有效扩增小片段DNA的一种方法

利用单链DNA连接酶可以连接单链DNA的性质将小片段DNA自连成环,随后利用phi29 DNA聚合酶进行恒温滚环复制,将扩增产物进行酶切,得到扩增后的小片段DNA.实验结果表明,单链DNA连接酶能有效地将30bp的小片段DNA自连成环,以phi29 DNA聚合酶扩增出大于10kb的DNA片段,产物经酶切后可进行第二轮扩增,并证明其成环方式为自成环.该方法能有效扩增小片段DNA.     

PCR技术在法医生物学中的应用

遗传学认为,DNA是人体性状及遗传变异的物质基础,它是遗传信息的携带者.DNA决定着我们的肤色、性别、身高、健康状况等个体特征.每个人的DNA都是不完全一样的.在法医学上,往往需要鉴别现场留下的物证是否属于犯罪嫌疑人.传统的方法主要是通过指纹、脚印、唇纹、化学物质等物证进行核对,这在一些情况下能起到作用.然而,有时候犯罪分子相当狡猾,或者现场被破坏的很严重,根本找不到上述痕迹.但是在理论上,只要犯罪分子在现场留下血渍、精斑、头发、阴毛、唾液等,通过分析其中的DNA,仍可查获真凶.另外,也可通过分析在现场找到的死者的残留物(如毛发、牙齿、骨骼等)中所含的DNA,来验明他们的真实身份.以前由于这些物证中DNA的含量甚微,再加上无法排除在分析时受到的干扰,DNA分析还或多或少是一种幻想.直到1985年,诺贝尔奖获得者Kary mullis发明了聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR).再加上1988年Saiki对PCR的重大改进,才使DNA分析在法医学领域的应用取得了惊人的突破.所谓PCR,就是通过特定的DNA序列作为引物,在酶的作用下,经过几十次循环,使目的DNA得以快速复制、扩增,从而得到足以进行检测和分析的目的DNA片段.目的DNA(或称模板DNA)就好象是“轮子”,引物好象有汽车的“方向”,酶好象是“(?)力     

AMPK/PGC-1α通路与运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成

骨骼肌运动适应的重要表现之一是线粒体的含量增加和构成改变,即"线粒体生物合成"。过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子是调节线粒体生物合成的关键性信号分子,在缺血、缺氧、低温、收缩及运动等刺激下,其表达增加激活包括核呼吸因子1和2及线粒体转录因子A在内的一组转录因子,启动线粒体DNA复制和转录而诱导线粒体生物合成。5′-一磷酸腺苷激活的蛋白激酶能通过一氧化氮、肌细胞增强因子-2、P38MAPK等靶点刺激PGC-1αmRNA和蛋白表达增加,并直接或间接作用于核呼吸因子、线粒体转录因子A等转录因子,从而在运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成中发挥重要作用。     

核酸多聚酶链式反应及其应用

核酸聚合酶链式反应的发明及其应用为目的基因的检测、克隆及表达提供了一个极重要的工具,本文就DNA聚合酶链反应体系、特点及类型进行了综述.     

DNA的端粒及其复制

端粒存在于真核生物染色体线形DNA末端 ,由富含G和T的DNA短重复序列和端粒结合蛋白组成。端粒能保护染色体末端免遭降解和逐次缩短。端粒的复制是由端粒酶控制的。     

活血补气中药对长期力竭训练后大鼠脑细胞凋亡影响的实验研究

目的:研究活血补气药(水蛭、人参等)对长期力竭性训练后大鼠细胞凋亡的干预作用机制.方法:将SD大鼠分为正常对照组、力竭训练对照组和活血补气中药组,对大鼠进行为期8周的力竭性游泳训练,用DNA原位末端标记法检测脑细胞的凋亡,并用免疫组化的方法观察脑细胞中bcl-2、bax的免疫反应活性;结果:①正常对照组凋亡率很低,力竭性训练组的大鼠脑细胞凋亡显著增加;②力竭性训练组的大鼠脑细胞中bcl-2蛋白的表达显著下降,bax蛋白的表达显著增加.活血补气中药组明显增加了bcl-2蛋白的表达,降低bax蛋白的表达,这可能是中药抑制大鼠脑细胞凋亡的机制.结论:活血补气中药可通过基因调控机制减轻力竭性训练导致大鼠脑细胞凋亡的发生.     

细胞分裂中遗传物质的变化

生物遗传物质在细胞分裂过程中存在着复制、传递和变异,DNA的复制是细胞分裂的重要步骤和检查点,与核分裂之间存在着一种反馈,只有准确复制后,核分裂才能进行.在复制和传递过程中,存在着遗传物质的突变和重组.     

TNF-α对骨骼肌蛋白降解的影响及其锻炼效应的研究进展

肿瘤坏死因子-α是一种多生物效应的细胞因子,参与因年龄增长或者某些慢性疾病(例如恶性肿瘤、艾滋病、慢性心力衰竭等)伴有的骨骼肌蛋白降解导致肌力下降的过程,而长期体育锻炼能起到维持和增强肌力的作用。采用文献资料综述法,对1975—2006年以来肿瘤坏死因子-α、骨骼肌蛋白降解和体育锻炼三者关系的相关文献展开综述,概括肿瘤坏死因子-α通过直接或者间接机制引起骨骼肌蛋白降解和长时间力竭运动可引起血浆肿瘤坏死因子-α的浓度提高,并且在此基础上,分析探讨体育锻炼减弱肿瘤坏死因子-α引起骨骼肌蛋白降解的作用机制,认为有规律的体育锻炼能抑制肿瘤坏死因子-α在骨骼肌的表达,因而体育锻炼能减弱因年龄增长或者某些慢性疾病引起的肌力下降。     

一个可演示DNA复制、转录和基因工程的教具

高中生物教学中DNA的复制、转录和基因工程,既是教学的重点又是难点。通过思考和探索制作了一套制作简单、实用性强的教具,能准确再现生物体内DNA复制、转录等生理过程,帮助学生理解课本难点。     

手性氨基酸对DNA链式聚合反应的影响

构成天然蛋白质的氨基酸为L构型,D构型氨基酸虽然不是构成蛋白质的基本结构单元,但许多植物、微生物甚至在人体中都有D-氨基酸的存在.DNA聚合酶链式反应广泛发生在生物体内及PCR实验中,首次探究手性氨基酸及其与金属离子协同条件下对Taq-DNA聚合酶催化下的DNA链式聚合反应的影响情况,为进一步研究手性氨基酸及金属离子对...     

蛋白质同型半胱氨酸化与动脉粥样硬化机制

动脉粥样硬化是严重危害人类生命健康的世界性疾病,因发病机制至今未明,尚无有效防治措施.大量研究证明,高同型半胱氨酸血症是引起动脉粥样硬化的独立危险因素.高同型半胱氨酸血症与氧化应激、内质网应激、血管内皮细胞损伤及血液粘稠度增高之间的密切关系已有大量文献报道,但其具体机制有待阐明.综述简要介绍了近年来在国际上颇受关注的蛋白质同型半胱氨酸化.围绕抗氧化酶、内质网蛋白、凝血因子、低密度脂蛋白,以及与钙信号有关的蛋白被同型半胱氨酸化的研究发现,从同型半胱氨酸及其衍生物同型半胱氨酸巯基内酯对蛋白质的共价修饰反应,到使分子结构与理化性质发生改变的生化机制,阐述了这种修饰与动脉粥样硬化斑块形成的关系.     

长期力竭性训练对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:研究长期力竭性训练对大鼠海马神经元凋亡的影响及其基因调控机制;方法:对大鼠进行为期8周的力竭性游泳训练,用DNA原位末端标记法检测海马神经元的凋亡,并用免疫组化的方法观察海马神经元中bcl-2、bax的免疫反应活性;结果:1)长期力竭性训练后,大鼠海马神经元凋亡显著增加.海马神经元凋亡可能是力竭性训练导致运动能力降低和中枢性运动疲劳的病理生理机制.2)长期力竭性训练后,大鼠海马神经元中bcl-2蛋白的表达显著下降,bax蛋白的表达显著增加.因此,力竭性训练可抑制海马神经元bcl-2蛋白的表达而促进bax蛋白的表达,这可能是力竭性训练导致大鼠海马神经元凋亡发生的基因调控机制.     

DNA分析技术与亲子鉴定

DNA 即脱氧核糖核酸,是构成生物细胞染色体的物质,也是一切生物最基本的遗传物质。它包含了生物体内所有的遗传信息,并负责储存和复制遗传信息。就人类而言,DNA 记录了每个人身上的每一个遗传信息,包括皮肤、头发的颜色等;人之所以有高矮和相貌的不同,就是 DNA 作用的结果。根据理论计算分析除一卵双生子外,任何两个生物个体DNA 遗传图谱完全一致的机率在200～300亿分之一,因此世界上基本没有两个人的 DNA 遗传图谱完全相同,人类的 DNA 结构有如人类指纹一般具有高度的特异性,有“DNA 指纹”或“遗传指纹”之     

MCL-1及其BH3 螺旋结合自由能计算研究蛋白-蛋白相互作用原理

MCL-1蛋白是细胞增殖和分化的一个关键调控因子. 使用MM-PBSA方法预测MCL-1蛋白与其野生型和碳氢化合物钉子修饰的BH3多肽形成的2个复合物的结合自由能. 结果表明,碳氢化合物钉子对多肽与MCL-1的亲和力影响有限; 并利用自由能分解(BFED)计算部分残基的能量贡献. 疏水效应是稳定复合物结构的主要因素,它同时被额外的静电相互作用强化. 该研究在原子水平上探究蛋白-蛋白相互作用机理,提供了新的癌症治疗候选药物.     

低氧预适应机制及其在运动中的应用

低氧与健康的研究是近年来生物学和医学界关注的课题，对低氧预适应现象的发现及其概念、氧感受器与信号转导、低氧敏感因子与低氧预适应及其机制等方面作探讨，并对利用低氧预适应机制应用于体育运动，为提高运动能力、促进身体健康的方法进行理论分析及提出进一步研究的设想。     

谷氨酸菌体蛋白酶解酶的筛选

为了给企业选用蛋白酶酶解谷氨酸菌体蛋白提供参考,对木瓜蛋白酶、β-葡聚糖酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶和碱性蛋白酶等8种酶在最适酶用量、水解时间、水解温度、PH值条件下,分别研究其对谷氨酸菌体蛋白的水解效果并进行感官评价.结果表明:(1)风味蛋白酶的水解效果最好,水解度为21.26％,水解后的氨基氮含量最高,115.4mg/100mL;(2)风味蛋白酶的水解液感官评价分值最高,为17.2.     

大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶与tRNALeu的相互作用 头孢菌素酰化酶的表达、翻译后加工和亚基重组

第一部分:为得到大量的大肠杆菌tRNA^Leu₁和tRNA^Leu₂,研究tRNA与亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)的相互作用,用基因克隆的方法高表达并纯化了它们;测定了接受活力和被LeuRS催化的动力学常数;改进了RNA体外转录必需的T7RNA聚合酶的纯化方法,优化了转录条件,转录序列比文献值高10倍.用体外转录方法得到了各种在接受茎突变的tRNA^Leu变种,研究了一个在CP1结构域插入40个氨基酸残基的变种LeuRS-A对tRNA^Leu₂种等受体的识别,证明了tRNA^Leu₁和tRNA^Leu₂接受茎上的第一对硷基对是否摆动是LeuRS-A识别的关键.第二部分:在大肠杆菌中高表达头孢菌素酰化酶基因10倍以上.研究了它的α-亚基的N-端变化(LAEP…→MGIP…)对酶学动力学常数的影响.构建了带有不同抗菌素抗性和启动子的高表达质粒,研究了它们表达的特点,分析了这些质粒的不同用途.用含有编码该酶两个亚基的基因的相容质粒共转化的方法.研究了它们在体内的重组和前体的加工.研究结果表明,该酶可能属于一类新的N-端亲和水解的酰化酶.     

运动与热休克蛋白

通过查阅相关文献,综述了运动后热休克蛋白在机体的骨骼肌、心肌、脑、肝等部位的表达,并对其可能的机制加以推测.研究运动与热休克蛋白之间的关系,从而对运动与训练中的损伤保护及防止过度训练等潜在研究价值进行探究.     

从模因论的视角研究仿拟修辞——以英语谚语为例

仿拟是众多修辞格中的一种。模因"meme"一词最早由生物学家Dawkins所提出,现在也广泛应用于语言学领域。本文尝试从模因论的视角来分析仿拟的形成机制。模因因子相当于仿拟辞格中的本体,而模因复制和传播产生的模因变体则相当于仿体。本研究有助于进一步了解仿拟的形成机制,同时也为仿拟的研究开辟了新的领域。     

运动结合绞股蓝总皂甙对高脂血症大鼠血脂和脂质过氧化水平的影响

目的:研究有氧运动和/或绞股蓝总皂甙对实验性高脂血症大鼠血脂的调节机制并探索其抗脂质过氧化的机理.方法:用高脂饲料喂饲大鼠6周,复制成高脂血症模型.而后进行4周的有氧运动、绞股蓝总皂甙干预和运动结合胶股蓝总皂甙干预.干预4周后处死动物,比较血清总胆固醇及甘油三酯含量、血清高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量,同时测定血清SOD、CAT和MDA的浓度.结果:有氧运动和绞股蓝总皂甙均可显著降低大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、甘油三脂浓度,提高高密度脂蛋白胆固醇水平;运动结合绞股蓝总皂甙组大鼠血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶及过氧化氢酶显著升高,脂质过氧化产物水平显著降低.结论:绞股蓝总皂甙结合有氧运动可治疗高血脂症大鼠血脂异常并有较明显的抗脂质过氧化作用.