α-蒎烯工程菌发酵动力学模型的建立

为了提高α-蒎烯产量,探索其发酵生产的规律,以α-蒎烯产生菌重组大肠杆菌YJM28为供试菌株,发酵周期24h作为发酵条件进行590 ml厌氧摇瓶发酵。最终采用基于Logistic和Luedeking-Piret等方程的供试菌株的菌体生长、产物合成以及底物消耗三个发酵动力学模型,最终确定菌体生长动力学模型为力学模型,说明上述三个模型能够较好的真实的描述供述菌株在在发酵过程中菌体生长、产物合成以及底物消耗的情况。     

针灸联合重组人干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎的临床观察

目的:观察针灸联合聚乙二醇干扰素重组人干扰素α-2b治疗慢性乙型性肝炎的临床疗效。方法:将60例符合纳入标准的患者按照随机数字表法分为试验组30例和对照组30例,对照组予重组人干扰素α-2b治疗,试验组在对照组基础上给配合针灸治疗,治疗24周为1个疗程。1个疗程结束后,通过评价两组肝功能情况;HBe Ag阴转率;HBV-DNA阴转率;临床症状改善;不良反应发生率等,观察针灸联合重组人干扰素α-2b的疗效。结果:试验组在改善肝功能;HBe Ag阴转率;HBV-DNA阴转率;临床症状改善;减少不良反应发生率方面均优于对照组(P0.05)。结论:针灸治疗可提高重组人干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎的抗病毒疗效,改善生活质量,减少重组人干扰素α-2b不良反应。     

SHIP—1对SR3Y1细胞的MMP2分泌和侵润能力的影响

SHIP-1是一个含有SH2结构域的肌醇5磷酸酶．在造血过程中起负调节作用．为了调查SHIP-1对癌细胞的迁移能力和MMP2分泌是否有影响,我们制作了鼠SHIP-1的3种突变体,△SH2-SHIP-1、△Ptase—SHIP-1、△Cter—SHIP-1．并与其野生型全长cDNA一起分别插入到真核表达载体pcDNA3中．分别转染src转化的3Y1细 胞系（SR3Y1）,     

论重组人干扰素α2a凝胶剂的制备与检测

随着当前医药事业的飞速发展,新药不断问世,这对临床医生有相对性的合理选择用药、提高医院的药物治疗水平,无疑是大有裨益的.综观近几年的药品市场,确有一些疗效确切的品种填补了我国药品市场的空白,但大多数国产新药多为复方重新组合及仿制国外产品的复制品或一个药品多个厂家使用不同商品名推向市场的,就现在使用广泛的重组人干扰素α2a进行分析.     

白细胞介素－1β对原代培养Leydig细胞白细胞介素－αmRNA基因表达的诱导作用

最近发现睾丸中存在ＩＬ－Ｉ样物质，但其来源不明，作者用改良的Ｋｌｉｎｅｆｅｌｔｅｒ方法分离纯种大鼠睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞，培养于含有人重组ＩＬ－１β的牛血清的ＤＥＭＥ／Ｆ１２培养基中，根据Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓ－ｋｉ及Ｓａｃｄｃｈｉ方法，抽提全部细胞的ＲＮＡ，最后用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析发现ＩＬ－β导致Ｌｅｙｄｉｇ细胞中ＩＬ－１αｍＲＮＡ表达增加，且呈剂量依赖性，脂多糖亦刺激ＩＬ－１αｍＲＮＡ的表达，但佛波脂无此作用．结果表明Ｌｅｙｄｉｇ细胞为ＩＬ－Ｉ的主要来源，它具有自分泌和旁分泌效应．     

家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析

家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。     

分泌型重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的裂解纯化

重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）大肠杆菌分泌型表达产物即目的蛋白存在于细胞间质当中。裂解和纯化方法简便,菌体经冻融、裂解、硫酸铵沉淀、柱层析等步骤得到高活性的产品。实验终产物纯度97%,工艺质量稳定。     

Lea14基因原核表达载体的构建

Lea基因编码的LEA蛋白作为一种晚期胚胎丰富脱水保护蛋白,当植物处于逆境状态下时,其能够高水平的表达,通过降低其脱水的程度采达到抵御逆境的功能.为了进一步研究Lea14基因在逆境反应中的功能,本研究以拟南芥cDNA为模板,扩增出Lea14基因,再将Lea14基因克隆到原核表达载体pET-28a中,获得了Lea14基因的原核表达载体pET-28a-Lea14,测序结果表明:pET-28a-Lea载体构建成功,可用于后续蛋白表达研究工作.     

EPO对全脑缺血后低氧诱导因子1α及存活素表达的调节

[目的]研究促红细胞生成素对全脑缺血再灌注大鼠缺氧诱导因子1α和凋亡相关蛋白存活素的调节,探讨其抗凋亡的可能机制。[方法]将成年雄性SD大鼠75只按随机数字表法分为全脑缺血组（n=35）和全脑缺血EPO干预组（n=35）,然后按再灌注时间不同又分为6h、12h、24h、48h、72h、5d和7d七个亚组。采用改良的Pu刘lsineli 4-VO法制作全脑缺血大鼠模型。应用TUNEL染色检测再灌注后不同时间点海马CA1区的神经元凋亡水平,免疫组织化学方法检测再灌注后不同时间点海马CA1区缺氧诱导因子1α和存活素表达水平的变化。[结果]全脑缺血EPO干预组24h至7d亚组TUNEL阳性神经元计数分别为1.50±0.73、3.14±0.88、5.78±1.03、7.78±1.79、10.34±1.82.与全脑缺血组相应时间点亚组相比明显减少,差异均有统计学意义（P〈0.05）。全脑缺血EPO干预组48h至5d亚组HIF-1α表达阳性细胞计数分别为11.26±0.02、20.28±2.03、3.33±0.04,与全脑缺血组相应时间点亚组相比明显减少,差异均有统计学意义（P〈0.05）.全脑缺血EPO干预组24h至5d亚组survivin蛋白表达阳性细胞计数分别为12.21±1.04、16.34±4.02、24.33±3.03、30.52±5.04,与全脑缺血组相应时间点亚组相比明显增高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。[结论]在全脑缺血急性期,EPO抑制HIF-1α的表达而使存活素表达升高,具有一定的神经保护作用.     

五种重组人源IL-18突变子表达质粒的构建及其在BxPC-3细胞中的表达

目的:设计获得5段hIL-18异构体,定向插入pEGFP-C1质粒形成融合基因,转染胰腺癌Bx-PC-3细胞并表达,为进一步研究改建的hIL-18蛋白功能奠定实验基础.方法:设计引物从pGEM-T-hIL-18质粒中PCR扩增得到5段不同的hIL-18片段,分别连接入pEGFP-C1载体构建不同的突变子(Mu0、Mu1、Mu2、Mu3和Mu4),转染原位胰腺癌BxPC-3细胞,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法检测转染细胞中hIL-18表达水平.结果:(1)五种重组质粒经酶切与测序证实构建成功;(2)BxPC-3细胞转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:(1)成功构建了hIL-18五种异构体的绿色荧光蛋白表达载体;(2)改建的hIL-18蛋白可与绿色荧光蛋白在BxPC-3细胞融合表达.     

基因工程研究的重大成果——人γ-型干扰素

人γ-型干扰素(IFN-γ)基因工程研究是中国科学院上海生物化学研究所203课题组与复旦大学、第二军医大学等单位合作完成的.IFN-γ是一具有免疫活性的蛋白质,可能对某些肿瘤有治疗作用.本工作用人工合成的IFN-γ基因与表达载体重组构成表达质粒,转化大肠杆菌后,细菌产生的蛋白质中有60—80%为IFN-γ,这是国际上罕     

PHD类转录因子GmPHD2和Bar基因的植物表达载体的构建

利用高保真PCR酶从克隆载体pMD18T-GmPHD2中扩增出大豆PHD类转录因子GmPHD2,并于基因上下游分别引入XbaI和XhoI酶切位点;然后通过TA克隆、载体双酶切、连接、转化等技术手段,将其连入植物表达载体pBA002,构建了含GmPHD2和抗除草剂筛选标记Bar基因的植物表达载体pBA002-GmPHD2。重组质粒经PCR检测、双酶切及测序验证,表明GmPHD2基因已被完整、正确的插入到pBA002载体中,之后通过冻融法将重组质粒pBA002-GmPHD2成功导入农杆菌EHA105,利用此农杆菌不仅可以介导转化大豆,而且可以转化非同源的其他作物,为进一步开展植物抗逆性的基因工程研究提供了新基因资源。     

人DNA聚合酶Pol l体细胞基因敲除载体的构建

应用体细胞基因敲除技术的方法和原理，通过PCR扩增获得同源短臂和长臂，将其插入骨架载体pPL622，酶切鉴定插入方向并测序确证，成功构建了人Pol l基因的击靶载体PSP—PLA，其中同源短臂长980bp，长臂长3217bp。     

抗人B7-2单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。     

硫磺矿硫化叶菌耐酸α-淀粉酶基因的克隆及其在枯草芽孢杆菌中的表达

以硫磺矿硫化叶菌基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到其淀粉酶基因.将该片段与载体pSBPYF连接后转化枯草芽孢杆菌DB1342,得到重组菌株DB1342(pSBA),对该菌株进行培养,经蔗糖诱导表达,在其上清中可检测到α-淀粉酶活力,比空载体的淀粉酶活力高了3倍多.该酶作用的最适pH值为4.3,最适作用温度为80℃,在酶液中添加不同的金属离子均降低酶活.     

碘酸钾和碘化钾对大鼠肝脏SIRT1 mRNA表达的影响

目的:观察不同剂量的碘酸钾和碘化钾对大鼠肝脏SIRT1基因表达的影响。方法:根据喂养碘剂和剂量不同将Wistar大鼠随机分为8组,即:适碘组(KI、KIO3),10倍高碘组(10KI、10KIO3)、50倍高碘组(50KI、50KIO3),100倍高碘组(100KI、100KIO3)。喂养半年后,利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析大鼠肝脏SIRT1基因表达水平。结果:适碘组中,SIRT1在KI组中的mRNA表达量高于KIO3组,P<0.05;10倍剂量组中,SIRT1在10KI组中的基因表达水平明显高于10KIO3,P<0.01;50倍和100倍剂量组中,SIRT1的基因表达量在两种不同碘剂组中没有统计学差异,P>0.05;不论摄入何种碘剂,SIRT1在高剂量碘组中的基因表达量均高于适碘组。结论:高剂量的碘化剂和碘酸钾均可上调大鼠肝脏SIRT1基因表达量,肝脏SIRT1基因的表达上调可能是机体改善高碘致高脂血症的一种重要的分子机制。     

人DNA聚合酶Pol(ι)体细胞基因敲除载体的构建

应用体细胞基因敲除技术的方法和原理,通过PCR扩增获得同源短臂和长臂,将其插入骨架载体pPL622,酶切鉴定插入方向并测序确证,成功构建了人Polι基因的击靶载体PSP-PLA,其中同源短臂长980 bp,长臂长3 217 bp。     

高职高专“2＋1”人才培养模式的构建

“2＋1”人才培养模式是我国高职高专院校人才培养模式的一种创新,它是实现学生专业技能与岗位规范“零差距”、学生毕业与就业“零距离”的重要举措。但它的实施也带来了许多新问题。而要解决这些问题．必须重构人才培养方案和课程体系、创新教学模式、构建全新的校外教学体系。     

水稻低Cd累积相关基因RNA干扰载体及根特异性表达载体的构建

Cd极易被水稻等作物吸收并伴随食物链在人体内累积,严重威胁人类健康.基于水稻Cd累积机制的现有研究,克隆与水稻Cd累积相关的基因Os LCD和Os HMA3,并克隆一个维管组织特异性表达的启动子Os MTP11P,利用Gateway技术及传统酶切、连接方法,成功构建适用于水稻等单子叶植物农杆菌转化的RNA干扰载体pRI-M-LCD和根特异性表达载体p CB2022-H.期望通过这2个载体共转化水稻,使大量的Cd扣留在根细胞的液泡中,限制Cd向地上部分及籽粒中的转运,从而实现Cd在水稻籽粒中的低累积.