pCR-HBc-X6-βhCG CTP37 DNA疫苗的构建及体外转染实验

本文选取βhCG羧基端37肽(βhCG CTP37)的序列和βhCG109-118十肽重复6次的多聚表位,插入到真核表达质粒载体pCR-HBc乙肝核心抗原的第80位氨基酸中,构建重组质粒pCR-HBc-X6-βhCGCTP37,将其转染CHO细胞,在转染细胞裂解物中发现存在特异性表达产物,说明构建的DNA疫苗具有进一步动物免疫的价值.     

活性污泥总DNA的提取和纯化

在很多生物处理的工艺中,人们对处理过程的生物降解机理并不是很清楚,对处理过程的微生物的区系结构及主要的功能菌也知之甚少.微生物分子生态学可以帮助了解污泥中微生物区系的结构与功能动态变化情况,并鉴定主要的功能菌.本文对几种常用的活性污泥总DNA的提取和纯化方法作了介绍并进行了总结和比较,根据这些方法原理对影响提取效果的因素做了分析,提出了相应的改进措施,以期建立满足微生物分子生态学研究的所需的DNA.     

活性污泥总DNA的提取和纯化

在很多生物处理的工艺中,人们对处理过程的生物降解机理并不是很清楚,对处理过程的微生物的区系结构及主要的功能菌也知之甚少.微生物分子生态学可以帮助了解污泥中微生物区系的结构与功能动态变化情况,并鉴定主要的功能菌.本文对几种常用的活性污泥总DNA的提取和纯化方法作了介绍并进行了总结和比较,根据这些方法原理对影响提取效果的因素做了分析,提出了相应的改进措施,以期建立满足微生物分子生态学研究的所需的DNA.     

λ—DNA的提取与纯化

１前言 λ－ＤＮＡ在基因工程研究中具有极其重要的作用,不仅仅用于构建ｃｏｓ质粒载体、λ噬菌体载体,还更广泛地应用于工具酶的活性检测。λ－ＤＮＡ全长４８５０２ｂｐ,两端各有一个十二核苷酸的５’突出单链（ｃｏｓ位点）。进入宿主细胞后的λ－ＤＮＡ借ｃｏｓ位点完成自身环化,然后以溶菌途径或溶源途径完成其生命活动。λ－ＤＮＡ的全部核着酸序列测定和基因谱分析均已完成。人们已经能够自如地运用λ－ＤＮＡ进行基因工程研究。以λ－ＤＮＡ为基础,许多有价值的载体已构建完成,如Ｃｈａｒｏｎ系列载体、λ１０５９、λ２００…     

从土壤样品中提取和纯化微生物DNA方法研究进展

自然界存在的微生物只有一少部分能够通过标准纯培养方法获得，而绝大多数是难培养和不能培养的微生物，近年出现了一些新的直接从环境基质中提取微生物DNA的方法，用来研究环境中微生物多样性。对目前用于提取和纯化环境样品中微生物DNA的研究进展进行了综述．     

植物组织DNA的提取及纯化方法的研究

以小麦的幼芽和子房为材料,采用高等植物ＤＮＡ简易快速提取法,对小麦组织ＤＮＡ提取及纯化中的若干问题做了探讨。研究表明,小麦幼芽是提取ＤＮＡ的较为理想的材料,粗提ＤＮＡ用ＲＮＡ酶法进行纯化,纯化效果较好;纯化的幼芽ＤＮＡ稀释８倍即符合导入要求。     

经济植物DNA提取与纯化的三种方法比较

目的：优化适于普通院校实验室条件下开展经济植物DNA提取与纯化的实验方法。方法：1．标准操作，DNA浓度和纯度都较好，但耗时，设备条件要求高。2．优化简易操作，DNA浓度和纯度虽较不理想，但依然符合实验要求，而且省时，经济、易操作。3．Wizad^TM clean-up system试剂盒方法。DNA浓度纯度较理想，但价格昂贵。结果与讨论：优化简易操作省时、经济、易操作、此方法适用于教学实验和科研课题中对大量材料的处理。     

紫杉醇提取纯化方法的研究进展

紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物,属二萜类化合物.其抗癌机理独特[1],活性广谱高效,是目前所发现的惟一一种通过促进微管聚合和稳定已聚合微管来使细胞分裂停止于有丝分裂期,阻断了细胞的正常分裂的抗癌药物.紫杉醇主要用于治疗卵巢癌和乳腺癌,对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效.     

重组质粒DNA的提取和纯化方法研究

质粒ＤＮＡ的提纯是现代分子遗传学和基因工程的重要技术，本实验对质粒ＤＮＡ的提取和纯化方法进行了比较研究．并通过改进，建立了简便、快速提取和纯化质粒ＤＮＡ的方法．利用此法所提质粒ＤＮＡ收率大，纯度高，能适于细菌转化、细胞转染及酶切分析等进一步实验研究．     

重组质粒pRSET DNA纯化方法的比较

分别采用柱式小量质粒抽提纯化试剂盒和聚乙二醇沉淀法纯化重组质粒pRSET DNA,琼脂糖凝胶电泳和DU800核酸蛋白分析仪鉴定已纯化的重组质粒pRSET DNA的纯度.结果显示,采用聚乙二醇沉淀法纯化重组质粒pRSET DNA:A260/280=1.83,试剂盒所得结果:A260/280=1.91.与试剂盒相比,聚乙二醇沉淀法获得纯化质粒的纯度没有显著性差异,常规质粒纯化实验中可用此法代替昂贵的试剂盒.     

质粒DNA提取及电泳检测实验改革

为进一步增强学科间的交叉与渗透,提高学生灵活运用多学科知识与方法的能力,对质粒DNA提取及电泳检测实验进行改革。在改进经典碱裂解法提取质粒DNA、琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的基础上,新增试剂盒方法提取质粒DNA、超微量分光光度计检测质粒DNA以及快速单酶切鉴定质粒DNA等实验内容。改革后的实验不仅促进经典与现代技术、方法的有机结合,而且增强学科间的相互融合,取得了良好的教学效果。     

南瓜多糖的提取及纯化

为开发和利用南瓜多糖,采用纤维素酶法提取南瓜多糖;利用单因素试验考察了纤维素酶的浓度、时间、温度、pH值对南瓜多糖提取率和纯度的影响,并通过紫外光谱和红外光谱对样品进行了分析．结果表明：该法提取南瓜多糖的最佳反应条件为：酶浓度0．5％,时间120min,温度50℃,pH值5．2．在最佳条件下,南瓜多糖的提取率为4．9％,多糖的纯度为52％．紫外光谱分析表明：样品在217nm有多糖的吸收峰,未见蛋白质（280nm）与核酸（260nm）的特征吸收峰,红外光谱分析发现典型多糖吸收峰．     

葡萄花色甙优化提取和纯化工艺研究

本文用正交实验对经发酵的玫瑰香葡萄皮渣的总色素、食用色素的优化提取工艺进行了研究，同时对粗色素的纯化工艺进行了探索。     

质粒DNA提取方法的比较

以含有原核表达载体pet21a和真核表达载体EGFP的DH5α系列菌株为材料,分别采用碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA,通过凝胶电泳分析,对两种质粒提取方法的各自特点进行了比较与分析。认为碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA均可进行后续试验,但试剂盒提取法具有省时、简洁、高效的优势。同时根据在实验过程中所遇到的问题,说明了在进行质粒DNA提取过程中应当注意的问题。     

章鱼消化道蛋白酶提取纯化条件的研究

以章鱼消化道为原料制备蛋白酶粗酶液,研究蛋白酶的提取纯化条件。采用单因素实验,以偶氮酪蛋白法测定酶活力,研究料液比、提取溶剂、盐析剂(硫酸铵)浓度、透析时间等因素对提取液总蛋白酶活力的影响。在提取条件为料液比1∶3、提取溶剂为0.9%NaCl溶液、硫酸铵饱和度80%、透析时间24 h的条件下,提取得到的蛋白酶酶活力最高,说明章鱼消化道可以作为一种有效地蛋白酶提取底物。通过对章鱼消化道蛋白酶的提取纯化条件的研究,为蛋白酶的开发利用提供实验依据和理论基础,并为章鱼下脚料的综合利用开辟新途径,为酶工业的发展寻找新的酶资源。     

桑树DNJ提取、纯化和检测的研究进展

1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)是存在于桑树中的一种多羟基哌啶生物碱,因其通过抑制α-葡萄糖苷酶活性,进而具有降血糖、抗病毒、抗肿瘤等生理活性和药理活性.DNJ广泛存在于桑树的各种组织中,不同桑树类型和品种中DNJ含量不同,采取的每一种提取、测定方法均具有选择性和特异性,只适用于某种类型或某种桑树品种样品的纯化和检测.同时,DNJ在桑树体内的含量较低,而且桑树体内其他次生代谢物质的干扰增加了DNJ提取和测定的难度.因此,目前文献中报道的DNJ提取、分离纯化和检测方法较多.针对已报道的DNJ的提取、分离纯化和检测方法,综述了近年来DNJ研究方面的最新进展,为更好利用和开发DNJ制品,为DNJ的工业化生产提供参考和借鉴.     

山苍子油提取纯化方法工艺综述

分别对山苍子挥发油组分、核仁油组分的提取原料、方法及纯化方法工艺现状进行总结,同时对影响山苍子油成分含量的因素进行综述,提出山苍子油成分精细加工有待解决的问题.     

濒危植物格氏栲叶片基因组DNA提取方法研究

格氏栲植物体内酚类、多糖等次生物质含量较高,严重影响提取其基因组DNA的产量和质量。通过对格氏栲叶片DNA几种提取方法获得的DNA质量分析。结果表明,改良CTAB法是最为理想的提取方法。加入质量分数为10％的PVPP粉与材料充分研磨,在提取缓冲液中加入体积分数为3％的β-巯基乙醇,能有效地去除材料中的多酚类物质;用氯仿／异戊醇（24：1）抽提裂解液2次所获得的上清,加入1／5倍体积的7．5mol／LNH4Ac,再用异丙醇沉淀DNA,可以有效去除多糖的干扰,所提取的DNA纯度较高,可用于PCR扩增。     

“DNA粗提取和鉴定”实验设计与改进

对DNA粗提取与鉴定实验进行优化,探究植物组织的多种破碎方法对DNA粗提取的影响,并用氯仿等有机物对DNA粗提取物进一步纯化,分析DNA未纯化与纯化后的纯度差异。结果显示,相较于破壁机破碎、加液氮研钵研磨以及玻璃匀浆器研磨,不添加液氮用研钵研磨效果更好。DNA粗提液经纯化后纯度显著提高,蛋白质及盐类等污染明显减少。