大葱叶际生防细菌筛选及对紫斑病防效研究

为了挖掘大葱紫斑病生防资源,研究采用培养法从大葱叶际分离细菌,然后用对峙培养法筛选大葱紫斑病菌生防细菌.结果表明:大葱叶际细菌群落中嗜甲基单胞菌、鞘氨醇单胞菌属、微杆菌属、假单胞菌属于优势细菌类群.从中筛选出1株对大葱紫斑病菌具有较好拮抗活性的菌株X85,经形态特征和16S rDNA序列鉴定为亚麻假单胞菌.田间试验表明...     

苯酚降解菌株JY04的筛选、分离与鉴定

以绝缘材料厂活性污泥作为研究材料,以期获得一些酶活较高的苯酚降解菌.试验采用苯酚为唯一碳源的培养基进行筛选、16S rDNA序列扩增与序列测定以及构建系统发育树的方法进行细菌的分离与鉴定.结果表明:菌株JY04与葡萄球菌属的菌株聚为一簇,与Staphylococcus nepalensis E3菌株在同一分支中,且16S rDNA核苷酸序列相似性高达99%以上,因此,命名为Staphylococcus sp.JY04.     

杜鹃内生细菌的分离鉴定及抗性测定

以牛肉膏蛋白胨和NA培养基为分离培养基,研究从杜鹃中分离内生细菌和抗生素测定的方法.通过组织分离法从毛白杜鹃(R mucronatum)中分离培养后并用划线法分离得到内生细菌的纯培养物.通过菌落形态的观察和鉴别,革兰氏染色并镜检初步鉴定为5株不同的内生细菌.利用利福平及链霉素梯度平板法筛选得到相应的抗性突变株(3株),此突变株可作为细菌内生性鉴定中的抗生素标记菌株.组织分离时的表面消毒条件和方法直接影响内生细菌的分离纯化结果,表面消毒条件适宜则分离得到的内生细菌多样性增加.     

贵州铜仁产广谱抑菌作用细菌素乳酸菌的筛选及鉴定

从贵州铜仁产发酵食品中分离纯化出70余株乳酸菌,采用Agar-spot-test初筛与排除酸、过氧化氢抑制后复筛出一株能产广谱抑菌作用细菌素的乳酸菌（编号G55）,经生理生化及16S rDNA鉴定可知G55为植物乳杆菌。抑菌谱实验表明,G55产生的细菌素能抑制革兰阳性菌及革兰阴性菌的生长;蛋白酶实验表明,G55产生的细菌素对胃蛋白酶、蛋白酶K敏感,对胰蛋白酶、α凝乳蛋白酶部分敏感。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏分析

采用常规细菌分离鉴定方法和分子生物学技术对四川某规模化猪场疑似副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)感染的病猪关节液、心包液、肺脏等病料进行了致病菌的分离与鉴定.经细菌分离培养特性、生化试验以及16S rDNA序列PCR扩增,确定分离菌株为HPS.动物致病性试验结果表明,分离菌株具有较强致病性.药敏试验表明,该HPS菌株对青霉素、链霉素、磺胺甲唑、林可霉素、苄唑西林等多数抗生素耐受,而对新霉素、头孢噻肟等较敏感.     

16S rRNA序列分析在皖南花猪病原菌分离鉴定中的应用研究

为了解地方品种皖南花猪细菌感染情况,运用16S rRNA基因序列分析方法鉴定从皖南花猪地方品种猪分离的8种细菌.通过提取细菌DNA,采用通用引物PCR扩增16S rRNA基因片段并测序.将测序结果用BLAST在线软件在Nucleotide数据库中进行序列同源性比对,根据序列同源性鉴定病原细菌.结果表明:7种细菌鉴定到"种",1种细菌鉴定到"属". 16S rRNA基因序列分析对于皖南花猪病原菌鉴定是一种有效的方法 .     

鸡肠道中植物乳杆菌JX98所产细菌素的理化特性研究

从鸡肠道内容物中分离筛选出1株产细菌素的菌株,通过生理生化法和16S rRNA测序分析进行鉴定。采用牛津杯法对抗菌肽的抗菌谱进行研究,利用N-羟甲基甲基甘氨酸-SDS-PAGE电泳确定细菌素的相对分子质量。     

脱硫菌16S rDNA片段的克隆与序列分析

生物脱硫技术在能源工业发展和环境保护等方面显示出潜在的优势。本文利用NaAc法抽取总DNA作模板，用真细菌专一性引物进行PCR方法扩增HB2的16S rDNA片段并进行琼脂糖凝胶的回收，选用PUCm—T—vector，用T4连接酶连接，转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞，然后在含氨卞青霉素Ap／IPTG／X2gal的平板上筛选阳性克隆，PCR检测阳性克隆最后进行测序。结果表明，所测片段序列与多种假单胞杆菌的16S rDNA的同源性达98％以上。     

一株互花米草耐重金属内生菌的分离及其特性分析

利用微生物分离培养方法从互花米草根部和叶片获得内生细菌,经重金属筛选,分离到一种耐受重金属Cu2＋、Pb2＋和Cr6＋的细菌．为了进一步鉴定分离菌株,利用 PCR 方法扩增其部分16S rDNA 序列,目标DNA条带约1500 bp,测序和在线分析结果后显示,所测序列均与基因库中已上传的 Lysinibacillus sphaericus菌株16S rDNA 序列（KJ878614．1,JN613478．1）相似性均为100％．初步鉴定该菌为 Lysinibacillus属球形芽孢杆菌（Lysinibacillus sphaericus）,命名为Lysinibacillus sphaericus QZ1-1．对该菌株采用促生长特性分析结果显示,该菌株具有产生 IAA和 ACC的能力,同时该菌能在无氮培养基中生长,具备固氮功能,为日后重金属污染生物修复相关研究提供了良好的目标菌株．     

玻璃珠法提取堆肥微生物总DNA及其DGGE分析

采用玻璃珠法从高温堆肥样品中进行了微生物总DNA的提取,以细菌16S rRNA基因 V3区通用引物进行了PCR扩增,随后用变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术对其微生物多样性进行评估.结果表明,玻璃珠法能够快速、有效地获得高质量的堆肥微生物总DNA,所得的DNA分子片段在15kb以上,使用细菌16S rRNA 基因通用引物(27F和1492R)对总DNA进行PCR扩增,获得了近全长的16S rDNA序列(约1.5kb);DGGE分析结果表明,用该方法提取到的DNA种类较为丰富,多样性较好,能够进一步应用于群落结构分析.因此,玻璃珠法提取的DNA可以用于堆肥微生物的分子生态学研究及微生物群落结构分析.     

基于12S rDNA的四种中国豹蛛的分子鉴定(蜘蛛目,狼蛛科)

本研究对自测的我国豹蛛属pardosa三种(拟环纹豹蛛Pardosa pseudoannulata、沟渠豹蛛Pardosa laura、星豹蛛Pardosa astrigera)和从GenBank中下载的一种中国豹蛛(沙地豹蛛Pardosa takahashii)的12S rDNA序列片段进行了同源性比较和碱基序列分析.结果表明:这四种中国豹蛛该基因片段的299bp中有24个变异位点比较稳定;从这四种中国豹蛛与其各自鉴别位点的对应关系可知,12S rDNA可以作为该四种豹蛛种类鉴别的分子标记.     

运用16S rRNA基因分析鉴定鲫鱼的致病菌

应用16S rRNA基因序列分析法分析鉴定从鲫鱼病变部位分离的未知菌种,证实这一方法运用于水产致病菌检测的可行性.使用设计的引物PCR扩增16S rRNA基因序列并测序,根据序列的同源性比对来鉴定菌种.结果显示:16个未知细菌样品中被鉴定出的菌株分别属于芽孢杆菌、气单胞菌、短波单胞菌、希瓦氏菌等,其中气单胞菌属于常见的致病菌.结论:16S rRNA基因序列分析是一种快速、精准、便捷的鉴定技术,可作为鉴定水产鲫鱼致病菌的重要手段.     

一株高产黑色素链霉菌的分离筛选和初步鉴定

从鄱阳湖草洲土壤中分离出一株高产黑色素的细菌(g2B),g2B具有产黑色素速度较快,并且不需要Tyr诱导等优点.在同等条件下其产黑色素能力最强,经提取纯化后产量可达19mg/mL.纯化后的黑色素的红外光谱与SIGMA公司标准黑色素红外光谱图谱基本一致.生理生化分析结果及16s rDNA扩增和序列分析鉴定其种属类型,初步鉴定g2B属于Streptomyces sp..     

猪链球菌分离株的病原学特性

从病死猪体内分离到3株链球菌，并进行了病原学鉴定。细菌在形态上呈链球菌的特征，β或α溶血，分离株的生化试验结果相似，且都不与A～G链球菌群特异性血清发生凝集。经PCR鉴定。结果表明，3株均为猪链球菌2型。动物试验结果表明，3分离株对小鼠的毒力较低，但能在接种细菌12～15d后使小鼠发病致死。     

酸奶在储存过程中菌群结构变化研究

为了探究酸奶储存过程中微生物菌群结构的变化,为其长期贮存奠定理论基础.采用酚/氯仿法抽提细菌基因组DNA,以此作为PCR反应的模板,进行16S rDNA基因有效扩增,并将PCR扩增产物进行DGGE电泳.用Bionumerics软件对DGGE分子指纹图谱进行舌苔菌群结构相似性分析.实验结果表明,采用该方法成功地扩增出16S rDNA V3区片段,为230 bp.DGGE分子指纹图谱结果表明,1、2号酸奶样品高相似性为93%,1-3号与4-7号的相似仅为6%,表明酸奶贮存过程中,菌群结构发生了变化.     

HBV核酸光敏生物素探针的制备

利用设计合成的特异性引物，通过PCR扩增获得乙肝病毒的S区621个bpDNA片段．该扩增产物经EcoRI与BamHI双酶切后直接克隆进入PSK载体进行表达，再通过扩增重组菌株，以获得大量的S区DNA片段，对它们进行光敏生物素标记，制成探针，对乙肝病毒进行检测灵敏度高，特异性强，其灵敏度可达到4pg水平。     

核盘菌多聚半乳糖醛酸酶基因的克隆及hpRNAi载体的构建

多聚半乳糖醛酸酶是核盘菌致病力发挥作用的关键酶。本研究用PCR的方法从核盘菌基因组DNA中扩增出多聚半乳糖醛酸酶（PG5）基因片段,再以扩增出的PG5基因片段作为模板设计引物扩增出一个相应较小的片段。将两个PG5基因片段反向插入到植物表达载体2300 sn的35S启动子和nos终止子之间,构建出可转录表达出发夹RNA结构的组成型油菜RNA干扰载体,为今后油菜利用RNA干扰抗菌核病的基因工程研究奠定了基础。     

API细菌鉴定系统应用于环境微生物学实验

API 20E细菌鉴定系统(API 20E System)采用多个生物化学指标和数据库对肠杆菌科和其它革兰氏阴性杆菌进行鉴定。从环境中分离到的细菌经革兰氏染色和氧化酶试验后,若均呈阴性结果,就可选用API 20E细菌鉴定系统鉴定细菌。将本方法应用于学生教学实验,使学生的能力得到提高,取得很好的效果。     

“遗传的物质基础”中易混概念辨析

1转化和转导 转化是指从一个细菌品系(供体)分离和提纯DNA，作为转化因子，处理另一个细菌品系(受体)，部分受体细菌吸收供体DNA，掺入基因组中，导致受体某些遗传性状定向转变的现象。如S型肺炎双球菌中的DNA能使部分R型菌转化为S型菌。转化现象在细菌中十分普遍，甚至在真核细胞中也存在转化现象。     

肠道菌群结构多样性初筛研究

目的：探讨研究肠道菌群结构的初筛方法,为进行有效、高质量的高通量测序奠定基础.方法：用粪便采样器采集健康儿童粪便进行粪便标本预处理后,采用酚—氯仿方法提取样本菌群基因组DNA,并进行16S rDNAV3区片段PCR扩增,扩增产物用变性梯度凝胶电泳法（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）检测分析.结果：采用该方法成功地扩增出16S rDNA V3区230bp的片段,经DGGE的方法可以比较出不同儿童粪便样本菌群结构的不同.结论：基于16S rDNA V3区的PCR-DGGE技术能够应用于研究肠道微生物多样性,对于肠道微生物的研究起到了初筛的作用.