抗雌激素多克隆抗体的制备及效价鉴定

为了快速安全地检测动物性食品中是否含有过高浓度雌激素,本研究将半抗原雌二醇(Estradiol, E₂)合成为雌二醇-3-羧甲基醚(E₂-3-CME),再通过碳二亚胺(EDC)法与牛血清白蛋白(BSA)结合,合成完全抗原(E₂-BSA).将1 mg/只的E₂-BSA免疫雌性家兔,制备出抗雌激素的抗体.通过用酶联免疫吸附(Elisa)实验对产生的抗体进行效价鉴定.实验结果表明,第三次免疫后E₂-BSA产生的抗体光密度值(OD)最高,且与对照组,免疫一次和两次产生的抗体的OD值均具有明显差异,显示通过抗原免疫三次的家兔产生的抗体效价最高,可为后期通过此方法制备抗体和Elisa试剂盒奠定基础.     

人Rab7基因的原核表达与多克隆抗体制备

利用RT—PCR技术从HEK293细胞中克隆到人Rab7基因,通过双酶切将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌E．coliDH5α感受态细胞,获得阳性克隆．24℃下IPTG诱导表达,Glutathi—one Sepharose 4B纯化后获得高纯度的Rab7蛋白．并以此为抗原免疫小白鼠,获得了Rab7的特异性抗体．     

抗MCM5蛋白多克隆抗体的制备及纯化

用已经制备的纯化的MCM5蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗MCM5蛋白的多克隆抗体.重组蛋白MCM5既具有免疫原性又具有免疫反应性.     

抗MCM5蛋白多克隆抗体的制备及纯化

用已经制备的纯化MCM5蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗MCM5蛋白的多克隆抗体.重组蛋白MCM5既具有免疫原性又具有免疫反应性.     

抗重金属镉离子鼠源性多克隆抗体的制备与鉴定

制备并鉴定针对重金属镉离子的小鼠多克隆抗体.选取异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)做金属螯合剂,偶联Cd~(2+)及载体蛋白BSA、OVA,制备人工抗原并鉴定,配合佐剂乳化后以高、中、低剂量分别免疫Balb/C小鼠,以获得较好的抗重金属镉离子小鼠多克隆抗体血清.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定所获抗体的效价、敏感度、特异性.结果显示:小鼠抗血清效价均在10~(-3)～10~(-4),中剂量抗原免疫组小鼠抗体血清更加稳定、特异性强,利用该组多抗建立间接竞争ELISA(icELISA)标准曲线,M-3号小鼠敏感性最强,回归方程为y=0.1123x-0.1638,IC_(50)质量浓度为368.70μg/L,检测限质量浓度为25.53μg/L,该抗体除与汞离子螯合物的交叉反应率为72.58%之外,与Cu~(2+)、Zn~(2+)、Pb~(2+)、Cr~(3+)、Mo~(6+)、Fe~(3+)、Co~(2+)均无交叉反应.获得了能用于镉离子免疫检测的高效价Cd~(2+)多抗,为检测产品的开发打下基础.     

果蝇血液发育标记基因Dox-A3多克隆抗体的制备

从野生型成体果蝇体内提取总RNA,以cDNA作为模板进行PCR扩增,获取Dox-A3部分基因片段,将这片段连接于原核表达载体pET-28a上,成功构建重组质粒pET-28a-Dox-A3.将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,用ITPG诱导表达出融合蛋白,然后将经Ni-IDA凝胶柱纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备Dox-A3多克隆抗体,通过Western-Blot检测效价和特异性.结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体.     

褐飞虱flightin基因多克隆抗体的制备及应用

为探讨不同翅型和龄期褐飞虱体内的flightin蛋白表达情况,通过Gateway重组技术构建原核表达载体pDEST17-flightin,以终浓度为1mmol/L的IPTG诱导的蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。Western blotting检测表明,制备的flightin抗体可特异性地检测褐飞虱体内的flightin蛋白。间接ELISA检测结果表明,所制备的抗体效价达1∶6 400。flightin蛋白在褐飞虱长翅成虫中大量表达,在短翅雄虫中也检测到有微量表达,而在短翅雌虫和若虫中则检测不到。     

克隆牛犊可生产人类抗体

A growing herd of cloned calves may provide a variety of human antibodies(抗体) to treat diseases ranging from childhood ear infections to smallpox.The cloned and genetically engineered calves carry not just a single human gene, but a section of genes that     

单克隆抗体制备过程中抗体检测方法释疑

以国际抗体验证工作组发表的关于验证抗体特异性策略的提议为基础,介绍抗体检测和特异性验证的五大支柱策略,系统性解答学生在学习单克隆抗体制备内容时的疑惑。     

果蝇EF-1α蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

为进一步研究延长因子-1（elongationfactor-1α,E-1α）在调控心脏发育和果蝇心脏功能中发挥的作用,制备延长因子-1的抗体．利用生物信息学选择果蝇EF-1α基因抗原亲水区,并设计出特异性引物,PCR扩增出的片段克隆到原核表达pET-28a载体中,转入E．coli中后通过IPTG诱导融合蛋白表达,将His—EF-1α融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,再用WesternBlot检测抗体的效价和特异性．研究结果表明,获得了EF-1α原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗EF-1α多克隆抗体．EF-1α多克隆抗体的效价可以达到1比1500,并且有很强的特异性,为后续研究EF-1α基因在心脏发育和心脏功能中的作用奠定了基础．     

抗体种类为何如此多

本文从基因重排、体细胞高频突变等方面介绍了抗体种类多样性的产生机制。     

用高度特异性王浆主蛋白1多克隆抗体ELISA法检测蜂王浆新鲜度(英文)

目的:为蜂王浆主蛋白1(MRJP1)的快速检测和鉴别提供科学依据,为蜂王浆的质量控制提供技术支持。创新点:首次比较了MRJP1特异性多克隆抗体与MRJP1重组表达蛋白多克隆抗体对王浆主蛋白家族的免疫反应差异,验证了蜂王浆中MRJP1蛋白降解与保温时间的相关性,建立了以MRJP1作为蜂王浆新鲜度生物标志物的快速检测方法。方法:通过蜂王浆主蛋白家族蛋白的氨基酸序列同源性分析,筛选出MRJP1的特异性多肽区域,进行人工合成,免疫兔子后取血清制备成特异性多克隆抗体。用蛋白质印迹法(Western blot)检测了MRJP1特异性多克隆抗体与MRJP1重组表达蛋白多克隆抗体对王浆主蛋白家族的免疫反应。以新鲜蜂王浆为对照品,用MRJP1特异性抗体酶联接免疫吸附剂测定(ELISA)法和变性电泳胶灰度扫描法分别测定保温(40°C)7~49天的蜂王浆中MRJP1含量的变化,并进行了相关性分析。结论:MRJP1的特异性抗体对MRJP1蛋白具有专一的免疫识别特性,可特异性地检测代表蜂王浆新鲜度的MRJP1含量变化,并鉴别蜂王浆的真伪。     

大型溞胆碱酯酶蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备和适用性研究（英文）

目的:原核表达并纯化大型溞胆碱酯酶(ChE),制备鼠抗大型溞ChE多克隆抗体,并对抗体的适用性进行研究。创新点:首次通过原核表达获得了大型溞重组ChE蛋白,通过免疫小鼠获得了高效价、高特异性的多克隆抗体,通过样品检测证明了抗体的适用性。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)技术获得大型溞ChE基因编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体p ET-29a(+),构建重组表达质粒p ET-ChE,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达;对表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和酶活性检测,并对蛋白进行纯化(图4);使用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体(图5),用酶联免疫吸附分析法(ELISA)对处于三唑磷和低温胁迫下以及经反复冻融处理的大型溞体内的ChE含量变化进行检测(图7、表6和7),以评价抗体的可适用性。结论:获得了高纯度的ChE重组蛋白;免疫小鼠后,获得了特异性强、高效价的抗体;通过对处于三唑磷和低温胁迫下以及经过反复冻融处理的大型溞体内的ChE含量的检测,证明了抗体的适用性。     

抗体与诱导酶

免疫学的研究认为，抗体是机体受到抗原刺激后所产生的，并能与该抗原发生特异性结合的免疫球蛋白（简单蛋白），无论是在人体正常的体液免疫中，还是异常的过敏反应以及自身免疫中，部起着关键性的作用。可以说，抗体是特异性免疫系统的核心所在。     

何谓单克隆抗体

1975年,英国科学家米尔斯坦和法国科学家柯勒开创了将产生抗体的单个细胞(如B淋巴细胞)和瘤细胞(如骨髓瘤细胞)杂交的技术,形成杂交瘤细胞,成功地获得了化学性质单一、特异性强的单克隆抗体,并因此获得1984年的诺贝尔生理学及医学奖。融合后的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性:一方     

单克隆抗体的应用

本文着重讨论单克隆抗体在生物学、医学研究领域的应用。     

单克隆抗体及其应用

1975年英国科学家 Kohler 和 Milstein 在 Nature 上发表了题为《分泌预定特异性抗体的融合细胞的持续培养》一文,报道了将经过绵羊细胞 SRBC 免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞相融合,建立定向产生抗 SRBC 的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)技术,并指出在体外大规模培养这些细胞以提供特异性抗体,将在医学和工业领域具有应用价值。这篇经典的论文是人类第一次按照自己的意图在体外产生预定的针对某一抗原决定簇的单克隆抗体的里程碑,两位科学家也因其卓越的发现被授予1984年诺贝尔医学或生理学奖。由于这项技术的     

一种基于克隆选择与多父体杂交的函数优化算法

提出了一种基于克隆选择与多父体杂交操作的函数优化算法。算法通过克隆选择、高频变异与多父体杂交操作对多个可行解进行搜索，提高了克隆选择算法在解决函数优化问题的全局寻优性能。     

单克隆抗体疑点释疑

一、释疑知识点——单克隆抗体的制备1．抗体B淋巴细胞产生。其主要成分为：球蛋白．具有特异性,而从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差．