绿僵菌非核糖体肽合成酶的生物信息学分析

通过生物信息学的方法对绿僵菌非核糖体肽合成酶进行了分析.生物信息学分析表明:其一级结构并不保守;二级结构含有15个α螺旋结构、9个β折叠、多个无规则卷曲;三级结构可能有酰基激活酶、乙酰辅酶A绑定位点和腺苷一磷酸绑定位点结构域.三维建模表示在Swissmodel数据库中具有可靠的模型.理化性质分析表明其是稳定性的蛋白质.     

绿僵菌防治农林害虫研究进展

综述了绿僵菌对农林害虫防治进展,并初步讨论影响其防效的因素。     

绿僵菌Argonaute基因片段原核表达载体的构建及其表达

绿僵菌是一类广泛应用于生物防治的昆虫病原真菌.研究表明小RNA能够调控基因的表达,其中Argonaute基因在整个小RNA通路中发挥重要的作用.本研究通过RT-PCR的方法从绿僵菌中获得了Argonaute基因的部分功能片段,构建了其重组原核表达载体,将重组载体转化至大肠杆菌进行诱导表达;采用镍柱亲和纯化重组的目的蛋白并通过Western blot技术鉴定.结果发现：通过RT-PCR的方法获得长度约为950bp的基因片段;重组原核表达载体经诱导表达后,SDS-PAGE检测发现分子量约为34kDa的目的蛋白条带;诱导5h后蛋白的表达量最高,采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,经Western blot技术检测,重组蛋白可与His-tag抗体发生特异性反应.该纯化重组蛋白的获得为将来绿僵菌Argonaute蛋白抗体的制备,并进一步通过该抗体获得绿僵菌体内的小RNA及其靶基因提供了基础.     

金龟子绿僵菌MicroRNA在蝉蜕和蚕血淋巴诱导下的差异表达分析

金龟子绿僵菌是一类应用广泛的昆虫病原真菌,在害虫的防治中起着重要作用。研究发现MicroRNA能调控基因表达,继而调控生物体生长发育的各个重要环节。本研究采用特异的茎环RT-qPCR方法,对15个绿僵菌miRNA进行不同诱导条件下的差异表达分析;结果表明,在蝉蜕诱导过程中,15个绿僵菌miRNA的表达水平呈现下降趋势;在血淋巴诱导过程中,15个绿僵菌miRNA的表达量差异存在以下2种情况:即man-miR-2等表达水平显著升高或者man-miR-6等显著下降。这些显著差异表达的miRNA可能在绿僵菌侵染昆虫的过程与定殖于昆虫体内发挥相应重要的作用。     

三唑酮对小麦离体叶片叶绿素和蛋白质含量及过氧化物酶活性的影响

用25mg·L-1的三唑酮溶液处理小麦离体叶片,可抑制叶绿素、蛋白质含量的下降,延缓过氧化物酶(POD)活性的升高,表明三唑酮可以延缓小麦离体叶片衰老。     

用于甾体微生物转化的绿僵菌生长与形态关系

利用绿僵菌 Metarrhizium anisopliae的发酵过程研究了菌丝体形态与菌体生长的关系 .与菌体量特征相似 ,菌丝体形态特征也与菌体生长阶段相对应 :菌体形态图像的分形特征在生长迟缓期后期和对数生长期前期呈上升趋势 ,在对数生长期中期达最大值 2 .4.这可能是由于粗糙型弹丸状菌丝体 (rough pellet)与光滑型弹丸状菌丝体 (smooth pellet)比率在菌体生长过程中的显著变化引起的 .而菌丝体形态图像的分形分析可以很好地表征这种变化 .另一方面 ,菌丝体形态还与菌体的生物转化活性相关联 :在甾体底物 (16α,17α-环氧黄体酮 )加入发酵液进行生物转化之前 ,取样分析菌体形态分形特征 ,结果表明菌体较高的分形特征值与菌体较高的甾体转化率相对应 .同时发现菌体分形维数的最大值先于菌体量的最大值出现 ,表明与利用菌体量曲线来确定发酵工艺的传统方法相比 ,利用分形形态曲线可以更及时有效地指导发酵工艺的确定     

固定化辣根过氧化物酶电化学测定有机过氧化物和亚硝酸盐

利用海藻酸钠（SA）水凝胶将辣根过氧化物酶（HRP）固定在玻碳电极表面,制备了HRP-SA膜修饰电极．包埋在海藻酸钠水凝胶中的辣根过氧化物酶可以与电极直接传递电子．在pH=7．0的磷酸盐缓冲溶液和磷酸盐,乙醇混合溶液中均可得到一对辣根过氧化物酶辅基血红素Fe（Ⅲ）／Fe（Ⅱ）电对的可逆氧化还原峰．研究了HRP-SA膜修饰电极对有机过氧化物（过氧化氢、氢过氧化叔丁基、氢过氧化异丙基苯、过氧化丁酮）和亚硝酸盐的电催化性质,表明该方法可用于上述物质的定量测定．     

紫外光照下辣根过氧化物酶酶活变化及机制

实验发现不同波长光对辣根过氧化物酶(HRP)酶活的钝化程度不同,我们采用紫外、荧光及圆二色(CD)等方法对光还原导致酶活变化及其机制进行研究。结果显示,280 nm单色光照射HRP溶液60 min后,酶活降为72.81%,403 nm单色光照射HRP溶液同样时间后,酶活仅为未光照时的56.34%。紫外光谱证实光照使辣根过氧化物酶中的铁被还原,导致HRP钝化。同步荧光和CD光谱表明光还原后蛋白内色氨酸残基微环境的极性增加,403 nm单色光照射使血红素构象发生改变,光照时间内蛋白未变性。根据以上数据可知,两种单色光诱导HRP还原钝化机理不同:280 nm单色光激活色氨酸丢失电子,血红素中铁得到电子被还原;403 nm单色光则激发卟啉环分子内电子转移致使铁被还原。     

过氧化物酶酶促动力学实验的设计

酶学实验是生物化学实验的重要组成部分.该文以马铃薯皮为实验材料,提取了过氧化物酶粗酶液,设计了一组酶促动力学实验,主要包括测定该酶的酶活性,比较了3个不同pH值对酶活性的影响;测定了粗酶液的蛋白的含量并计算了比活力.该实验取材经济方便.操作简便易行,不需要特殊仪器,一般实验室均可操作,适用于生物学及相关专业本专科酶学实验教学,取得了良好的教学效果.     

高粱和苏丹草过氧化物酶同工酶分析

本文采用聚丙烯酰胺电泳法,对4个苏丹草和6个高粱品种进行过氧化物酶同工酶的分析,结果表明,过氧化物酶同工酶酶谱差异可以作为鉴定不同品种的特征之一,但不能将高粱和苏丹草两类划分开来。     

铅、锌诱导的高羊茅叶片过氧化物酶活性变化

采用水培方法,研究了铅、锌诱导下的高羊茅叶片过氧化物酶活性变化．结果表明：高羊茅对Pb^2＋、Zn^2＋胁迫有一定的耐受能力,低浓度（0．5mmol／L）的Pb^2＋、Zn^2＋胁迫均会使高羊茅叶片POD活性随处理时间的延长先升高后下降,但10天时还保持在高于对照的水平;高浓度Pb^2＋、Zn^2＋胁迫POD活性无论开始是否上升,至10天时均下降至对照水平以下．试验同时表明高羊茅对Zn^2＋耐受能力要大于Pb^2＋．     

盐胁迫下龙爪稷愈伤组织游离氨基酸和过氧化物酶同工酶的变化

盐胁迫下，龙爪稷愈伤组织内游离氨基酸（ＡＡ）含量发生变化，谷安酸（Ｇｌｕ）、丙氨酸（Ａｌａ）、脯氨酸（Ｐｒｏ）、和精氨酸（Ａｒｇ）含量提高，而色氨酸含量（Ｔｒｐ）下降；组织内过氧化物酶同工酶显著变化，并出现与盐离子胁迫有关的特异谱带．     

辣根过氧化酶LB生物膜的制备及其应用

LB（Langmuir--Blodgett）技术制备了辣根过氧化酶-正十九烷酸LB单分子生物膜．探究其成膜条件（铺展量,亚相的pH,亚相的离子强度）,并进行电化学表征．进一步的实验结果显示,HRP-正十九烷酸复合膜中的HRP能保持其对H2O2还原的生物电催化活性,而且能快速地响应H2O2浓度的变化．     

速率法测定辣根过氧化物酶

本文介绍了一种速率法测定辣根过氧化物酶的方法。以对苯二胺和过氧化氢为底物经辣根过氧化物酶作用生成紫红色化合物.用440nm 单色光进行光电比色,每隔30秒钟记录一次吸光度值,直至3分钟为止。绘出吸光度时间关系曲线。求出斜率后,从标准工作曲线中查得样品中辣根过氧化物酶的含量。该方法可用于竦根过氧化物酶制备过程中每一操作步骤中酶的比活性测定。本法也可用于其他过氧化物酶的测定。     

辣根过氧化物酶在双十六烷基磷酸膜中的直接电化学

利用表面活性剂双十六烷基磷酸（DHP）将辣根过氧化物酶（HRP）固定在EPG电极表面,研究了酶中Fe(（Ⅲ）／Fe（Ⅱ）电对与电极之间的直接电子传递过程以及酶催化双氧水还原过程,结果表明：（1）表面活性剂是一种固定酶的理想材料;（2）这种体系可能应用于构造第三代生物传感器．     

交变电场对过氧化物酶活性影响的研究

研究了交变电场对从绿豆叶片中提取的过氧化物酶活性的影响.交变电场电压为600 mV,频率为5MHz的条件下,处理时间在1~3 min范围内酶活性显著提高,1 min时最高为55.68;频率为5 MHz,改变电压处理5 min时,随着电压升高酶活性由抑制到促进逐渐增强,电压为600 mV时酶活最高达57.18;电压值为600 mV,改变频率处理5 min时,低频情况下过氧化物酶活性较低甚至被抑制,频率为2 MHz时酶活性最低为41.7,当频率为4 MHz时酶活性最强达60.54.     

一种真菌蛋白对黄瓜抗病性的诱导

以黄瓜为材料，用中国农科院的邱德文博士从真菌中分离的新型真菌激活蛋白处理后，对苯氨酸解氨酶、过氧化物酶、纤维素酶的活性以及脯氨酸含量进行了测定。结果表明：真菌激活蛋白处理后一定时间，处理的植株苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、纤维素酶活性明显升高，且脯氨酸含量也明显高于对照。