大豆降解组文库microRNAs的启动子分析(英文)

研究目的:通过分析miRNA的核心启动子和顺式作用元件为进一步解析大豆(Glycine max)miRNAs表达调控及其功能研究提供重要信息。创新要点:利用生物信息学方法全面解析了大豆降解组文库miRNA的启动子特征,并依据顺式作用元件及靶基因构建了miRNA的表达与生长素响应因子、赤霉素响应因子之间存在潜在的负反馈调控网络。研究方法:本研究利用TSSP程序和PlantCARE数据库预测了来自大豆降解组文库的440个miRNA的核心启动子以及369个miRNAs的顺式作用元件,并依据顺式作用元件及靶基因构建miRNA调控网络。重要结论:83.86%的miRNA在其上游序列中含有启动子,8.64%的miRNA在其下游序列中含有启动子,21.59%的miRNA包含增强子。核心启动子的TATA盒与转录起始位点(TSSs)的分布相似。此外,对转录起始位点5'端的顺式作用元件预测为miRNAs的可能功能和表达的时空性提供了线索。miRNAs的顺式作用元件和靶基因的分析显示,部分miRNA的表达与生长素响应因子、赤霉素响应因子之间存在潜在的负反馈调控。     

缺氧诱导因子-1研究进展

缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是1992年Semenza和Wang[1]首先发现的,随后确立了HIF-1的结构,并证明了其cDNA的编码顺序.HIF-1普遍存在于人和哺乳动物细胞内,常氧下(21%O2)也有表达,但合成的HIF-1蛋白很快即被细胞内氧依赖性泛素蛋白酶降解途径所降解,只有在缺氧条件下HIF-1才可稳定表达[2].HIF-1是具有转录活性的核蛋白,具有相当广泛的靶基因谱,其中包括与缺氧适应、炎症发展及肿瘤生长等相关的近100种靶基因[3,4].当其与靶基因结合后,通过转录和转录后调控使机体产生一系列反应,有些反应尽管带有适应代偿性质,但也常给机体带来病理性损害,如低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)、肿瘤加速生长等.     

转基因大豆质粒DNA标准物质的研制

为了方便、快速地检测大豆及其加工食品中的转基因成分,准确定量转基因大豆的转基因含量,构建含常用转基因插入元件花椰菜花叶病毒Ca MV35S启动子、NOS终止子、新霉素磷酸转移酶基因NPTⅡ、玄参花叶病毒FMV35S启动子和大豆内源基因Lectin-1的质粒DNA标准物质,质粒DNA中靶基因元件均为单拷贝。开展了质粒DNA标准物质的均匀性、稳定性、检测适用性、定值及不确定度评价。结果表明,在实时荧光定量PCR(q PCR)检测中,质粒DNA的4种转基因插入元件分别与大豆内源基因Lectin-1的比值为0.98±0.06(Ca MV35S:L-1),0.95±0.06(FMV35S:L-1),1.05±0.08(NOS:L-1),1.11±0.08(NPTII:L-1)(k=2),靶基因扩增的标准曲线R20.99,可用于转基因检测实验室的结果质量控制,能力验证等活动。     

钙结合蛋白S100A9基因与口腔鳞癌相关性分析

目的:研究S100A9蛋白表达与口腔鳞癌分化、转移的关系。方法:采用免疫组化SP法检测35例口腔鳞状细胞癌患者口腔黏膜组织中S100A9的表达,并结合临床资料对S100A9基因差异性表达与口腔鳞癌病人临床病理参数进行相关性分析。结果:S100A9在口腔鳞癌中高表达与癌旁正常口腔黏膜组织比较具有显著性差异(P <0. 05)。S100A9的表达水平与淋巴结转移成正相关。S100A9蛋白与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度及临床分期无关(P> 0. 05)。结论:S100A9基因表达和口腔鳞癌的发生发展、侵袭转移密切相关; S100A9可作为判定口腔鳞癌恶性程度及评价预后的重要指标,也可作为新的生物标志物及治疗口腔鳞癌浸润转移的潜在靶目标。     

人类睾丸凋亡相关基因蛋白(TSARG2)在大肠杆菌中的表达和纯化

目的获得重组TsARG2基因蛋白,为进一步研究其功能和制备特异抗体奠定基础.方法根据已报道的TsARG2基因序列,采用RT-PCR的方法获得TsARG2基因.将所得的PCR产物插入原核表达载体pQE30中,得重组质粒(pQE/TSARG2)并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有六个组氨酸的融合蛋白,采用镍固定金属亲和层析法纯化.结果序列分析表明TSARG2基因成熟肽编码区含有918bp,编码305个氨基酸;与GenBank(AY040204)中已报道的TSARG2分离物的核苷酸序列有100%同源性.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的66%,分子质量约为35kDa.经Ni2 -NTAagarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.结论在大肠杆菌中获得了TsARG2基因蛋白的高效表达,为研究其生物学功能和制备单克隆抗体奠定了基础.     

农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理研究

该文就农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理进行研究。方法一:分析vpb1基因启动子序列;方法二:对探测载体中vpb1基因启动子的转录活性进行验证;方法三:设计vbpl基因启动子序列突变位点。结果:(1)基于荧光蛋白表达情况来看,在pRSET-A质粒中的vbpl基因启动子能够将荧光基因的表达予以正常启动。(2)能够正确构建pRSET-m1突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着SigmaA结合位点的去除而降低。(3)能够正确构建p RSET-m2突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-65位碱基的突变而增强。(4)能够正确构建pRSET-m3突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-66位和-68位碱基的突变而消失。结论:深入研究农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理,能够找出影响农杆菌的VBP蛋白表达的相关因素,有可能使所获得的农杆菌菌株具有较高的转化效率,以便能够有效提高植物转基因效率。     

miR-718和EGR3参与调控肝癌细胞系的恶性表型的研（英文）

目的:研究mi R-718和早期生长反应蛋白3(EGR3)在肝癌细胞系Hep G2及SMMC-7721中对细胞恶性行为的作用。创新点:首次在肝癌细胞系Hep G2和SMMC-7721中发现miR-718作为抑癌基因及EGR3作为促癌基因起到调控肿瘤恶性行为的作用。方法:采用聚合酶链反应(PCR)方法构建mi R-718和EGR3的过表达及敲降质粒,并采用实时定量PCR(q RT-PCR)方法验证质粒有效性;采用MTT法和克隆形成实验检测肝癌细胞系HepG 2和SMMC-7721的生长增殖能力;采用Transwell迁移侵袭实验检测肝癌细胞系Hep G2和SMMC-7721的迁移和侵袭能力;采用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光报告载体实验验证miR-718的靶基因;采用qR T-PCR和蛋白质印迹(Western blot)检测相关基因表达水平的变化。结论:mi R-718在肝癌细胞系HepG 2和SMMC-7721中起到抑癌基因的作用;EGR3在肝癌细胞系Hep G2和SMMC-7721中起到促癌基因的作用;miR-718是通过靶定EGR3 m RNA 3'UTR下调EGR3的表达起到抑癌基因的作用。     

Gga-miR-29b-3p抑制MDV转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达

目的:研究gga-miR-29b-3p对马立克氏病(MD)肿瘤转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达的影响.方法:选取SPF白来航鸡在感染马立克氏病病毒(MDV)后引发的内脏淋巴瘤为样本,通过实时荧光定量PCR检测gga-miR-29b-3p的表达情况;利用在线生物软件对gga-miR-29b-3p潜在的靶基因进行功能分析.以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞侵袭相关基因MM P2和MM P9以及MDV原癌基因Meq的表达情况.结果:Gga-miR-29b-3p在感染MDV白来航鸡的肿瘤化脾脏和肝脏淋巴瘤中均显著低表达.信号通路方面miRNA的预测靶基因分别参与FoxO信号通路、mTOR信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll样受体信号通路、ErbB信号通路、VEGF信号通路和细胞凋亡等,这些信号通路可参与肿瘤发生进程.转染miRNA激动剂后,MMP2和MMP9基因的表达量在48 h显著下调(P<0.05);Meq基因在48 h表达显著下调(P<0.05).结论:Gga-miR-29b-3p抑制细胞侵袭和病毒原癌基因的表达,其潜在靶基因能够介导肿瘤发生,提示该miRN A可能参与M D肿瘤转化过程.     

人类基因

人类基因 基因的遗传学概念是代表生物的遗传物质,是生物性状遗传的基本功能单位。基因的分子生物学概念是指DNA双螺旋链上的一段核苷酸序列,它携带着能在特定条件下表达的遗传信息,表现出特定的生理功能。 人类基因现代的定义是:合成有功能的人体蛋白质多肽链或RNA所必须的全部DNA序列。按功能大致可将其分为:(1)结构基因(structure gene),是编码蛋白质多肽链,又称蛋白质基因。(2)调节基因(regu1ator gene),对结构基因表达起调控作用,     

日本七鳃鳗pcna基因克隆、生物信息学分析及真核表达

增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),也称周期蛋白或DNA聚合酶的辅助蛋白,是真核细胞合成所必需的核蛋白,在DNA复制中起重要作用。前期实验发现日本七鳃鳗肝脏cDNA文库的表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)中存在与高等脊椎动物pcna基因同源的序列。提取日本七鳃鳗(Lampetra japonica)肝脏组织RNA,通过RT-PCR方法扩增七鳃鳗pcna基因,对其进行生物信息学分析,并将Lj-pcna基因成功构建到pGFP-N2真核表达载体上,重组质粒PGFP-N2-Lj-pcna转染人Hela细胞,荧光显微镜下观察有荧光蛋白的表达。日本七鳃鳗pcna基因的真核表达载体成功构建和转染,为探讨七鳃鳗pcna基因功能研究及其它七鳃鳗相关研究提供条件。     

非线性混合似变分不等式解的存在性

本文介绍了自反Banach空间中一类非线性混合似变分不等式，利用极大极小不等式和辅助变分原理技术，给出了这类非线性混合似变分不等式解的存在性与唯一性的新证法。     

连锁挡车栏设计研究

煤矿井下倾斜井巷串车提升运输事故多发、安全设施不完善,经常会出现跑车事故。为此研制了一种新型斜巷挡车联动安全装置,实现挡车装置的常闭、连锁;使其操作方便、省力、实用。操作时一次只能打开一处挡车栏(一开一闭),车组进入斜巷前,打开挡车栏,车组通过斜巷变坡点后操作手把复位,挡车栏自动关闭,由于使用了定滑轮和利用平衡原理,可有效平衡挡车栏重力,达到操作省力的目的。     

鲁迅小说中的短语"......似的"

“……似的”在文学作品中是个很常见的短语,虽然从1982年陆俭明先生《析“像……似的”》发表以来,人们对这一短语作了很多研究,但大多是对其语义进行分析,很少有人对其功能作全面的考察。全文考察了鲁迅三部小说集中所有的短语“……似的”,并从组合功能、句法功能、语用功能等三个方面进行描述,旨在进一步全面地认识这一短语的性质和功能。     

提高搅拌实验模拟混合沉淀工艺的相似性探讨

本文通过对混凝动力学基本公式进行推导,求出水力梯度G值与搅拌实验转速的关系,同时对自来水厂混合、絮凝、沉淀三个净水处理工艺条件进行计算,依据计算结果对烧杯混凝搅拌实验进行改进,提高模拟工艺的相似性,为生产运行提供更为精确的实验数据,取到很好的经济效益。     

基于新型螺旋相位滤波器提高图像边缘增强对比度的方法

提出了利用类贝塞尔螺旋相位滤波器实现提高图像边缘增强对比度的方法．给出了普通螺旋相位滤波器和类贝塞尔螺旋相位滤波器的点扩散函数,并利用圆孔、汉字和洋葱表皮细胞等三幅图像进行了边缘增强的模拟计算,发现与普通螺旋相位滤波器的图像边缘增强结果相比,基于类贝塞尔螺旋相位滤波器的图像边缘增强对比度得到显著提高．     

Cr3锻钢平整工作辊"桔皮"原因分析及改进措施

某热轧带钢厂Cr3材质锻钢平整工作辊每次上机服役仅生产1000t钢卷即需换辊修磨，严重影响产品质量和轧辊使用寿命。对Cr3材质锻钢工作辊进行硬度、金相组织等检验发现，虽然辊面金相组织正常，但是硬度偏低，导致在使用过程中出现塑性变形，表明这种材质的工作辊不适合在“干”平整的工况条件下用作热轧平整工作辊。建议采用具有更高耐磨性、更高热稳定性的高速工具钢、半高速工具钢和改进型高NiCr无限冷硬铸铁工作辊等材质工作辊代替Cr3材质锻钢工作辊，以提高生产效率和轧辊寿命。     

辅助方程法求变系数Boussinesq方程的精确解

以辅助方程法为基础,结合函数变换,借助符号计算系统Mathematica构造变系数Boussinesq方程的新的类孤子解和三角函数波解。     

Na2O2与SO2反应产物的实验探究

针对学生提出的SO2能否与Na2O2发生氧化还原反应的问题,从分析可能发生的反应情况入手。指导学生自主设计实验方案,自主选择所需仪器、药品,并进行实验探究,通过实验探究得出实验结论。     

应用"2+2"教师评估法促进教师专业发展——从评价的视角关注教师专业成长

介绍教师专业发展的内涵及实现模式,并阐释“2＋2”教师评估法及其要素组成,分析“2＋2”教师评估法的优势。在此基础上,从评价的角度探讨如何利用“2＋2”教师评估法促进教师的自我反思实践,进而提高教师专业发展。     

应用"2+2"教师评估法促进教师专业发展——从评价的视角关注教师专业成长

在介绍教师专业发展的内涵及实现模式的同时,研究"2+2"教师评估法及其要素组成,分析了"2+2"教师评估法的优势,在此基础上,从评价的角度探讨如何利用"2+2"教师评估法促进教师的自我反思实践,进而提高教师专业发展.