人CD34＋干/祖细胞异常表达基因hCLP46功能的初步探讨

hCLP46是从MDS-AML的CD34＋细胞cDNA文库中筛选出的一个新的基因，为了进一步对该基因进行功能、性质研究，本实验利用RT-PCR技术对该基因进行了组织特异性表达检测，并将该基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中，转染U937细胞，发现过量表达该基因的U937细胞能够抑制TGF-对p15基因的上调。此外，利用生物信息学手段对该基因进行序列分析，得到其启动子区存在一个典型的“CpG island”。提示该基因有可能参与甲基化调节途径。通过本文的研究，为进一步研究该基因的作用机制打下基础。     

利用酵母单杂交研究AtbHLH112上游调控基因

酵母单杂交技术是研究DNA与蛋白质相互作用的经典方法,能够有效地分离鉴定与特异DNA序列识别结合的蛋白质。本研究利用酵母单杂交系统构建了AtWRKYs基因cDNA文库,筛选获得了与拟南芥抗逆境胁迫基因AtbHLH112启动子区域中W-box元件特异性识别互作的WRKY蛋白。结果为进一步研究AtbHLH112上游表达调控基因网络奠定了基础。     

商陆小G蛋白激活蛋白基因 PaAGAP 在逆境下表达研究

利用同源克隆和RACE方法在商陆( Phytolacca acinosa )中得到一个推测的小G蛋白ArfGTPase激活蛋白 ArfGAP (ArfGTPase activating protein) 的全长cDNA序列 PaAGAP . PaAGAP 序列编码332个氨基酸.蛋白含有保守的锌指结构域(CX2CX16CX2C类)和C2结构域.实时荧光定量PCR表明在寒、旱、盐和重金属的不同时间胁迫下,PaAGAP可以被诱导,表达量有不同程度的上调.由此推测 PaAGAP 可能是通过快速启动转录和翻译,使ARF失活,抑制植物生长素极性运输,来参与植物逆境反应的.     

自然科学总论

蝴蝶兰花发育相关基因pPI9的克隆与表达分析CloningandExpressionAnalysisofaPhalaenopsisFlowering-relatedgenepPI9郭滨陈东红戴薇魏星明凤摘要:为研究具有复杂而特异花型的蝴蝶兰花发育的分子机制,利用RT-PCR方法从蝴蝶兰花瓣总RNA中分离出834bp长的cDNA片断.序列分析表明,该cDNA片断与拟南芥的PI基因有60%的同源性,命名为pPI9.它包含一个开放阅读框,具有编码24.5ku蛋白质的能力.推导的氨基酸序列中,N端包含一个完整的MADS盒,C端有明显的PI基序.半定量PCR结果表明该基因只在植株的生殖器官中表达,而在营养器官中不表达,…     

小鼠超高硫角蛋白基因启动子的分子克隆及序列分析

根据小鼠超高硫角蛋白（UHS）基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以小鼠全血提取的总DNA为模板,PCR扩增出688bp的特异性片段,连接到pMD19T载体中获得该片段克隆p19TU。经过快速提取质粒法筛选、限制性内切酶分析证明该克隆就是UHS基因5’端的调控区序列。序列分析结果也表明该克隆片段与原基因调控序列相比具有很高的一致性。研究结果为今后制备转基因克隆动物、在毛囊细胞中特异性表达绒毛生长调控基因奠定了基础。     

鱼类干扰素系统基因的克隆鉴定及其特征分析

干扰素 (IFN)系统是脊椎动物抵抗病毒入侵的第一道防御系统 .除了哺乳类 ,有关低等脊椎动物的IFN系统基因知之甚少 .在鱼类 ,近 40年来能证明IFN系统存在的证据主要有两个 :一是检测经病毒诱导后的多种鱼类机体和细胞 ,证明能产生类似哺乳类IFN的抗病毒活性物质 ;二是近年来 ,已经证明在少数几种鱼类中存在与哺乳类IFN系统基因Mx同源的基因 .以前的研究结果表明 ,紫外线灭活的草鱼出血病病毒 (GCHV)能够诱导鲤科鱼类培养细胞 ,如鲫鱼囊胚细胞 (CAB)产生类IFN活性物质 ,并建立宿主细胞的抗病毒状态 .为了揭示鱼类培养细胞抗病毒免疫的分子机制 ,首先建立了一个研究鱼类抗病毒免疫相关基因的细胞模型系统 ,通过用灭活GCHV诱导CABIFN并进行理化、生物学特性鉴定的基础上 ,成功建立了一个囊括鱼类细胞抗病毒基因在内的差减cDNA文库 .其次 ,筛选文库揭示了一批与哺乳类IFN系统基因同源以及找不到同源性的EST ,表达分析证实它们也是IFN刺激基因 .再次 ,根据哺乳类IFN系统研究的最新进展 ,从该细胞模型系统中克隆、鉴定了 1 9个IFN系统基因的全长cDNA序列 ,包括鲫鱼IFN基因 ,IFN信号传导通路基因STAT1 ,IFN诱导表达调控基因IRF7,IFN行使抗病毒作用的效应基因Mx1、Mx2、PKR、Viperin、IFI5 6,以及一些功能未知的     

次生萜类生物合成的调控

克隆了青蒿单萜合成酶(芳樟醇合成酶)cDNA,发现该酶基因的 转录可被伤透导。在棉花悬浮细胞中,真菌激发子诱导这两个基因的转录表达。在棉芬发育 种子中,FPS基因和杜松烯合成酶基因(CAD1)随腺体的出现而大量表达,导致棉酚等倍半萜 醛类的积累。在棉花幼苗和植株中,CAD1-A和CAD1-C具有不同的表达特征。     

幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建

目的　构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法　采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果　PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论　成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础.     

拟南芥GH3基因家族启动子序列分析

GH3 基因家族是植物生长素早期响应基因家族之一.拟南芥 10个GH3 基因启动子序列分析表明:GH3 基因的转录起始位点一般在起始密码子上游65~145bp之内,TATA box大多分布在(-24)~(-40)bp区域.MDB和MatInspector分析显示,AtGH3 s基因的上游调控区域普遍存在组织和器官特异性表达元件、激素响应元件以及环境响应元件,表明GH3 基因的表达受到多因素调控;同时,基因芯片数据显示AuxREs对生长素的响应非常重要,但也可能存在其他的生长素响应元件.     

人类疾病的基因治疗

基因是细胞内遗传物质的功能单位。脱氧核酸(DNA)是基因的物质基础。DNA分子上排列着各种不同基因,构成人体基因组。它携带着细胞内的所有蛋白质的遗传信息,编码支配细胞生长、分化的一切指令。因此,在生命过程中它起着主宰的作用。遗传信息按分子生物学的中心法则传递和表达。即DNA的脱氧核苷酸序列忠实地被拷贝成相应的核苷酸序列信使RNA(mRNA)。这个过程叫做基因转录。然后,再以mRNA为模板翻译成具有相应氨基酸序列的蛋白质,此过程叫做基因翻译。上述转录和翻译过程就是所谓的基因表达。基因表达受多种因素调控,只有在适当的时间和部位表达适当量的蛋白质才能发挥其正常功能作用,     

一种基于OPT的MPS编制方法

借助OPT的DBR法，对单一瓶颈环节条件下的主生产计划（MPS）进行了探讨。阐述了研究OPT的MPS问题的基本思路，建立了在单一瓶颈条件下，最小传输批量的基本算法及编制MPS的有关算法。     

北电OPT 61C程控交换机故障分析与处理

程控交换机是现代通信交换网的重要组成部分,因此,交换机的安全稳定可靠运行就显得尤为重要。文章对维护北京十三陵蓄能电厂的北电OPT 61C交换机运行中出现的几例故障进行了分析总结,并简要描述了故障的处理过程,希望能够对广大通信专业人员的日常维护工作有一定的参考价值。     

家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析

家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。     

Detection of L1 CAM mutation in a male child with mental retardation

Recent studies have presented evidence for the involvement of L1CAM gene mutations in various X-linked mental retardation syndromes. The neural cell adhesion molecule, L1CAM is a transmembrane protein belonging to the super family of the immunoglobulins that play a key role in embryonic development of the nervous system and is involved in memory and learning. No studies were carried out from India on L1 CAM gene in X-linked mental retardation syndromes. Hence, an investigation was taken up to delineate the role of L1CAM gene in mental retardation. Two families (Family I and Family II) having only two members affected with mental retardation in each family were studied for mutations in L1CAM gene. In family II, the younger sibling showed deletion involving region between the nucleotide 13,773 (intron 25) and 14,158 (intron 27) region. The mutation what we observed in younger sibling of the family II is a novel mutation which was not hitherto reported in the world literature.     

基因表达的三维调控

人类基因组草图及拟南芥菜和其它模式生物基因组全序列的公布极大地推动了基因组学研究的发展 ,也为生物的品种改良及产量和品质的提高奠定了基础。如何对天文量数据进行信息化处理 ,并将所得信息转入功能、应用研究是我们面对的新问题。我们将细胞特异性表达启动子与可诱导系统相结合 ,建立起可用于植物转基因表达时、空、量三维调控的基因开关系统 ,为功能基因组研究及通过基因工程技术对植物代谢实施精确调控提供了全新的思路。     

人Dcp2基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用

mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式。细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动。其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用，但对其降解mRNA的详细作用机制了解甚少。到目前为止，尚没有该基因市售的抗体出现，阻碍了对该基因机理的研究。本文目的是利用PCR方法，从人的胎肝文库中克隆到Dcp2基因，制备其多克隆抗体血清。实验结果显示，通过溴化氰偶联柱子对该多克隆抗体血清经纯化得到的多克隆抗体，用于Western Blotting 试验，可以检测到该蛋白内源性的表达；用于激光共聚焦定位实验显示该内源性蛋白定位在细胞核内；此抗体同时可用于免疫沉淀实验。因此Dcp2基因和多克隆抗体的获得，为进一步研究该基因的功能创造了条件。     

Generation of murine induced pluripotent stem cells by using high-density distributed electrodes network

This study reports a robust method of gene transfection in a murine primary cell model by using a high-density electrodes network (HDEN). By demonstrating high cell viability after gene transfection and successful expression of transgenes including fluorescent proteins, the HDEN device shows great promise as a solution in which reprogramming efficiency using non-viral induction for generation of murine induced pluripotent stem cells (iPSCs) is optimized. High and steady transgene expression levels in host cells of iPSCs can be demonstrated using this method. Moreover, the HDEN device achieved successful gene transfection with a low voltage of less than 180 V while requiring relatively low cell numbers (less than 1.5 × 10⁴ cells). The results are comparable to current conventional methods, demonstrating a reasonable fluorescent-plasmid transfection rate (42.4% in single transfection and 24.5% in triple transfection) and high cell viability of over 95%. The gene expression levels of each iPSC factor was measured to be over 10-fold higher than that reported in previous studies using a single mouse embryonic fibroblast cell. Our results demonstrate that the generation of iPSCs using HDEN transfection of plasmid DNA may be a feasible and safe alternative to using viral transfection methods in the near future.