双引物PCR检测抗草甘膦豆粕饲料中的转基因成分

在一个PCR反应体系内,同步扩增大豆内参照基因lec和抗草甘膦大豆外源基因盒中的CaMV35s启动子、nos终止子或cp4 epsps基因,建立转基因大豆双引物PCR检测方法.PCR产物用限制性内切酶酶切进一步鉴定.结果表明,用双引物PCR扩增出标准转基因大豆阳性对照、阿根廷大豆、美国RR大豆及豆粕中的lec基因和相应的特异性外源基因;酶切反应确证PCR产物为特定片段大小的目的序列.建立的双引物PCR法适用于抗草甘膦大豆原料和豆粕饲料中转基因成分的简单化、高精度和高灵敏检测.     

水生植物凤眼莲Ca2＋-ATPase的原核表达与蛋白纯化

从水生植物凤眼莲叶片中提取总 RNA,经 RT-PCR扩增出Ca2＋-ATPase基因片段,经限制性内切酶(Sma I,Not I)酶切后按正确的读码框顺序插入到pGEX-4T-2表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌,经菌落PCR和质粒双酶切鉴定、序列测定确认,证实成功地构建了Ca2＋-ATPase基因融合表达载体,．转化菌经IPTG诱导表达,获得了大小约48 kD的可溶性目的蛋白,与预期相吻合．利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B(Gluta-thione Sepharose 4B)亲和介质对重组蛋白进行纯化,获得了高纯度的目的蛋白．     

人超氧化物歧化酶（SOD）基因的原核表达与蛋白纯化

从人直肠癌细胞株Colo320中提取总RNA,经RT-PCR扩增出SOD基因片段,经限制性内切酶（BamHI,Sinai）酶切后按正确的读码框顺序插入到pGEX-4T-2表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌,经菌落PCR和质粒双酶切鉴定、序列测定确认,证实成功地构建了人SOD基因融合表达载体．转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示有与预期大小约44kD相吻合的融合蛋白带,获得了可溶性表达的目的蛋白,采用Glutathione Sepha—rose4B亲和层析对重组蛋白进行纯化,获得了纯度很高的目的蛋白．     

人C6orf210基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

为了构建人C6orf210基因原核表达载体,并在E．coliBL21中表达并纯化。采用RT—PCR扩增人C6orf210基因片段,并将其克隆到原核表达载体Pet21a中,构建重组质粒pET21a—C6ort210。经限制性内切酶EcoRI与XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E．coliBL21,经IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示获得全长为1188bp的人的CAiorf210基因片段。以构建的重组质粒pET21a—C6orf210转化E．coliBL21后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量（Mr）约66000的融合蛋白。经SINS—PAGE、Western blot分析显示,诱导表达的蛋白为C6orf210。     

应用PCR技术检测哮喘5-LO E254K突变基因效果探析

目前研究发现人类的花生四烯酸代谢途径中5-脂氧合酶的第254位氨基酸发生一定突变后,此人一般为过敏体质,易患哮喘.本文介绍一种快速简便检测哮喘患者5-LO E254K突变基因的方法及详细步骤.方法：采2ml 外周血,用0.2%氯化钠处理收集白细胞,再用基因组DNA提取试剂盒抽提基因组DNA,用等位基因特异性PCR(AS-PCR)法直接对E254K多态性进行扩增分型.结果：用该方法检测5-脂氧合酶E254K多态性结果准确清晰.结论：用我们设计的引物可以对5-脂氧合酶E254K多态性直接扩增分型,跟测序法和限制性内切酶酶切法相比,具有经济、快速、简便、易行等特点.     

对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白Vp28基因的克隆、表达及蛋白纯化

以对虾白斑病毒DNA为模板扩增出Vp28基因,经限制性内切酶（SmaI,Not I）酶切后按正确的读码框顺序插入到pGEX-4T-2表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌,经菌落PCR和质粒双酶切鉴定、序列测定确认,证实成功地构建了Vp28基因原核表达载体．转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE显示有与预期大小约52kD相吻合的融合蛋白带,18℃诱导24h后获得了可溶性表达的目的蛋白,采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析对重组蛋白进行纯化,获得了纯度很高的目的蛋白．     

T7E1检测CRISPR-Cas9基因编辑效果实验设计

CRISPR-Cas9是一种现代生命科学研究中普遍使用的新型基因编辑技术。为了升级课程内容体系，使实验教学贴近科研实际，提升实验课程教学质量，设计了T7核酸内切酶1(T7E1)检测CRISPR-Cas9基因编辑效果实验。以CRISPR-Cas9基因编辑技术对mfn1编辑过的HeLa细胞为实验材料，提取基因组DNA,PCR扩增mfn1基因片段，切胶回收后，变性，退火，使用T7E1对编辑效果进行检测。经1%琼脂糖凝胶电泳，可观察到T7E1将略大于500 bp的mfn1基因片段切成两条大小约为250 bp的DNA片段，表明CRISPR-Cas9成功地对mfn1进行了编辑。     

应用显微注射法建立免疫耐受转基因小鼠模型的研究初探

本论文用质粒载体PBC1-CD152转化大肠杆菌DH5a，以Amp(50mg／m1)筛选阳性单个菌落，LB培养基大量培养，按照质粒小量提取试剂盒使用方法抽提质粒，AVAⅠ、HindⅢ酶切和PCR扩增检测。可育雌鼠注射PMSG与HCG超排卵，输卵管内收集，移植受体母鼠输卵管腹壶部。结果表明：AVAⅠ酶切产物有一条为2．0kb的片段，证明是目的基因的启动子，从而证明质粒上含有我们所需的目的基因片段。HindⅢ酶切后出现一条带，与质粒的大小相符。共处理十批小鼠100只，有70只为可用供体，处理有效率为。70％，共捡胚1425枚，只均捡卵20．36枚。共处理受体小鼠十批40只，每只植入胚胎20枚，共出生小鼠274只，出生率为34．25％。本次实验成功扩增了免疫耐受诱导基因皮肤靶向表达载体PBC1-CD152，并以小鼠为动物模型，建立了完善的显微注射法转基因技术流程。     

一种地衣芽孢杆菌表达载体的构建

用PCR方法从地衣芽孢杆菌WH-08基因组DNA中分别扩增α-淀粉酶基因amyL启动子PamyL和终止子TT,用重叠PCR技术将两者连接,重叠PCR产物用Hind III和EcoR I双酶切后,与经相同酶切的载体PHY300 PLK连接,构建重组质粒PHY-PamyL-TT。该重组载体的构建为外源蛋白在地衣芽孢杆菌中的高效表达奠定了基础。     

定位切割DNA的新方法

基因繁殖是现代生物技术的主要内容,它依赖于一系列生物催化剂——限制性内切酶的作用,这些酶能够识别特殊的核苷酸片段(通常是4个或6个核苷酸),并在特定的位置切割开核苷酸链,从而重组DNA。迄今为止,已经发现100多种限制性内切酶。但是,核苷酸序列千变万化,要在所需切     

果蝇基因组中两类序列的信息参数沿染色体的分布

由于真核生物基因组染色体上各种序列的组织和安排复杂,所以我们把果蝇染色体上顺次排列的DNA序列分成内含子和编码序列两类.分别用描述序列构成的四个信息参数,分析各类序列沿着染色体分布特征,并着重讨论染色体着丝粒及其周围区域的分布规律,并解释引起这些特征的原因.用线性拟合和多项式拟合分析染色体各类序列沿染色体的统计分布特征(学生t检验),分析各个参数的平均值在染色体不同区域的差别.果蝇染色体参数X值是由D1(碱基偏置)和D2(碱基关联)值共同决定的,但果蝇染色体的编码序列参数X分内含子序列相比,分布没有趋同性.显示出编码序列跟内含子序列染色体的分布不同.     

Mechanical behavior of segment rebar of shield tunnel in construction stage

In this paper, a 3D finite element （FE） program ADINA was applied to analyzing a tunnel with 9 segment tings. The loads acting on these segment tings included the squeezing action of tail brush of shield machine under attitude deflection, the jacking forces, the grouting pressure and the soil pressure. The analyses focused on the rebar stress in two statuses： （1） normal construction status without shield machine squeezing; （2） squeezing action induced by shield machine under attitude deflection. The analyses indicated that the rebar stress was evidently affected by the construction loads. In different construction status, the rebar stress ranges from -80 MPa to 50 MPa, and the rebar is in elastic status. Even some cracks appear on segments, the stress of segment rebar is still at a low level. It is helpful to incorporate a certain quantity of steel fiber to improve the anti-crack and shock resistance performance.     

ACE基因多态性与有氧耐力运动关系研究

目前普遍认为ACE(血管紧张素转换酶)的水平和心血管的形态、功能密切相关。ACE基因的多态性是人耐力素质优劣的决定性因素之一。为了解运动员血管紧张素转换酶(ACE)基因插入或缺失(I/D）多态性情况，探讨ACE基因多态性与有氧耐力可能的关系，用聚合酶链反应(PCR)技术检测20例运动员和20例健康对照者的ACE基因多态性。结果位于ACE基因16内含子的L／D多态性经PCR扩增后呈三种基因型：纯合子插入型(II）、纯合子缺失型(DD)和杂合子插入或缺失型(ID)。耐力运动员组Ⅱ基因型和Ⅰ等位基因频率显著高于健康对照组。结果表明ACE基因可能在运动员的有氧耐力中起重要作用。     

Infants' Preference for the Predominant Stress Patterns of English Words

One critical aspect of language acquisition is the development of a lexicon that associates sounds and meanings; but developing a lexicon first requires that the infant segment utterances into individual words. How might the infant begin this process? The present study was designed to examine the potential role that sensitivity to predominant stress patterns of words might play in lexical development. In English, by far the majority of words have stressed (strong) initial syllables. Experiment 1 of our study demonstrated that by 9 months of age American infants listen significantly longer to words with strong/weak stress patterns than to words with weak/strong stress patterns. However, Experiment 2 showed that no significant preferences for the predominant stress pattern appear with 6-month-old infants, which suggests that the preference develops as a result of increasing familiarity with the prosodic features of the native language. In a third experiment, 9-month-olds showed a preference for strong/weak patterns even when the speech input was low-pass filtered, which suggests that their preference is specifically for the prosodic structure of the words. Together the results suggest that attention to predominant stress patterns in the native language may form an important part of the infant's process of developing a lexicon.     

七鳃鳗含硒谷胱甘肽过氧化物酶2的分子克隆、生物学特性及表达分析

谷胱甘肽过氧化酶2(GPx2),是生物体内重要的一类抗氧化酶,能够通过酶解过氧化氢阻断活性氧(ROS)的有害作用。本研究从七鳃鳗的血液c DNA文库中克隆了GPx2 c DNA全长和基因组DNA序列。序列分析表明,其c DNA全长为868 bp(Gen Bank序列号KM211710),包括53bp 5′非编码区、251bp 3′非编码区和564 bp开放阅读框,编码由187个氨基酸组成的多肽。基因组DNA序列(Gen Bank序列号KM211711)揭示了基因组特征含有2个外显子和1个内含子结构。系统发育分析表明,七鳃鳗GPx2(Lj GPx2)与其它的GPx2具有很高的同源性。利用实时荧光定量PCR检测到GPx2基因在七鳃鳗各组织中广泛表达,其中在口腔腺、心脏、卵、生殖腺中表达量较高。此外,用脂多糖(LPS)体内刺激七鳃鳗后发现,Lj GPx2 m RNA在生殖腺中表达量显著升高。本研究为探讨GPx2在七鳃鳗的免疫应答中的作用提供了理论依据。     

Investigating Microadaptation in One-to-One Human Tutoring

The authors investigated whether some advantages of tutoring over other instructional methods are due to microadaptation, or, tutors basing their actions on assessments of tutees they develop during tutoring. In a 2 × 2 between-subjects experiment, independent variables were shared experience (tutors either worked with the same or a different tutee in each of four segment of the tutoring session) and communication context (face-to-face or computer-mediated). Although there were no overall learning differences across experience conditions, tutees who worked with the same tutor demonstrated better learning of concepts initially discussed during the final tutoring segment. Shared experience led to accurate competence assessments only in the computer-mediated context, suggesting that cognitive load influences assessment development. However, there was no evidence of micro-adaptation.     

微波消解3-羧基二苯胺光度法测定化学需氧量

研究了微波消解制样3-羧基二苯胺光度法测定化学需氧量的新方法,COD值在0-600mg·L-1范围内与吸光度呈良好的线性关系。对实际水样测定结果的准确度和精密度都能很好地满足要求。     

松江鲈Myostatin基因内含子和线粒体D-loop DNA序列分析

通过PCR的方法,扩增了松江鲈Myostatin基因的内含子1和内含子2片段,测序后发现长度分别为325bp和835bp,具有典型的GT-AG序列特征,在内含子2中存在一个（AC）14的微卫星序列.通过线粒体控制区部分片段测序,对来自长江、丹东和葫芦岛三个地理群体的松江鲈线粒体D-loop序列分析,未发现它们之间存在特征性的序列差异,可能是三个地理群体松江鲈的分隔时间短.     

一种自发形成的非平衡有序结构及其可用性探索

论证了在汽液界面也存在一种自发形成的非平衡有序结构,此结构由分子因热运动而在汽液两相之间迁移而自发形成.针对该有序结构提出了一个实验模型,该模型中每个自发过程都会使某环节向平衡靠近而却同时导致另一环节偏离平衡,自发过程之间的联动和互补作用形成一个自持续的循环机制.分析表明,通过适当的动力学机制可使汽液界面的相变过程总是保持不平衡,从液相净迁移进汽相的分子能以设定的路径返回液面并在此过程中释放分子势能做功.提出与麦克斯韦妖功能类似的非耗能有序化自组织机制是可能存在的,分子的微观无序运动能转化为宏观的定向运动.     

花粉中微量元素的ICP-MS法分析

报道了采用微波消解法处理样品,运用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定花粉中微量元素的方法.在优化实验条件下,方法的检出限为0.006 9~20.3μg/g,相对标准偏差为2.70%~9.86%,回收率为89.3%~109.6%.