手性氨基酸对DNA链式聚合反应的影响

构成天然蛋白质的氨基酸为L构型,D构型氨基酸虽然不是构成蛋白质的基本结构单元,但许多植物、微生物甚至在人体中都有D-氨基酸的存在.DNA聚合酶链式反应广泛发生在生物体内及PCR实验中,首次探究手性氨基酸及其与金属离子协同条件下对Taq-DNA聚合酶催化下的DNA链式聚合反应的影响情况,为进一步研究手性氨基酸及金属离子对...     

几种参与DNA复制的酶和蛋白因子

1953年Watson和Crick发表的DNA双螺旋模型原则上解决了DNA复制的基本机制.对DNA复制的机制作了合理的解释.但对DNA复制的分子机制的真正阐明是以研究DNA聚合酶开始的.从Kornberg等1956年报导第一个DNA聚合酶以来,人们经过40年的努力,对DNA的复制的认识已大大前进了一步.近年来的研究表明:DNA的复制是一个十分复杂的问题.DNA的复制是在多种酶和蛋白因子的共同作用下进行的.本文就DNA单链结合蛋白、拓扑异构酶、DNA解链酶、引发体、DNA聚合酶δ、端聚酶、DNA连接酶等几类与DNA复制有关的酶和蛋白因子作一概述.     

新课标生物实验常规试剂盒介绍——普通PCR试剂盒

本试剂盒根据PCR反应原理,精确地提供PCR反应所需的全部试剂(包括Taq DNA聚合酶、缓冲液、MgCl2、dNTPs、引物Ⅰ、引物Ⅱ、模板质     

生物芯片微反应腔系统设计综述

聚合酶链式反应(PCR)在生命科学研究及诸多相关领域已经得到了广泛应用.充分利用等离子体干法刻蚀和各向异性湿法腐蚀的优点,先干法刻蚀,然后进行湿法腐蚀,可以制作出图形准确、底部致密平整、表面光滑、线条较直的PCR生物芯片微反应腔.而通过分析优化加热器材料和温度传感器的形状及尺寸,则可以满足DNA扩增反应对温度均匀性的要求.总体来看,PCR-DNA微阵列杂交集成的生物芯片在某种程度上是信息生物芯片(informalion-bio-chip)和功能生物芯片(function-biochip)的有机集成,但还不够完善,真正意义上的生物微系统应是功能生物芯片与信息生物芯片的进一步组合的产物.     

新课标生物实验仪器介绍——全自动基因扩增仪(中学教学专用)

全自动基因扩增仪是依据聚合酶链式反应(PCR)原理研制的一种全自动基因体外扩增装置,在生物工程、遗传工程高科技领域有重要的使用价值,在疾病的诊断,转基因生物改良、动植物检疫、性别鉴定以及刑事侦破等方面     

新课标生物实验室新增实验与试剂盒介绍——人性别鉴定试剂盒

本试剂盒根据Y染色体上特异的基因序列,结合PCR反应原理,精确的提供人性别鉴定所需的全部试剂(包括Taq DNA聚合酶、缓冲液、MgCl2、dNTPs、引物Ⅰ、引物Ⅱ)。使用时,只需按照说明书进行操作即可达到鉴别人     

新课标生物实验室新增仪器与建设介绍全自动基因扩增仪（中学专用）PCRINSTRUMENT

全自动基因扩增仪是依据聚合酶链式反应（PCR）原理研制的一种全自动基因体外扩增装置,在生物工程、遗传工程高科技领域有重要的使用价值,在疾病的诊断、转基因生物改良、动植物检疫、性别鉴定以及刑事侦破等方面有广泛的应用。     

利用三维软件创建虚拟分子实验室辅助实验教学——以生物PCR实验设计为例

1引言虚拟实验室(Virtual Laborabry)的概念最早是由美国Virginia大学的William Wolf教授于1989年提出,能够提供给实验者一个基于网络的虚拟实验操作、技术交流的平台,具有灵活、安全、低成本等特点。聚合酶链式反应(PCR),是分子生物学中的     

偶氮苯修饰的发夹DNA对RNA转录的光调控

通过偶氮苯的光异构化作用影响生物大分子的结构和功能是近年的热门研究课题。我们前期发现偶氮苯光控制DNA聚合酶的活性而调控引物的延伸。本文围绕遗传信息传递的转录过程,研究偶氮苯对RNA聚合酶反应的光调控。将4,4'-二羟甲基偶氮苯修饰在RNA转录的非模板链的T7启动子端,并连接5、7、9、11 nt的4种长度保护链。探究它们的光异构化能力以及RNA转录的光调节情况,结果发现偶氮苯修饰非模板链的DNA模板与T7 RNA聚合酶反应在紫外光响应下转录效率明显增加,RNA转录产物对于设计的5 nt长度的T7NC,从光照前3.4%增加到光照后21.4%,大约有6.25倍的变化。同样,对于含有T7NC1、T7NC2和T7NC3的DNA模板,紫外光照后其指导的RNA转录产物也有所增加,增加的效率分别为4、3和1.25倍。因此,我们设计的非模板链上通过偶氮苯连接5个碱基的发夹结构与模板链组合指导的RNA转录具有最佳的光控效果。本研究的重要价值在于发现了偶氮苯光活性修饰参与生命活动的模板序列,研究结果可有效应用于核酸药物的开发与应用。     

有效扩增小片段DNA的一种方法

利用单链DNA连接酶可以连接单链DNA的性质将小片段DNA自连成环,随后利用phi29 DNA聚合酶进行恒温滚环复制,将扩增产物进行酶切,得到扩增后的小片段DNA.实验结果表明,单链DNA连接酶能有效地将30bp的小片段DNA自连成环,以phi29 DNA聚合酶扩增出大于10kb的DNA片段,产物经酶切后可进行第二轮扩增,并证明其成环方式为自成环.该方法能有效扩增小片段DNA.     

自制恒温水浴锅做PCR

PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。它包括变性（Denature）、退火（Anneal）、延伸（Extension）三个基本步骤，再由这三个基本步骤组成一轮循环，经25～35轮循环就可使DNA扩增达106倍。     

一次力竭性离心运动后大鼠骨骼肌-actin基因表达及针刺对其影响

为了研究一次力竭性离心运动后大鼠骨骼肌肌动蛋白(α-actin) mRNA表达及针刺对其影响,将130只成年SD大鼠随机分为安静对照组和运动实验组.运动实验组又分为非针刺组和针刺组.将非针刺组和针刺组分别在运动后即刻、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h取大鼠股四头肌.利用定量反转录聚合酶链式反应(QRT-PCR)法测定α-actin mRNA表达.研究发现,一次力竭性离心运动后大鼠股四头肌α-actin的基因表达明显下降,其恢复过程大于72 h.针刺有可能促进运动后大鼠股四头肌α-actin基因表达的恢复.     

有氧运动协同抗氧化剂对老年小鼠肾脏线粒体质和量的影响

目的:研究小鼠衰老时肾脏线粒体形态、结构、功能及mtDNA的变化规律,观察有氧运动训练和抗氧化剂延缓肾脏老化的效果.方法:用电镜对线粒体观察计数,Clark氧电极法测定线粒体呼吸链CytC氧化酶及NADH脱氢酶活性,分光光度法测定抗氧化酶活性,聚合酶链反应检测mtDNA3866bp片段缺失率.结果:与5月龄小鼠比较,20月龄的老年小鼠肾脏线粒体数量减少、体积增大,线粒体呼吸控制率、ADP/O比值减小,呼吸链NADH脱氢酶、CytC氧化酶活性下降,mtDNA3866bp片段缺失率增加,而抗氧化酶活性却增大.结论:长期进行有氧运动和/或补充抗氧化剂可在一定程度上维持机体氧化与抗氧化的平衡,延缓mtDNA片段缺失率随增龄积累,预防线粒体老化,改善线粒体功能.     

慢性低氧及跑台训练对大鼠骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)亚型基因表达的影响

为研究慢性低氧及跑台训练对大鼠骨骼肌肌球蛋白重链(MHC)亚型基因表达的影响,对揭示肌肉收缩蛋白性能的变化机制具有特定的意义.取健康SD雄性大鼠28只,随机分成4组进行试验,采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,测定骨骼肌MHC Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx、Ⅱb四种亚型的mRNA基因表达.结果表明:与常氧对照组(C)相比,HC及NT组MHC各亚型mRNA表达量总体呈上升趋势(P＜0.05),仅仅低氧训练组(HT)MHC-Ⅱa亚型mRNA表达量明显下降(P＜0.05);另一方面,MHC各亚型mRNA所占百分比分析显示,慢性低氧能导致MHC亚型mRNA表达出现"由慢到快"变化趋势.另外,慢Ⅰ型百分比并未受慢性低氧及训练的影响.     

急性低氧及力竭运动对大鼠骨骼肌成肌调节因子MyoD和myogenin基因表达的影响

目的:研究急性低氧及力竭运动对大鼠骨骼肌成肌调节因子MyoD和myogenin基因表达的影响。方法:取健康SD雌性大鼠80只,随机分成四大组:1)常氧对照组(C);2)常氧力竭组(NE);3)低氧对照组(HC);4)低氧力竭组(HE)。采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,测定各组骨骼肌成肌调节因子MyoD和myogenin的mRNA基因表达。结果:力竭运动(NE组)引起的MyoD及myogenin基因表达最为明显(P<0.01),在力竭后12 h达峰值。单纯低氧条件下(HC组)3 d后,可引起MyoD基因表达明显升高(P<0.05);而低氧暴露加力竭运动后(HE组),则myogenin基因表达明显升高。结论:提示成肌调节因子,特别是MyoD及myogenin在运动及低氧导致的骨骼肌损伤及修复中起着重要作用。     

运动对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌GLUT4和PKBβmRNA表达的影响

目的:观察运动对胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)模型大鼠胰岛素信号转导途径中的关键蛋白GLUT4(葡萄糖转运蛋4)和PKBβ(蛋白激酶Bβ)表达变化的影响。方法:将健康Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、运动组及饮食干预组,每组8只。采用高脂膳食喂养建立IR大鼠模型,分别以游泳运动和改饲普通饲料干预4周;测算胰岛素敏感性指数(ISI);应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对各组大鼠骨骼肌细胞GLUT4和PKBβmRNA表达进行观测和定量分析。结果:运动显著提高IR模型大鼠ISI(P<0.05),运动可以使IR大鼠胰岛素信号转导途径中GLUT4(P<0.01)和PKBβ(P<0.01)表达增强。结论:运动促进了胰岛素PI3-K/PKB途径信号通路中GLUT4的转位,具有改善IR的作用。     

安建平、王廷璞合著的《生物化学与分子生物学实验技术教程》一书出版

由我校生命科学与化学学院教师安建平、王廷璞合著的《生物化学与分子生物学实验技术教程》一书,已由兰州大学出版社正式出版。该书分为三篇,第一篇为生物化学和分子生物学实验技术基本理论,包括生物大分子制备技术、分光光度技术、电泳技术、离心技术、层析技术、核酸的分离纯化技术、D N A重组技术、分子杂交技术、聚合酶链式反应技术、D NA序列测定技术、生物芯片技术等十一章。将现代生物化学和分子生物学技术的精华作了系统扼要介绍。第二篇为生物化学和分子生物学实验,包括生物化学实验21个,分子生物学实验19个。实验内容兼顾了学…     

乙型肝炎疫苗治疗HBsAg阳性携带者

乙型病毒性肝炎(乙肝)是一个世界性的公共卫生问题,我国是乙肝大国,HBsAg阳性率为9.75%(约有1.3亿乙肝病毒携带者),其中25%可能发展为慢性肝炎、肝硬化、肝癌。无症状HBV携带者中约90%的人其肝组织存在不同程度的病变,但因机体处于免疫耐受状态,HBV聚合酶基因YMDD序列变异产生免疫逃避株病毒,是抗病毒药疗效差和产生耐药的主要原因,打破免疫耐受、防止免疫逃避株病毒的产生、进行免疫调节治疗、是治疗     

血管紧张素原基因CD235Met-Thr变异与高血压脑梗塞发病的相关性

探讨汉族人群血管紧张素原(AGT)基因CD235Met-Thr变异与高血压合并脑梗塞发生的关系.采用突变基因分离聚合酶链反应(MS-PCR)方法检测82例高血压合并脑梗塞患者(BI)、67例单纯高血压患者(EH)和95例健康对照者(C)的M235T等位基因型.BI组AGT基因T/T基因型频率和T等位基因频率(分别为0.720和0.811)显著高于C组(分别为0.516和0.700,P＜0.05)和EH组(分别为0.537和0.716,P＜0.05).结果提示,AGT基因CD235Met-Thr变异增加了汉族人群高血压合并脑梗塞发病的易感性.     

运动对长骨生长板中PTHrP表达状况的影响

为了探讨运动对长骨发育的作用机理,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对100只生长期大鼠经3周、6周和9周的高、低负荷跑台训练后胫骨生长板中局部调节因子甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)的表达进行了观察.结果表明:3周的跑台运动没有显著改变生长板中PTHrP mRNA的表达水平,而6周和9周运动后PTHrP mRNA的表达水平显著高于对照组, 低负荷运动组亦显著高于高负荷运动组(P《0.01或0.05);各组间对照组PTHrP mRNA的表达水平均未出现显著的增龄变化.结果提示:运动可以通过改变PTHrP的表达水平来调节生长板软骨细胞的活动,进而影响生长板的高度,调节长骨的纵向生长,但其具体的调节途径尚有待进一步研究探讨.