抗菌肽P113多拷贝表达载体的构建

目的:构建唾液抗菌肽P113基因多拷贝串联重组体,并将其克隆到表达载体pET-28a.方法:根据大肠杆菌偏爱的密码子设计并合成人唾液抗菌肽P113基因,采用PCR技术构建P113基因的自融合多拷贝串联重组体polyP113,BAMH I和HindⅢ双酶切表达载体pET-28a和polyP113基因,将两者连接后转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选阳性菌落,PCR、酶切、测序鉴定重组质粒.结果:所构建的含有十拷贝P113基因的重组体正确克隆到表达载体pET-28a上,无突变.结论:成功构建含十拷贝唾液抗菌肽P113基因表达框的大肠杆菌表达载体.     

L-ficolin突变体原核表达载体的构建及表达产物的鉴定

目的构建L-ficolin突变体的原核表达载体，为研究L-ficolin的糖结合位点奠定基础。方法设计L-ficolin突变体基因上、下游引物，分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点。以插入L—ficolin M2（Val144Phe）和M6（Glu 307Asp）点突变的完整编码区基因的质粒pCDNA3-L-ficolin为模板，通过PCR扩增获得突变体的基因片段，将其克隆入原核表达载体pGEX—KG．然后通过酶切和序列测定对其进行鉴定；将此表达载体转化入表达菌BL21（DE3）pLvSs诱导表达。并采用SDS—PAGE对表达产物进行鉴定。结果经酶切及序列分析表明．成功地构建了重组原核表达载体pGEX-KG—L—ficolin—M2、pGEX-KG-L-ficolin—M6，SDS—PAGE显示目的蛋白大量表达。结论L—ficolin突变体融合蛋白可以在大肠杆菌中大量表达。为研究L-ficolin的糖结合位点打下基础。     

猪干扰素基因的克隆与原核表达载体的构建

干扰素(Interferon)是一种广谱抗病毒剂,具有抗肿瘤、抗病毒和免疫调节等多种作用而被广泛应用于病毒性疾病的预防和治疗。本实验以猪肝脏组织为材料,提取猪肝脏组织DNA,根据Gen Bank收录的猪干扰素基因序列设计特异性引物,以猪肝脏DNA为模板进行高保真扩增得到IFN基因的ORF片段,然后进行了T载体克隆。再利用引入Eco RⅠ、SalⅠ酶切位点的特异性引物对IFN成熟肽段的基因进行亚克隆,经双酶切、连接、转化后,成功构建了p ET28a-ifn原核表达重组质粒,为干扰素基因的原核表达奠定了基础。     

苦瓜核糖体失活蛋白MAP30原核表达载体构建

苦瓜作为药食同源的植物,含有许多活性成分,其中核糖体失活蛋白MAP30是近年来研究较多的一种.根据G enbank中MAP30序列,采用PCR技术,从苦瓜基因组DNA中扩增出该基因片段,将其克隆到原核表达载体pET-28a上,构建重组质粒pET-MAP30,经克隆载体转化菌液PCR鉴定,结果显示成功构建MAP30的原核表达载体.     

安全环保的烟草质体多顺反子定点整合表达载体的构建

根据已发表的序列，通过PCR技术克隆了一系列构建烟草叶绿体多顺反子表达载体所需的元件：质体核搪体（16S）RNA操纵元启动子（Prrn）、质体面A基因3’端（psbA3’）、山菠菜甜菜碱醛脱氢酶基因（BADH）、烟草叶绿体高频同源重组片段（psaA／psbC，大小3463bp）、甘露聚糖酶基因（man）、绿荧光蛋白基因（gfp）。构建了烟草质体多顺反子定点整合表达载体pLM7（-psaA-Prrn-SD-man-SD-gfp-SD-BADH-PSBA3’-PSBC-）。并在大肠杆菌中通过平板定性分析等方法对所构建载体上的表达盒进行了功能鉴定。     

植物表达双价抗虫载体pCAMBIA3300-bt-pta的构建

本研究将苏云金芽孢杆菌（bt）与半夏凝集素抗虫基因（pta）两类抗虫基因连接到具有高效性的植物表达载体pCAMBIA3300中,重组表达质粒分别经过ApaⅡ单酶切及xhoⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定、分析后,实验结果表明含有双价抗虫基因pCAMBIA3300-bt-pta的植物重组表达质粒已构建成功。     

带植物内含子的GUS基因强表达载体的构建

从质粒pCAMBIA 1301上切下带植物内含子的GUS基因,置换质粒pMB 200上的fad2基因,用fad2基因的双增强启动子和终止子,通过酶切和PCR鉴定,得到了以NPT II基因为选择标记基因且串联有带内含子的GUS基因表达载体。     

苹果ABP2基因克隆及其表达载体构建

以红富士苹果为材料,从苹果枝条形成层组织中提取总RNA,以随机引物及oligodT反转录成cD-NA。根据已知序列设计PCR引物并对其进行修饰,运用PCR技术扩增出苹果ABP基因片段和全长,经测序分析得知从红富士苹果中克隆到的基因ABP2(GenBank:HQ610832)为ABP(生长素结合蛋白)的突变体,同时完成了ABP2基因表达载体的构建。文章在苹果RNA提取、全长基因克隆、ABP2基因表达载体的构建方面积累了经验,并为进一步的转基因研究奠定了基础。     

构建有效载体 促进思维发展

在数学课堂中,教师可通过提问等多种途径来诱发学生的思维活动,并给学生提供交流和讨论的机会,促进他们数学学习能力的提升。     

加强思想政治教育网络载体构建的思考

网络是现代信息科技发展的产物，是思想政治教育最现代化的载体。以网络为载体开展思想政治教育，是时代的发展对思想政治教育提出的迫切要求。为此，我们要科学地构建思想政治教育网络载体，从而以全方位的态势开展思想政治教育，这是适应新世纪思想政治教育内在发展的需要。     

抗菌肽的结构与功能

抗菌肽是具有抗菌活性的肽类的总称。目前发现抗菌肽或类似抗菌肽的小分子肽类广泛存在于植物、昆虫、两栖类、水产动物及哺乳动物中,在机体抵抗病原的入侵方面起着重要的作用。抗菌肽与传统的抗生素相比具有分子量小、广谱抗菌、热稳定性好、抗菌机理独特等优点。本文对其结构特征、类型、生物活性等方面的研究进行了概述,并对其应用前景作了展望。     

论大学生励志教育的载体选择与构建

大学生励志教育需要依托一定的载体实现教育目标,国防教育是其中的重要载体。国防教育是由众多具体载体构成的系统载体,主要包括革命传统教育载体、军事技能教育载体、军事理论教育载体、国防教育活动载体等。选择载体,应紧扣励志教育的内容,注重载体的可操作性,科学认识各种载体,有效把握载体的形式和特征,正确选择运用载体。     

基因表达载体构建实验的拓展

在传统的双酶切方法基础上,利用同源重组原理同样可以将目的 基因连接在载体上,并且该方法可将目的 基因插入到载体上的任一位点,这极大地提高了载体的构建效率,也有利于学生对基因工程的进一步理解.     

棒状杆菌表达载体的构建

ｐＧＡ４６－４是一个带有谷氨酸棒杆菌妄动功能片断的质粒。用ＰＣＲ技术从ｐｇａ４６－４中扩增该启动子片断，将该启动子Ｔ４噬菌体Ｐ３２基因的终止子克隆到大肠杆菌质粒ｐＫ１８上，再接入棒状杆菌粒ｐＸＺ１０１４２构建一穿梭表达载体。     

高职院校青年教师专业成长载体的构建

文章从高职院校的实际出发,提出了一条培养青年教师的新途径,即建立一个有利于青年教师全面成长和发展的载体——"青年教师工作室",从其定位和理想两个角度阐述了其内涵,从运行机制和组织管理两方面分析了其如何运用,从丰富理论研究、整合教师专业成长力量、稳定青年教师队伍、促进学校的和谐发展四个层面指出了其价值。     

水稻多顺反子质体表达载体的构建

根据发表的水稻叶绿体基因组序列，对比烟草高频同源重组目标区(NCBI编号：X15901)设计引物，用PCR的方法克隆到一段3．939kb叶绿体DNA片段，命名为crDNA．以其作为外源基因定点整合的同源重组片段，以来自烟草叶绿体的强启动子Prm、甘露聚糖酶man、绿荧光蛋白gfp、氨基糖苷3’-腺苷酰基转移酶基因aadA和终止子psbA3’，构建水稻质体多顺反子表达载体pLM3(-psbCPrm—SD-man—SD-gfp-SD-aa-dA—psbA3’-tmm-)．并在大肠杆菌中通过平板定性对所构建载体上的表达盒进行了功能鉴定，结果表明：在大肠杆菌中，多顺反子盒式表达结构中的三个基因(man，gfp，aadA)均得到了表达．     

动物和植物体内的抗菌肽

抗菌肽是一类对细菌、真菌等微生物有抑制或杀灭作用的小分子多肽，文章介绍了植物和动物抗菌肽的主要类型、结构和功能。     

鱼类抗菌肽基因工程表达系统概述

本文介绍了鱼类抗菌肽基因工程中使用的原核和真核表达系统,并展望了其应用前景.     

血管内皮生长因子逆转录病毒表达载体的构建

将质粒pcDNA3．1-VEGF双酶切后亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN,并用酶切及测序等手段进行鉴定．而后利用脂质体转染包装细胞pA317,并检测病毒滴度．结果表明：成功构建了VEGF基因的重组逆转录病毒表达载体．     

以学生社团为载体构建和谐校园文化

学生社团作为学校的第二课堂,是建设和谐校园文化的重要力量。本文通过研究学生社团在和谐校园文化建设中的作用,分析了现阶段学生社团建设中存在的主要问题,提出加强学生社团的建设,搭建构建和谐的校园文化载体的对策,达到构建和谐校园文化的目的。