低温冷链细胞存储设备在全自动无人化细胞库中的应用

细胞存储是细胞治疗技术产业链的上游基础,上游的细胞冻存质量是细胞治疗的核心要素,它关系到下游细胞治疗技术的提高与应用。为此,本文的目的是介绍低温冷链细胞存储设备在无人化细胞库中的应用,无人化细胞库的全低温冷链存储系统,通过智能化、信息化的存储方式。阐述了细胞冻存设备的功能、存储流程;研究的结果是不同功能的设备能够按照规划流程,智能化式作业,完成细胞冻存任务,最后得出低温存储设备能冻存满足活性要求的细胞,以供给细胞治疗应用的结论。     

冻存胚胎复苏移植的影响因素

为探讨冻存胚胎复苏移植妊娠的影响因素，统计分析了28个周期127个冻存胚胎复苏移植的妊娠率与胚胎冻存前形态，细胞数，保存时间，复苏后存活率，培养至次日的继续分裂率等因素的关系，表明妊娠周期冻存前胚胎形态良好比较，复苏后存活率，复苏后培养至次日继续分裂的比例有增高的趋势，胚胎细胞数妊娠与非妊娠周期相似，形态良好胚胎复苏后存活率显著高于形态不良者，说明冻存前胚胎形态与胚胎复苏存活率和冻存胚胎复苏移植妊娠率关系重要。     

动物组织细胞玻璃化冻存方法的研究进展

动物组织细胞的玻璃化冻存是一项新的深低温冷冻保存方法，已成功地冻存了多种动物细胞，具有较高的实际应用和研究价值。本文论述几种主要组织细胞玻璃化冻存方法的研究及其进展，如小鼠胰岛和卵母细胞，大鼠卵巢、牛胚泡、牛卵母细胞、猪胚胎、人胚胎等，不同冷冻保护剂，玻璃化溶液和冷冻程序对细胞存活率的影响。并提出了玻璃化冻存动物以及组织细胞的问题与展望。     

苯酚法提取动物全血中基因组DNA的优化方案

通过对《分子克隆实验指南》中以蛋白酶K和苯酚从哺乳动物血液中分离高分子质量DNA的操作步骤进行优化,探讨了不同操作对从冻存家养动物全血中提取DNA质量的影响,为家养动物的分子生物学研究提供参考。     

抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体高表达细胞株的克隆筛选

目的:以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为宿主,构建高表达抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体的细胞株。方法:本研究将构建好的抗EGFR单克隆抗体轻链和重链的表达载体,通过优化的电转方法转入CHO宿主细胞,确定G418的工作浓度,在含G418的化学成分已知的培养基中进行克隆筛选,最后筛选后的转染库进行三次克隆筛选,获得稳定高表达抗EGFR抗体的细胞株。结果:通过进行表达量稳定性分析后,筛选出一株表达量较高的细胞株。结论:该克隆筛选方法可行,为抗EGFR抗体的生产提供了稳定高产的细胞系。     

动物胚胎的玻璃化冻存

动物胚胎的玻璃化冻存是一项新的深低温冷冻方法,已成功地冻存了多种动物和人的胚胎,具有较高的实际应用和研究价值。本文结合本实验室的研究工作,论述玻璃化冻存方法在动物胚胎保存中的应用,不同保护剂和玻璃化溶液对胚胎存活率的影响,分析影响玻璃化冻存的主要因素包括冷冻保护剂与玻璃化溶液的选择、预平衡过程、冷却和复温速率控制、去玻璃化的避免、冻存后玻璃化溶液的洗脱等。     

A549细胞冻存与复苏方法的改进

正起始于20世纪早期的细胞培养技术作为生命科学研究最基础的环节,随着分子生物学实验技术的发展,在生物学研究领域得到了广泛应用,如培养肿瘤细胞是研发抗肿瘤新药的常规技术。A549是1972年由Giard DJ通过肺癌组织移植培养建系的一种肺癌细胞。我们以A549细胞为例,研究细胞培养中最基本但又很关键的冻存与复苏的方法和条件,使A549冻存复苏后获得最高生物学特性,推动后期实验顺利进行。实验所需材料与方法实验材料A549肺癌细胞,RPMI-1640培养基(GIBCO公司),胎牛血清(四季青),DMSO(北京鼎国昌盛生物技     

小鼠超高硫角蛋白基因启动子的分子克隆及序列分析

根据小鼠超高硫角蛋白（UHS）基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以小鼠全血提取的总DNA为模板,PCR扩增出688bp的特异性片段,连接到pMD19T载体中获得该片段克隆p19TU。经过快速提取质粒法筛选、限制性内切酶分析证明该克隆就是UHS基因5’端的调控区序列。序列分析结果也表明该克隆片段与原基因调控序列相比具有很高的一致性。研究结果为今后制备转基因克隆动物、在毛囊细胞中特异性表达绒毛生长调控基因奠定了基础。     

重组CHO细胞的冻存与复苏条件研究

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rh TNFR-Fc)在治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎等方面具有显著疗效~([1]),并日益显示出其重要作用和广阔的市场前景。随着细胞融合技术及基因工程的发展,大规模动物细胞培养技术已成为生物制药走向产业化的关键和核心。本文以表达rhTNFR-Fc的CHO细胞为研究对象,通过确定合理的冻存及复苏条件,建立合理的控制策略,为提高CHO细胞的细胞密度和目的蛋白产量,为rhTNFR-Fc融合蛋白的工业化生产奠定基础。     

研究发现克隆动物出生率低的关键原因

中科院上海生科院生化与细胞所李劲松研究组林江维等人通过采用四倍体胚胎补偿的技术,对“克隆囊胚滋养外胚层存在的重编程异常细胞是克隆胚胎发育失败的主要原因”这一假说进行了直接的验证。他们先将一个克隆胚胎与两个四倍体胚胎聚合在一起,发现聚合胚胎的出生率提高了2．6倍。     

我科学家育出人胚胎干细胞

上海第二医科大学沈慧真博士及其领导的研究团体日前宣布,他们已通过将人类皮肤细胞与兔子卵细胞融合的方法培植出了人类胚胎干细胞。此项研究的成果刊载在我国权威学术期刊《细胞研究》8月13日的网络版上。据美国《华尔街日报》最新报道,沈慧真等人的工作建立在治疗性克隆的机制上,即用取自病人的细胞克隆一个胚胎,从中提取干细胞,培育成与病人遗传匹配的组织,这样就可以解决免疫排斥问题。因为人类的卵子很短缺,所以沈慧真等人使用较为容易获得兔子卵细胞展开研究。研究人员先将兔子卵细胞中的DNA去除,然后将人类皮肤细胞植入基中。这些…     

2002：克隆年——勇敢面对新世界

作为物种，我们已不可逆转地进入了新的阶段。克隆科技已经处于复制人类的进程中，世界上的许多实验室现在都拥有克隆的知识、仪器和技术。如果不是上千。至少也是上百的人在排队等待接受克隆。这不仅是2002年最重要的科学故事，也是本世纪的最重要的科学故事。     

草鱼细胞株（ZC—7901）乌苯苷抗性突变体的筛选

采用甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）诱变草鱼吻端组织细胞（ＺＣ－７９０１）．用乌苯苷（Ｏｕａｂａｉｎ）筛选抗药性突变体．结果表明，ＥＭＳ对草鱼细胞的诱变效果与该药物对哺乳类细胞的诱变效果有明显差异．草鱼细胞对乌苯苷的敏感性也大大低于哺乳类细胞．ＺＣ－７９０１细胞在传代后２４ｈ，用浓度为２．８ｍｇ／ｍｌ的ＥＭＳ处理２４ｈ，诱变效果较理想，细胞杀伤率约３０％，这比通常用ＥＭＳ诱变哺乳类细胞所使用的浓度（０．４ｍｇ／ｍｌ）增大了７倍，存留下来的细胞用浓度为２５ｍｍｏｌ／Ｌ乌苯苷筛选抗性突变体，有少数细胞存活，并具有分裂增殖能力．但在细胞瓶内不易形成单层     

美国首次利用克隆技术产生胰岛素分泌细胞

<正>研究人员利用32岁Ⅰ型糖尿病女患者的皮肤细胞产生了这个胚胎干细胞系的克隆。这项研究无疑也是糖尿病病人的福音,期待它早一天进入人体试验阶段,为广大糖尿病患者造福。科学家在"治疗性克隆"领域又实现新突破。美国纽约研究人员使用克隆技术,以糖尿病患者的DNA首次制造出胰岛素分泌细胞,完美匹配病人的DNA。这是继一周前公布的首次利用成人皮肤细胞克隆出干细胞后,一个月内第二次出现的克隆干细胞实验,但研究人员表示,该技术将首先以治疗为目的,服务于糖尿病患者。     

克隆羊“多利”(1996年)——伊恩·威尔莫特(1944～)

1996年7月5日,"多利"诞生于爱丁堡附近的罗斯林小村中,它是用一只6岁黑面母羊的单一乳腺细胞克隆而成的。就在前一年,用羊胚胎细胞已经创造出另外两个克隆体——玛根和莫瑞。因为多利是用成年羊克隆的,所以是独一无二的。她既没有母亲也没有父亲,没有继承父亲或母亲的一半基因,而是一只提供乳腺细胞的无名母羊的基因复制品。     

细解“克隆人类囊胚”

据新华社2月3日报道,继美国科研人员去年首次宣布由人体细胞成功克隆人体胚胎后,我国科研人员利用不同来源的人类成体细胞成功克隆出5枚符合国际公认技术鉴定指标的人类囊胚。克隆和干细胞领域国际权威学术期刊《克隆和干细胞》杂志网络版1月27日发表了这一研究成果。就在国内众多媒体纷纷转载这条消息的同时,一些质疑的声音也出现了……     

无性生殖自寻末路

自从克隆绵羊多莉问世以后，克隆猪，克隆牛，克隆马，克隆兔以及冒牌的克隆商品也纷至沓来，现在又有机构扬言要克隆人，一时间，不仅“克隆”名词走俏，连克隆产品跟着时髦，令人喜忧参半。我们知道，克隆的本意是无性繁殖。据20世纪70年代国外出版的一部科幻小说描写，有一位没有子女、心理变态的百万富翁，如何隐名埋姓，违反伦理道德，耗费巨资延聘科学家，利用自身细胞繁殖一个继承人，用今天的话说，就是克隆出一个自己的故事。想不到科学的发展真可能让这一梦魇成为现实。毋庸置疑，科学技术本身就是一把双刃剑，对人类社会既有利的…     

大麦幼胚的超低温保存

大麦(Hordeum vulgare L.)幼胚经二甲亚砜(DMSO)和山梨醇复合保护处理,可以在液氮(-196℃)超低温保存.山梨醇预培养2天可以明显提高两步冷冻法冻存幼胚的存活率.4℃预处理4小时对胚存活率的影响不大,但它使幼胚分化能力下降,超低温冷冻对盾片的伤害小于对胚轴的伤害.快速冷冻法冷冻大麦幼胚取得良好的保存效果,冻存后的幼胚经过恢复培养,长出绿苗.     

灭绝动物能复活吗?

2013年5月29日,俄罗斯东北联邦大学的谢姆蒙·格里戈里耶夫称,他们于5月早些时候在北冰洋一座岛屿上发现一具保存较完好、存有液态血液的猛犸象尸体,因此有可能在这具猛犸象尸体中找到活细胞,从而打开克隆这种史前巨型哺乳动物的大门。     

菠菜的两种贮藏法

(一)冻藏法:利用逐渐降低的气温使入贮的菠菜逐渐适度冻结,并在冻结的状态下冻藏直至上市。具体做法是在风障、房屋或院墙北侧遮阴部位做与风障方向相同的菜畦,畦深同菠菜高,将经扎捆预冷的菠菜在畦中顺向码两排,中间留约15厘米空隙,菜捆间不要靠得太紧,以利通风散热。然后在菠菜上覆一层细土或细砂,以后随天气渐冷,逐步覆土保持冻结状态,以不化不能深冻为度。