制的过程,既经济又省力.利用该方法获得的质粒DNA的量及纯度与常规碱裂解法获得的质粒DNA基本一致,完全可以满足基因工程基础实验的要求.此实验是比较适合中学实验室的学生实验,有利于基因工程实验在中学教学中的普及.     

质粒DNA提取及电泳检测实验改革

为进一步增强学科间的交叉与渗透,提高学生灵活运用多学科知识与方法的能力,对质粒DNA提取及电泳检测实验进行改革。在改进经典碱裂解法提取质粒DNA、琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的基础上,新增试剂盒方法提取质粒DNA、超微量分光光度计检测质粒DNA以及快速单酶切鉴定质粒DNA等实验内容。改革后的实验不仅促进经典与现代技术、方法的有机结合,而且增强学科间的相互融合,取得了良好的教学效果。     

重组质粒pRSET DNA提取方法的探究

通过两种从大肠杆菌中提取重组质粒pRSETDNA不同方法的比较,寻找提取重组质粒pRSET DNA的切实可行的方法.将含有目的质粒的菌株分别采用SDS碱裂解法和煮沸法进行质粒DNA小量提取,采用DU800核酸蛋白分析仪测定质粒DNA的产量及纯度.结果SDS碱裂解法获得质粒DNA产量为5.61 μg/ml菌液,A260/280=1.95;煮沸法获得质粒DNA产量为4.36μg/ml菌液,A260/280=1.78.与煮沸法相比,SDS碱裂解法获得质粒产量更多,纯度更高,更适合分子生物学常规实验的要求.     

质粒DNA提取方法的比较

以含有原核表达载体pet21a和真核表达载体EGFP的DH5α系列菌株为材料,分别采用碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA,通过凝胶电泳分析,对两种质粒提取方法的各自特点进行了比较与分析。认为碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA均可进行后续试验,但试剂盒提取法具有省时、简洁、高效的优势。同时根据在实验过程中所遇到的问题,说明了在进行质粒DNA提取过程中应当注意的问题。     

优化的密度梯度离心法提取质粒 DNA

质粒常被用做基因的载体．纯化质粒DNA的方法可以分为3种：碱裂解法、煮沸裂解法和SDS碱裂解法．这些方法可以纯化共价闭合环结构质粒DNA,而大量获得高纯度的闭环结构质粒DNA最经典方法是氯化铯．溴化乙锭密度梯度离心法．该方法经过我们的实践与优化,减少了质粒中蛋白质和基因组DNA的污染,提高了质粒的纯度和得率,所得到的质粒用于拟南芥原生质体转化,效率高达60％～70％,明显高于普通的质粒小量抽提试剂盒所提取的质粒DNA．     

质粒DNA快速提取法在基础课实验中的应用

本文对质粒DNA及其结构、形态和功能进行了综述，介绍了快速提取质粒DNA的基本步骤，并对其提取过程中的注意事项进行了剖析，分析了该方法的优点。     

改进的CTAB提取植物DNA方法

根据DNA分子的物理化学特性及植物材料的特点,改进了传统利用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取植物叶片中DNA的操作方法,采用新鲜配制的CTAB溶液、液氮快速研磨植物材料、添加适量还原剂和适量吸取提取液中核酸层等措施,减少了提取过程中提取液的褐变和杂质对DNA产质量的影响.同时,列出了提取过程中各操作步骤的注意事项和关键点.该方法操作简便、快捷,提取出的DNA质量较好,能很好地用于DNA的分子遗传特性分析,可作为教学和研究工作中植物DNA的提取方法.     

福尔马林保存的龟鳖类动物基因组DNA的提取方法

运用一种改进的DNA提取方法,从长期保存在福尔马林溶液中的龟鳖类动物的肌肉组织中成功地提取了基因组DNA。用12sRNA基因的通用引物进行PCR扩增,并对部分扩增结果进行测序,以检验提取效果：结果证明改进的提取方法效果较好,所得产物可以满足分子生物学研究的要求。     

紫外照射对大肠埃希氏菌质粒DNA影响的研究

本研究对大肠杆菌进行紫外照射诱变后,获得了通过其内部的SOS修复系统产生的突变菌株,采用异丙醇沉淀法对各组菌种进行质粒DNA提取.通过测定各组OD值,经过比较与分析得出了经紫外处理10min后的大肠杆菌质粒DNA浓度最高,为215ug/ml,其次为正常组的190ug/ml.经紫外照射30min后的大肠杆菌质粒DNA浓度最低,仅为65ug/ml.紫外处理时间与质粒DNA浓度整体呈现下降趋势.初步推测是由于大肠杆菌SOS修复系统的RecA蛋白促进了不完全同源的DNA序列之间的重组,产生大量的错配碱基,从而引起突变,进而影响到其质粒DNA的浓度.     

对生物化学实验《猪脾脏DNA提取与二苯胺测定法》中DNA提取简化方法的两点意见

从动物组织中提取DNA是根据DNA与RNA、蛋白质在不同溶液中溶解度的不同。在简化的猪脾脏DNA的提取方法中有两点可能导致实验结果不理想。现就此做出相应的对照实验,加以验证。     

重组质粒DNA的提取和纯化方法研究

质粒ＤＮＡ的提纯是现代分子遗传学和基因工程的重要技术，本实验对质粒ＤＮＡ的提取和纯化方法进行了比较研究．并通过改进，建立了简便、快速提取和纯化质粒ＤＮＡ的方法．利用此法所提质粒ＤＮＡ收率大，纯度高，能适于细菌转化、细胞转染及酶切分析等进一步实验研究．     

重组质粒pRSET DNA纯化方法的比较

分别采用柱式小量质粒抽提纯化试剂盒和聚乙二醇沉淀法纯化重组质粒pRSET DNA,琼脂糖凝胶电泳和DU800核酸蛋白分析仪鉴定已纯化的重组质粒pRSET DNA的纯度.结果显示,采用聚乙二醇沉淀法纯化重组质粒pRSET DNA:A260/280=1.83,试剂盒所得结果:A260/280=1.91.与试剂盒相比,聚乙二醇沉淀法获得纯化质粒的纯度没有显著性差异,常规质粒纯化实验中可用此法代替昂贵的试剂盒.     

萤火虫萤光素酶基因转化花叶芋及表达的研究

将萤火虫萤光素酶基因重组到质粒pBR325中,通过“三亲交配”和同源重组,将萤光素酶基因整合到Ti质粒pGV3850:1103。通过改良的叶盘转化法,用萤光素酶基因转化单子叶植物花叶芋,获得转基因植株。对再生植株的胭脂碱测定、新霉素磷酸转移酶分析、DNA点杂交、萤光素酶基因活性测定,证明萤光素酶基因已转化到花叶芋中并进行了表达。     

An easy-to-use site-directed mutagenesis method with a designed restriction site for convenient and reliable mutant screening

Site-directed mutagenesis (SDM) has been a very important method to probe the function-structure relationship of proteins. In this study, we introduced an easy-to-use, polymerase chain reaction (PCR)-based SDM method for double-stranded plasmid DNA, with a designed restriction site to ensure simple and efficient mutant screening. The DNA sequence to be mutated was first translated into amino acid sequence and then the amino acid sequence was reversely translated into DNA sequence with degenerate codons, resulting in a large number of sequences with silent mutations, which contained various restriction endonuclease (RE) sites. Certain mutated sequence with an appropriate RE site was selected as the target DNA sequence for designing a pair of mutation primers to amplify the full-length plasmid via inverse PCR. The amplified product was 5'-phosphorylated, circularized, and transformed into an Escherichia coli host. The transformants were screened by digesting with the designed RE. This protocol uses only one pair of primers and only one PCR is conducted, without the need for hybridization with hazardous isotope for mutant screening or subcloning step.     

Effects of medium composition on the production of plasmid DNA vector potentially for human gene therapy

INTRODUCTION The difficulties associated with large-scaleproduction of biotherapeutics provide a constantchallenge to the biotechnology industry. FDA hadadded “therapeutic DNA plasmid vectors” to the listof well-characterized biotechnology product (DoHHs,1996), and gene therapy has moved rapidly fromlaboratory scale to clinical trials. It is urgent to de-velop new protocols to obtain high-quality plasmidswith high yields and minimal or no contamination ofRNA and chromosomal D…     

水平基因转移与物种演化

遗传学、基因组学和生物信息学业已证明，由病毒、类病毒、质粒等介导的细胞、个体和物种之间的水平基因转移广泛地存在于细菌、古生菌和真核生物中，水平基因转移可能造成同一生境中物种分化的抑制，种群的快速协同进化，不同物种的趋同进化、返祖遗传、获得性状(基因)遗传和家族成员的性状趋同等。因此，水平基因转移是物种进化的一个重要驱动力。     

以β-淀粉样蛋白为靶的表达载体的构建及鉴定

饱和苯酚氯仿法提取Tg2576转基因鼠基因组DNA,PCR法扩增编码β-淀粉样蛋白的目的基因,利用基因克隆技术构建以β-淀粉样蛋白为靶的表达载体pcDNA3.1-Aβ42×2,应用酶切及测序鉴定表达载体.相应的双酶酶切能够获得插入的目的基因片段(为269bp),测序未发现突变,表达载体构建成功.     

重组大肠杆菌高效分泌表达α-1-6-葡聚糖酶

以pLF3为模板,PCR扩增得到葡聚糖酶的启动子,并将启动子基因重新连接到切除启动子基因及葡聚糖酶基因的pLF3载体上,构建pLF3-pro载体.采用PCR的方法扩增朱黄青霉总DNA中的α-1-6-葡聚糖酶基因,并插入到pLF3-pro载体上,构建pLF3-Pro-Dex质粒,以大肠杆菌DH5α为宿主菌,酶切验证及PCR验证均表明成功构建了pLF3-Pro-Dex质粒,且重组质粒中的α-1-6-葡聚糖酶基因与朱黄青霉中的α-1-6-葡聚糖酶基因有93%的同源性.