拟南芥热激因子AtHsfAla在PET原核表达系统中的表达及纯化

以pErl30a为载体构建的表达拟南芥热激因子AtHsfAla的大肠杆菌EcoliM15（pET30a／His6一AtHsfAla）为实验材料,以IPTG诱导6XHis融合蛋白的表达并经过Ni2＋柱分离纯化AtHsfAla,再通过SDS—PAGE鉴定表达蛋白和纯化蛋白．结果显示,AtHsfAla蛋白在在PET原核表达系统中能够有效表达,并能通过亲和层析获得纯化的AtHsfAla蛋白．研究结果为揭示拟南芥热激因子AtHsfAla的作用机理奠定基础．     

人C6orf210基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

为了构建人C6orf210基因原核表达载体,并在E．coliBL21中表达并纯化。采用RT—PCR扩增人C6orf210基因片段,并将其克隆到原核表达载体Pet21a中,构建重组质粒pET21a—C6ort210。经限制性内切酶EcoRI与XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E．coliBL21,经IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示获得全长为1188bp的人的CAiorf210基因片段。以构建的重组质粒pET21a—C6orf210转化E．coliBL21后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量（Mr）约66000的融合蛋白。经SINS—PAGE、Western blot分析显示,诱导表达的蛋白为C6orf210。     

假单胞茵产弹性蛋白酶基因的克隆与表达

从假单胞菌（Pseudomonassp．）XZG36中克隆弹性蛋白酶基因,构建原核表达载体,实现其在大肠杆菌（Escherichiacoli）中的高效表达,并对表达产物进行酶学性质分析,为微生物发酵生产弹性蛋白酶奠定基础．以假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增弹性蛋白酶基因,并将其开放阅读框（0RF）克隆至融合表达载体pET30a（＋）进一步IPTG诱导表达;表达产物经His·Bind亲和层析纯化后对弹性蛋白酶进行酶学性质分析．实验成功克隆了弹性蛋白酶基因,DNA基因片段为1672bp、编码497个氨基酸残基的多肽,与预计长度相符合;实现了其在E．coli中的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的20％;经SDS-PAGE分析,相对分子质量为48000,与预期的一致;提纯后的表达蛋白SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92％以上．表达蛋白具有良好活性．     

斑节对虾酚氧化酶原在大肠杆菌中的表达

将斑节对虾酚氧化酶原（prophenoloxidase,proPO）基因克隆进pET28a（＋）,在大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析均能检测到一条分子量为79．4kDa的特异性条带,与推导的融合蛋白理论分子量82．4kDa基本相符;包涵体变性后对经Ni—NTAagarose纯化的变性液进行复性,表现出0．3851U／mg．min的PO活性;不同条件下的诱导表达结果显示,18℃时诱导培养能检测到目的蛋白的可溶性表达,经诱导9h后可溶性表达比例达到最高,约占菌体可溶性蛋白总量的s．56％;可溶性表达的目的蛋白纯化后经胰酶消化,可检测到分子量为60kDa、42．7kDa的特异性条带,并表现出0．4249U／mg．min的PO活性．     

一道中考压轴题的探究与拓展

题目 如图,已知△ABC∽△A1B1C1,相似比为k（k〉1）,且△ABC的三边长分别为a、b、c（a〉b〉c）,△A1B1C1的三边长分别为a1、b1、c1．     

时间模上二阶3－点边值问题的两个正解

运用Avery—Henderson锥上的不动点定理,讨论了时间模上的二阶非线性动力学方程3-点边值问题{y^△ （t）＋a（t）f（y（t））=O,t∈[t1,t3] T,y^△（t1）=0,y（t3）=βy（t2）至少有两个正解的存在性．其中T是一个时间模,0≤t1〈t2〈t3,0〈β〈1．     

几个常见三角不等式的加强

在△ABC中,cosAcosBcosC≤1/8是一个常用的三角不等式,现给出它的如下加强：命题1设△ABC的三边长分别为a,b,c,则cosAcosBcosC≤abc/（a＋b）（b＋c）（c＋a）l≤1/8.     

关于匹寶不等式的讨论

设△ABC和△A′B′C′的边长分别为a、b、c和a′、b′、c′，它们的面积记为△和△′，则a′~2（-a~2+b~2+c~2）+b′~2（a~2-b~2+c~2）+c′~2（a~2+b~2-c~2）≥16△△′（1）这个不等式称为匹窦（Pedoe）不等式。     

在解三角形时注意防止“增解”与“失解”

一、防止增解 例1（1）（2009年全国卷2）设△ABC的内角A、B、C的对边长分别为a、b、c，cos（A—C）＋cosB=3/2,b^2=ac，求B．     

人B淋巴细胞刺激因子的可溶性功能区（hsBLys）的克隆、表达及分离纯化

在已有的pET30a/hs表达载体的基础上，构建了原核表达载体pET30a/hsBLYS(His6)、经双酶切分析和DNA测序后，转化入表达宿主大肠杆菌M15，IPTG诱导后得到高效表达(目的蛋白约占总菌蛋白的35％)；表达产物大部分以包含体形式存在。采用本室自行研制的Ni^2 亲和层析胶(Ni^2 —IDA)纯化可溶部分的重组融合蛋白，经SDS—PAGE鉴定为单一条带。     

热激对拟南芥热激因子AtHsfA1a表达的影响

为探究热激对拟南芥热激因子AtHsfA1a表达的影响,对过量表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的植株进行39℃热激5 min后提取其RNA,应用RT-PCR技术对热激因子AtHsfA1a的RNA进行逆转录和扩增,并对其进行电泳检测.结果表明：过量表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的AtHsfA1a在热激和常温下表达量均比野生型高;而且野生型拟南芥和过量表达拟南芥热激因子AtHsfA1a的AtHsfA1a在39℃热激下的表达量比25℃常温下的高,说明AtHsfA1a的表达受热激诱导,结果可为研究拟南芥热激因子AtHsfA1a作用机理提供科学依据.     

拟南芥β-淀粉酶家族基因密码子使用特性分析

该研究分析了拟南芥9个β-淀粉酶家族基因（BAM1―BAM9）在cDNA和蛋白质上的同源性,分析了每个基因反映密码子使用特性的参数：GC含量、同义密码子第1～3位置中的GC含量、有效密码子数等.结果表明,拟南芥β-淀粉酶家族基因在密码子的使用特性上不存在的偏好性.Spss分析表明,ENc与GC3s%和GC%呈显著正相关（P〈0.05）.拟南芥β-淀粉酶家族基因序列间的同源性差异较大,在cDNA和蛋白质序列上的基因同源性分别为41.6%～64.2%和29.4%～62.6%,其中,BAM5和BAM6间的同源性最高.     

SchrOdinger算子的Riesz变换与新BMO函数的交换子在LP空间上的有界性

设Tj（j=1,2,3）是与Schrodinge算子相关的Riesz变换,即 T1=（-△＋V）-1V,T2=（-△＋V）-1/2V-1/2,T3=（-△＋V）-1/2-1/2 ,本文主要考虑了交换子[b,Tj]=6Tj-Tjb（j=1,2,3）在Lp空间上的有界性．其中位势V（x）满足反向Holder不等式,△是拉普拉斯算子．     

基于因子分析法的链烷烃热力学性质预测

首次将因子分析方法应用于链烷烃热力学性质的预测．结果表明,所提取的主因子与链烷烃的气态标准生成焓-△fHm和气态标准生成吉布斯自由能（△fGm）具有显著的线性关系,以主因子回归预测的链烷烃的-△fHm和△fGm与实验值吻合度高,且易于用SPSS软件实现．     

拟南芥热激蛋白HSP70基因片段克隆实验体系的建立

以拟南芥为材料,对热激蛋白HSP70基因片段进行了克隆研究,获得了最佳的分子克隆实验体系．首先提取拟南芥总DNA,接着在热激蛋白HSP70编码区设计引物,扩增出HSP70编码区的片断,再将HSP70编码区的片断加上具有EcoRⅠ酶切位点双链的人工接头,通过EcoRⅠ对其进行酶切．再与经过EcoRⅠ酶切并已经去磷酸化的PUC19载体通过T4连接酶进行连接,然后将连接产物置人到感受态大肠杆菌细胞中（即转化）,并让这种细胞在含有Amp＋／IPTG／X—Gal的LB培养基上生长．挑取培养基上蓝白斑中的白斑,进行质粒DNA提取,通过酶切质粒DNA,从而初步判断目的片段已被克隆．     

硝酸铈丙氨酸配合物的合成及其配离子的标准生成焓

合成了硝酸铈与丙氨酸的稀土氨基酸配合物Ce（Ala）4（NO3）3·H2O（s）。用具有恒温环境的反应热量计在298．15K测定了Ce（Ala）4（NO3）3·H2O（s）在水中的溶解焓△aHm=-3．268±0．022kJ·mol^-1,并计算出配离子Ce（Ala）4^3＋（aq）在298．15K时的标准生成焓△fHm^θ[Ce（Ala）4^3＋,aq,298．15K]=-3030．9kJ·mol^-1。     

乳腺癌中mRNA结合蛋白IMP3表达差异的研究

IMP3（胰岛素生长因子Ⅱ的mRNA的结合蛋白3）是一个新发现的癌胚胎的RNA结合蛋白,研究发现其参与细胞生长和细胞迁移在胚胎发育的早期阶段．该研究利用实时定量逆转录PCR对IMP3在乳腺癌的诊断和治疗中的应用潜力进行了研究和评估．检测了不同类型乳腺癌样本中IMP3的表达情况,定量PCR结果分析中应用2也小。方法进行了归一化比较．研究结果表明,IMP3基因表达与乳腺癌病人肿瘤的大小及淋巴转移存在明显的相关性（P〈0．01）．不同的临床阶段和病理分期与IMP3的表达水平之间也存在一定的相关性,表明差异不显著（P〉0．05）．该研究表明IMP3作为一种新的肿瘤相关因子,其表达水平与乳腺癌也存在一定的相关性,显示了其作为一种潜在的肿瘤标志物的可能性．     

用升阶法求常系数非齐次线性递推关系的特解

利用数列的差分算子和移位算子,将常系数非齐次线性递推关系转化成为常系数非齐次线性差分方程（qo△k＋i＋q1△k＋i-1…＋qk△i）an=△if（n）,并将f（n）=gm（n）,f（n）=qngm（n）,f（n）=qngm（n）cosβn,f（n）=qkgm（n）sinβn）这四种类型的常系数非齐次递推关系转化为相应的差分方程,从而得到求常系数非齐次线性递推关系特解的简易方法——升阶法。     

植物热激转录因子HSF

高温条件下,生物体普遍的反应是产生热激蛋白。转录水平的调控是热激蛋白基因表达调控的主要方式。热激转录因子通过与热激基因上游调控片段中的热激元件结合来调节热激基因的转录。本文简要介绍了植物热激转录因子的种类、结构、功能及转录调节机制等方面的研究。