龙竹和麻竹FT同源序列的扩增与序列分析

根据拟南芥Flowering Locus T（FT）基因和水稻Heading date 3a（Hd3a）基因的序列设计引物,通过PCR扩增的方法分别从麻竹和龙竹基因组DNA中各得到长为334bp的DNA片段.经BLAST检索、基因结构分析和编码蛋白功能域预测等分析,初步确定所得DNA片段可能是麻竹和龙竹中的FT同源基因的部分序列.     

PCR扩增目的基因相关计算的教学思考

针对PCR扩增目的基因的相关计算,提出有关引物的计算,围绕DNA聚合酶的特点展开;有关PCR过程中DNA分子数目的计算,围绕PCR技术的原理“DNA半保留复制”展开。引导学生从PCR技术的原理入手,实现深度学习。     

利用模型建构法解决PCR扩增目的基因的有关计算

通过将物理模型与数学模型相结合,巧妙解决PCR扩增目的基因的有关计算问题。旨在提高学生运用模型与模型建构的能力,发展学生的生物学学科核心素养。教师在教学中应善于发掘、利用、积累模型建构的素材。     

相关序列扩增多态性标记技术(SRAP)及其在植物中的应用

相关序列扩增多态性(Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP)是最近发展起来的新型分子标记,具有简便、可靠、易于测序等优点.主要介绍了相关序列扩增多态性标记技术的概念、原理、特点及该技术在植物中的应用.     

相关序列扩增多态性标记技术（SRAP）及其在植物中的应用

相关序列扩增多态性（Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP）是最近发展起来的新型分子标记,具有简便、可靠、易于测序等优点。主要介绍了相关序列扩增多态性标记技术的概念、原理、特点及该技术在植物中的应用。     

乳液PCR扩增复杂基因序列的方法建立及普通PCR的比较

该研究分析普通PCR的不足,通过较多实验研究初步建立乳液PCR方法,改善PCR实验技术.采用人工合成的乳酸杆菌质粒为模板,不同成分配比条件下的乳液PCR和普通PCR对质粒序列进行扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,电泳结束后对凝胶进行Gelred染色并用GS-800灰度扫描仪成像.进一步分析乳液PCR和普通PCR扩增产物的特异性以及不同成分配比条件下乳液PCR的扩增质量.通过比较两种PCR方法的扩增结果可得,在相同条件下,乳液PCR扩增特异性高于普通PCR扩增,并确定当水相中加入100 g/L BSA,水油体积比在1∶2.5时,破乳水饱和乙醚体积比为1∶1时,水油相在1700 rpm条件下连续混合5 min时扩增效果最好.     

PCR技术的新进展及应用

聚合酶链反应(POLY merase chain reaction; PCR)技术,是一种特异性DNA体外扩增技术,它具有快速,简便,灵敏和特异性强等优点。自1985年以来,已成为分子生物学领域中最为重要的一项技术。本文简要从其基本原理,最新进展、特点及应用方面加以综述。     

例析几类与PCR引物有关的试题

通过计算引物的数量、选择引物的种类及设计引物的序列等几类试题的分析,加深对PCR技术过程及应用的理解,提高学生解题能力及高考备考水平。     

都支杜鹃ISSR扩增条件的优化

对珍稀濒危物种都支杜鹃的ISSR扩增体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量和底物含量进行优化,并在优化后的基础上筛选出8条效果较好的引物,在梯度PCR仪中设置温度梯度,找到这些引物的最佳退火温度。优化结果表明,至少在一定的范围内底物浓度和Taq酶含量对PCR反应结果影响不大,相对而言,dNTP浓度和Mg2+浓度对反应结果的影响更加显著。优化后的15 ul PCR反应体系中包括20 ng模板DNA、0.3μM引物、1.5 ul Buffer(Mg2+free),0.5 U Taq酶、1.5 mM MgCl2和0.1 mM dNTP。     

龙竹和凤尾竹PpMADS1序列的扩增与序列分析

以龙竹和凤尾竹基因组DNA为模板,通过试验不同的退火温度、循环数、Mg2＋浓度及DMSO浓度,获得了16条龙竹和凤尾竹PpMADS1相似序列片段,并得出稳定扩增PpMADS1相似序列的条件.对获得的龙竹和凤尾竹PpMADS1相似序列进行序列分析,发现龙竹和凤尾竹PpMADS1相似序列可根据序列长度差异分成组I和组II,并对其推出的氨基酸序列进行分析,找到了保守的paleoAP1基序和KIII区保守的氨基酸残基,并据此认为龙竹和凤尾竹PpMADS1相似序列是AP1/SQUA亚家族成员.     

Lucas序列的若干性质

本文给出了Lucas序列的若干基本性质。     

“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验的拓展及实践

创设真实的实验情境“鉴定青梗菜种子纯度”,利用SSR分子标记方法将教材中的“DNA片段的扩增及电泳鉴定”实验具体化和生活化,组织学生亲身实践、主动探索。学生通过科学实践,关注、思考并尝试解决生产生活中的生物学问题,探究能力和创新精神得到较大提升。     

例析几种与PCR技术应用相关的教学疑难点

将常规PCR、重叠延伸PCR、反向PCR、荧光定量PCR等技术与高中生物学试题相结合,通过试题的归类分析,阐述几种PCR技术的过程与原理,以促进学生对PCR技术的理解与应用,并为教师的教学提供参考。     

PCR 是如何扩增特定 DNA 片段的

1提出问题在PCR过程中,有时需要扩增DNA中特定的片段(图1),如目的基因的扩增等。那么,如何控制扩增特定的DNA片段呢?人教版高中《生物》选修1教材中指出:"DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数扩增。"对这句话,该如何理解?     

蚕微卫星DNA的体外自我扩增条件初步研究

采用一种类似PCR的基因组自我引发PCR(GSP—PCR)法，初步研究了家蚕、野蚕、天蚕、蓖麻蚕和柞蚕的微卫星DNA的体外基因组自我引发PCR扩增的条件。结果发现。浓度为100ng/μl的基因组DNA在100℃变性15min后，与等量的同浓度的未变性的DNA混合作为模板。在80m扩增体系中[含0．2mM dNTPs、50mM KCl、10mM Tris—HCl(pH9．0)、4mM MgCl2、1．25U Tap plymerase]，加入1μl此混合模板，在92℃，1min→55℃，2min→72℃，2min，30→90次循环的扩增条件下，成功地得到了PCR产物。基因组DNA的适宜浓度为1．25ng/μl反应体系；GSP—PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后的部分片段经回收后，在同样条件下，30—60个循环可得到同样大小范围的产物。GSP—PCR产物经6％的变性测序胶电泳，得到典型的梯状带，表明为微卫星DNA。     

用图解法和数学归纳法化解PCR扩增过程的有关知识难点

本文介绍了图解法和数学归纳法在解答PCR技术类习题中的应用。     

实时荧光定量PCR技术的操作实践

采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBR(R) Green I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验.介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性.     

南阳牛血液基因组DNA提取与ANGPTL4基因的PCR扩增

采集20例南阳牛的血液,采用酚/氯仿法分离白细胞提取基因组DNA,并且对ANGPTL4基因部分序列(677～998 bp)PCR扩增条件进行了优化。结果表明,获得的牛基因组DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,主条带清晰,表明获得的南阳牛基因组DNA可以用于后续实验;以所提取的基因组DNA为模板,优化ANGPTL4基因片段扩增的条件,结果表明,最理想的PCR扩增条件是模板量为2μL(50 mg/L),Taq聚合酶(5 u/μL)的量为0.8μL,退火温度为56℃,循环次数为35次。     

“利用PCR技术来扩增目的基因”教学的思考

人教版高中《生物（选修3）现代生物科学技术专题》中“利用PCR技术来扩增目的基因”,是基因工程操作步骤中获取目的基因的常用方法之一。本文结合教学实践谈几点思考。