HIF-1α和COX-2在力学诱导大鼠终板软骨细胞退变模型中的表达及意义

目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和环氧化酶2(COX-2)在间歇性循环牵张力作用下诱导大鼠终板软骨细胞退变中的表达情况及意义.方法:应用胰酶消化法获得大鼠终板软骨细胞,用FX-5000T仪器给予终板软骨细胞施加10%牵张力、0.5Hz、8h/d的力学刺激诱导终板软骨细胞退变,实验中设对照组(无力学刺激)和实验组(10%、0.5Hz、8h/d力学刺激),甲苯胺蓝染色观察细胞形态及二型胶原分泌情况,RT-PCR及Western blotting分别检测软骨细胞中HIF-1α、COX-2的m RNA和蛋白水平变化.结果:大鼠终板软骨细胞给予一定力学刺激后出现退变改变,软骨相关合成基因表达水平降低,实验组中HIF-1α、COX-2的m RNA及蛋白水平表达均较对照组增高,差异具有统计学意义(P0.05).结论:HIF-1α、COX-2在力学诱导大鼠终板软骨细胞退变模型中表达水平均增高,进一步推测其与椎间盘退变过程有关.     

淫羊藿素药物在终板软骨细胞退变中的保护作用研究

目的:探讨淫羊藿素药物对张力诱导下终板软骨细胞退变的保护作用.方法:分离获取大鼠终板软骨细胞,体外培养建立终板软骨细胞加力退变模型.设对照组(未加力的终板软骨细胞,NC组)、加力组(10%间歇性循环牵张力,10%ICMT,0.5Hz,8h/d,加力3天,ICMT组)及加力加药物组(加力组中加入不同浓度中药淫羊藿素,加药+ICMT组).倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色鉴定细胞表型.MTT法检测大鼠终板软骨细胞的增殖.实时聚合酶链反应及Western blotting检测Ⅱ型胶原(COL2A1)、蛋白多糖(ACAN)及SOX-9基因变化.结果:淫羊藿素在低浓度(2umol/L)药物范围内对大鼠终板软骨细胞生长无明显毒性作用,较高浓度对细胞生长与增殖有明显的抑制作用.终板软骨细胞体外加力后细胞表型改变,甲苯胺蓝染色可见细胞外基质减少,加药+ICMT组细胞外基质未见明显减少.淫羊藿素药物在一定药物范围内对大鼠终板软骨细胞具有保护作用,抑制细胞软骨细胞退变发生.结论:淫羊藿素通过抑制椎间盘终板软骨细胞退变的发生,进而起到保护终板软骨的作用.     

Txt5腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的表达

设计小鼠Txt5基因的特异性引物,将小鼠c DNA作为模板,用PCR扩增出m Txt5编码区,并加入HA标签序列.将这一片段插入p MD-18T载体,再亚克隆至p Adtrack-cmv穿梭载体上.线性化后,转化BJ5183感受态细胞,在BJ5183中发生同源重组获得p Ad-Txt5质粒.p Ad-Txt5线性化后转染293A细胞,包装得到含Txt5基因的病毒.将病毒溶液感染大鼠原代心肌细胞,一段时间后观察绿色荧光,然后通过RT-PCR和免疫印迹法检测HA标签蛋白的表达.结果表明成功构建小鼠Txt5腺病毒表达载体并实现在大鼠原代心肌细胞中的表达.     

流式细胞术测定Survivin基因在大肠癌中的表达及其意义

目的:研究Survivin基因在大肠癌中的表达及其与肿瘤发生、发展的关系.方法:流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测58例大肠癌(Colorectal carcinoma,CC)患者及10例正常者黏膜(Normal mucosa,NM)中Survivin表达情况,并结合临床病理相关因素,应用SPSS11.0统计软件进行统计学分析.结果:FCM定量检测表明,正常黏膜组Survivin表达平均FI值为1.00±0.28,高、中、低分化腺癌及粘液腺癌组Survivin表达FI值分别为3.16±1.39、3.20±1.04、3.32±0.48和3.31±1.06.高、中、低分化腺癌及粘液腺癌组Survivin表达均明显高于正常黏膜组(P<0.05).大肠癌淋巴结转移组平均FI值3.11±1.19,显著高于无淋巴结转移组2.26±1.38(P<0.05).FCM结果显示Survivin表达与患者的年龄、性别、肿瘤的发生部位等无关(P＞0.05).结论:Survivin在大肠癌中表达异常增高,显著高于正常肠黏膜组织.Survivin在大肠癌中的表达与淋巴结转移密切相关.     

小鼠Bmi1基因的克隆及其在支持细胞中的表达

目的从昆明鼠睾丸中克隆Bmi1基因,构建真核表达载体,并转染支持细胞,以便用作培养精原干细胞（SSCs）的滋养层.方法以5日龄昆明鼠为材料,提取小鼠睾丸组织中总RNA后,以RT-PCR技术克隆小鼠睾丸Bmi1基因,构建真核表达载体,并转染TM4细胞（睾丸支持细胞株）,在转染后40 h进行免疫荧光鉴定.结果成功克隆小鼠睾丸Bmi1基因的cDNA,测序正确;免疫荧光细胞染色显示,转染后的支持细胞中有Bmi1蛋白表达.结论本研究为以转染了Bmi1基因的支持细胞作饲养层培养SSCs奠定了基础.     

PAS家族转录因子及其下游基因在大鼠肝再生中的作用

为在基因转录水平了解PAS结构域转录因子家族基因及它们的下游基因在肝再生（1iverregeneration,LR）中作用．本文用Rat Genome230 2．0芯片检测上述基因在大鼠再生肝中表达情况,用真、假手术比较方法确定肝再生相关基因。初步证实25个基因与肝再生相关,它们在促进再生肝细胞分化及异源物、糖、脂代谢,促进肝再生早期的免疫反应和后期的血管发生中发挥作用。     

多药耐药基因在乳腺癌组织中的表达及其与预后的关系

目的:研究P-gp、ToPoⅡ、GST-π在乳腺癌中的表达及与预后的关系.方法:乳腺癌标本78例行SP法免疫组化法染色.结果:P-gp 阳性率为65.4%(51/78),Ⅲ期乳腺癌P-gp阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期,P-gp 阳性率与5年生存率呈负相关(P<0.05).GST-π阳性表达率为70.5%(55/78),在乳腺癌临床Ⅲ期中其阳性表达率高达76.2%,与临床Ⅰ、Ⅱ期相比有显著性差异(P<0.05),其阳性表达率与5年生存率呈明显负相关(P<0.05).ToPoⅡ的表达为64.1%(50/78),临床Ⅲ期表达明显低于Ⅰ,Ⅱ期.结论:化疗前检测P-gp,ToPoⅡ,GST-π的耐药基因蛋白,对判断乳腺癌的预后及指导化疗有一定的价值.     

地黄甲基转移酶/去甲基化酶基因的注释及其在块根发育过程中的表达分析

利用Windows-BLAST软件同源比较分析获得地黄转录组中的DNA甲基转移酶/去甲基化酶基因,同时利用基因表达谱测序方法分析这些基因在地黄不同发育时期块根中的转录子水平。利用拟南芥11个C5-MTase和4个DMase基因的蛋白序列进行同源性比对,在地黄转录组中共获得了18个DNA甲基转移酶unigene和11个去甲基化酶unigene。差异表达基因(DEG)分析显示,11个DNA甲基转移酶unigene和5个去甲基化酶unigene在块根的发育过程中表达具有差异,随块根发育成熟转录子表达含量逐渐降低,说明甲基化基因参与调控地黄块根的发育。首次挖掘和分析了地黄基因组中DNA甲基转移酶/去甲基化酶基因的分布和表达,为进一步研究DNA甲基化在地黄块根发育以及连作下块根生长受抑的表观遗传学分子机理奠定了基础。