米诺环素对压力作用下体外培养神经细胞凋亡的抑制

目的在开放式压力控制培养系统作用下体外培养大鼠视网膜神经细胞（retinal neurons,RNs）,观察米诺环素对其活性及凋亡的影响．并进—步探讨其对受损RNs保护的可能机制．方法采用出生0-3d的Sprague Dawlev（SD）大鼠视网膜神经细胞体外混合培养。制备RNs加压培养模型．通过细胞形态学观察,四唑盐（MTT）比色法测定细胞活力,吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）染色法检测细胞的凋亡率来观察米诺环素对上述损伤细胞的保护及治疗作用．以及应用免疫细胞化学染色法。观察诱导型一氧化氮台酶（iNOS}和半胱天冬酶-3,（caspase-3）表达的改变、结果 加压培养后,在倒置显微镜下RNs与对照组相比形态改变较咀.细胞活力降低,大量细胞发生凋亡（占53.93％）.而米诺环素治疗组（20μmol／L）细胞则形态改善．活力显著增高：凋亡数目减少（占17．29％）．差异具有显著性（P〈0.0051）。免疫细胞化学染色法示米诺环素治疗组细胞内NOS和caspase-3表达较加压损伤组减少。结论 一定剂量的米潜环素在体外可有效抑制蓝力。引起的大鼠视网膜神经细胞损伤及凋亡。抑制NOS和capase-3的表达可能是其潜在作用机制。     

参麦注射液对树突状细胞免疫活性的影响

目的 研究参麦注射液对树突状细胞(DC)免疫活性的影响，并初步探讨其作用机理．方法 从人外周血分离单核细胞，对照组用GM-CSF和IL-4诱导DC，参麦组另加参麦注射液，两组均自第5天起加TNFa促成熟，倒置显微镜观察细胞形态；收集培养10天的DC用流式细胞仪做表型检测；用MTT法检测DC诱导T细胞增殖的作用；用ELISA法测定DC上清中IL-12分泌量．结果 外周血单核细胞经细胞因子及参麦注射液干预诱导10天，表现出典型DC形态，对照组和参麦组DC形态无差异；两组DC的CDla、CD40、CD80等表面分子表达无显著差异；参麦组DC诱导T细胞增殖的能力增强；参麦组DC分泌IL-12的量高于对照组．结论 参麦注射液对DC表面分子的表达无明显影响，但可增加IL-12的表达，增强DC的免疫活性．     

AQP-1和AQP-5在卵巢上皮性肿瘤的表达及临床意义

目的探讨AQP1及AQP5在卵巢上皮性肿瘤的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测105例卵巢上皮性肿瘤和10例正常卵巢组织AQP1和AQP5蛋白的表达。结果AQP1主要表达于毛细血管及小血管内皮细胞．而AQP5表达于卵巢肿瘤细胞。随着卵巢上皮性肿瘤由良性向恶性发展,AQP1和AQP5的表达逐渐增加（P〈0．05）。Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌AQP1的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期（P〈0．05）,伴淋巴转移者AQP1明显高于无淋巴转移者（／9〈0．05）;腹水大于1000mL者AQP1和AQP5的表达明显高于小于1000mL者（P〈0．01）：低分化卵巢癌AQP5的表达明显高于高、中分化者（P〈0．05）;AQP1及AQP5的表达与腹水量呈正相关（r分别为0．40,0.31;P〈0．05）。结论AQP1和AQP5高表达与卵巢癌的发生、发展及预后有关,可能是卵巢癌腹水产生的主要原因。     

氯化铵对顺铂诱导A549细胞凋亡的形态学研究

目的探讨氯化铵(NH4CL)对顺铂(cisplatin,CDDP)抑制A549细胞增殖的影响。方法体外培养人肺癌A549细胞,MTT法检测NH4CL及CDDP对人肺癌A549细胞增殖率的影响;光镜下观察NH4CL及CDDP对A549细胞生长的影响;共聚焦显微镜下观察A549细胞核的形态变化。结果与对照组相比,给予不同浓度的NH4CL及CDDP导致A549细胞增殖率明显下降;光镜下观察A549细胞经非毒性剂量的NH4CL与CDDP联合应用处理后细胞生长抑制明显高于单独给予CDDP组;共聚焦显微镜观察可见非毒性剂量的NH4CL与CDDP联合应用处理A549细胞核碎裂现象明显多于单独CDDP处理组。结论 NH4CL可以促进CDDP对A549A细胞的凋亡诱导作用。     

叠氮钠(NaN3)诱变对雨生红球藻的生理效应

用浓度分别为0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10 mmol/L的叠氮钠（NaN3）处理雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）,6 d后用细胞计数测定致死率。然后取浓度分别为0、1、2、3、4、5、6mmol/L的NaN3处理过的存活细胞,经数代培养后以相同起始浓度在适宜条件下培养10 d,然后测定生长指标。结果表明：浓度为1mmol/L的NaN3处理有利于促进藻细胞的生长,而其它浓度处理则对藻生长起抑制作用;但不同浓度处理都有利于促进虾青素的积累,其中又以1mmol/L的NaN3处理后的虾青素含量最高,之后随处理浓度的增加虾青素量反而下降;结果还发现一定浓度的NaN3处理有利于提高藻耐高温的能力,但对耐低温能力影响不大。     

纳米氧化锌对人肺腺癌细胞A549的毒性

探讨纳米氧化锌（ZnO）对体外培养的人肺腺癌细胞A549的生物学效应。使用原子力显微镜（AFM）、透射电镜（TEM）和X射线衍射仪（XRD）研究纳米ZnO颗粒物的理化性质。然后,使用0mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的纳米ZnO处理体外培养的人肺腺癌A549细胞,MTT 法测定细胞生长活性。并且测定1mmol/L 纳米ZnO染毒24h后细胞培养液上清中,乳酸脱氢酶（LDH）和胞内的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量。使用透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。荧光染色检测细胞产生活性氧（ROS）的生成。实验所用的ZnO纳米颗粒为长75 nm、直径20nm的针状纤锌矿晶体。细胞实验结果表明,纳米ZnO颗粒对A549细胞的生长活性具有明显的抑制作用,存在剂量－效应关系。培养液上清中LDH活性显著升高（P < 0.05）,胞内CAT活性显著下降、MDA含量显著升高（P < 0.01）,但SOD活性下降不明显。荧光染色检测发现染毒后A549细胞出现细胞凋亡,而且细胞内ROS的生成与纳米ZnO存在剂量－效应关系。结论是纳米氧化锌诱导人肺腺癌A549细胞产生活性氧,引发细胞凋亡,并产生细胞毒性。     

逍遥散中三种类植物雌激素对MCF-7细胞增殖的影响

目的:考察逍遥散中所含的伞形花内酯、阿魏酸和柴胡皂苷d三种类植物雌激素成分对MCF-7乳腺癌细胞增殖的影响。方法:利用体外培养的ER阳性人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,采用MTT法测定对MCF-7细胞增殖的影响。结果:伞形花内酯(100μmol/L)、阿魏酸(100μmol/L)、柴胡皂苷d(100μmol/L)、均可显著抑制MCF-7细胞的增殖(P0.05),对细胞有毒性作用,不适合用于下一步的实验研究,其他药物浓度对细胞增殖无明显影响。结论:伞形花内酯、阿魏酸、柴胡皂苷d能抑制细胞增殖可能是其发挥了抗雌激素样作用,但其发挥作用的机制还有待于深入研究。     

氧化苦参碱对神经母细胞瘤NGF/TrKA信号转导通路的影响

目的:了解应用氧化苦参碱对人神经母细胞瘤的治疗作用和发病机制。方法:取对数生长期人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株,分为对照组和4个不同浓度药物组,每组5个复孔。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定对细胞增殖的影响,RT-PCR法检测TrKA m RNA表达。结果:氧化苦参碱对神经母细胞瘤增殖有明显抑制作用。结论:体外实验证明氧化苦参碱对人神经母细胞瘤有治疗作用,为临床应用提供依据。     

厚朴酚对视网膜母细胞瘤细胞生长增殖的影响

目的探讨厚朴酚对人视网膜母细胞瘤HXO-RB44生长增殖的影响。方法体外培养HXO-RB44细胞,用终浓度为5～40μM的厚朴酚处理24～72h,用MTT法检测厚朴酚对细胞生长抑制情况,并用流式细胞术检测处理后细胞周期的改变。结果 5～40μM的厚朴酚能抑制HXO-RB44细胞的生长,随着浓度的增加,抑制效应逐渐增强。同时,厚朴酚随着孵育时间的延长,抑制效应更加显著。流式细胞术证实厚朴酚能将HXO-RB44细胞抑制在S期。结论厚朴酚能体外抑制HXO-RB44细胞的增殖,是通过将细胞阻滞在S期而发挥抑制作用。     

高原中老年人血糖与尿糖检测结果的对比研究

目的：探讨高原中老年人血糖浓度与尿糖检测结果之间的关系。方法：系用葡萄糖氧化酶法测定248例空腹血糖＞6．1mmol/L的高原中老年人的血糖和尿糖结果，并进行了分组比较。结果：血糖浓度为6．1－8．0mmol/L时，各年龄组尿糖阳性检出率无显著性差异（P＞0．05）。血糖浓度为8．1－10．0mmol/L时，随年龄的增加，尿糖阳性检出率降低，各年龄组之间有显著性差异（P＜0．01）。血糖浓度为10．1－12．0mmol/L时，50－59岁组与60－69岁组间尿糖阳性检出率有显著性差异（P＜0．05）；50－59与组与70岁以上组间有非常性差异（P＜0．01）。血糖浓度＞12．0mmol/L时，各年龄组间尿糖阳性检出率无显著性差异（P＞0．05）。结论：高原中老年人，随年龄的增加及长期高血糖有可能导致肾小动脉硬化，肾小球滤过率降低，肾糖阈提高。提示临床医师不能根据尿糖结果推测血糖浓度，以免延误诊断和治疗。     

IGF-II促MC3T3-E1细胞增殖和存活及影响NO水平的研究

目的　研究胰岛素样生长因子 2(IGF II)对小鼠成骨细胞株MC3T3 E1细胞促增殖、存活和影响一氧化氮(NO)水平的作用.方法　体外培养成骨细胞株MC3T3 E1细胞,分别加入不同浓度的IGF II,用MTT法、酶化学法检测MC3T3 E1细胞增殖和NO水平的变化.结果　IGF II对MC3T3 E1细胞有促增殖作用,在1～100ng/mL范围内呈浓度依赖性;第3天时100ng/mLIGF II组的NO水平明显低于对照组(P<0.01);培养5天和6天后,对照组细胞6天OD值明显低于5天OD值(P<0.01),而100ng/mLIGF II组细胞6天OD值则显著高于5天OD值(P<0.01).结论　IGF II能促进MC3T3 E1细胞的增殖,抑制细胞NO产生,并具有抗MC3T3 E1细胞死亡作用.     

IGF-Ⅱ促MC3T3-E1细胞增殖和存活及影响NO水平的研究

目的研究胰岛素样生长因子-2(IGF-II)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞促增殖、存活和影响一氧化氮(NO)水平的作用.方法体外培养成骨细胞株MC3T3-E1细胞,分别加入不同浓度的IGF-II,用MTT法、酶化学法检测MC3T3-E1细胞增殖和NO水平的变化.结果 IGF-II对MC3T3-E1细胞有促增殖作用,在1～100 ng/mL范围内呈浓度依赖性;第3天时100 ng/mL IGF-II组的NO水平明显低于对照组(P<0.01);培养5天和6天后,对照组细胞6天OD值明显低于5天OD值(P<0.01),而100 ng/mL IGF-II组细胞6天OD值则显著高于5天OD值(P<0.01).结论 IGF-II能促进MC3T3-E1细胞的增殖,抑制细胞NO产生,并具有抗MC3T3-E1细胞死亡作用.     

纳米硒对断奶仔猪生长和免疫的影响

将纳米硒和亚硒酸钠2种硒源分别以0．1、0．2、0.3、0．4、0．5、1．0mg／kg6个硒水平添加到基础日粮中,配制成12种试验日粮,基础日粮作对照,研究纳米硒和亚硒酸钠对仔猪生长和免疫的影响。结果显示：（1）亚硒酸钠添加浓度在0.2～0．5mg／kg硒添加水平范围内仔猪生长性能处于高峰平台,1．0mg／kg硒添加水平仔猪生长性能显著低于0．2～0．4mg／kg硒添加水平。纳米硒添加浓度在1．0mg／kg,仔猪生长性能仍然保持在高峰平台。硒源添加浓度在0．1～0．3mg／kg时,亚硒酸钠和纳米硒对仔猪生长性能的影响无显著差异;硒源添加浓度在0．4～1．0mg／kg时,纳米硒组仔猪生长性能显著高于亚硒酸钠组。（2）硒添加浓度在0．1-0．3mg／kg时．两种硒源对血清免疫球蛋白IgG和IgM含量、抗体生成细胞数、巨噬细胞吞噬率、天然杀伤细胞活性的影响差异不显著：硒添加浓度在0．4～1．0mg／kg硒时,纳米硒组的上述指标显著高于亚硒酸钠组。（3）硒显著提高了免疫器官指数和血清免疫球蛋白IgA含量,两种硒源和硒添加水平对之没有显著影响。上述结果提示．纳米硒的Weinberg剂量-效应的最适剂量范围宽于亚硒酸钠．对仔猪的安全性更高。     

拳卷地钱总黄酮提取物抗乙型肝炎病毒体外实验研究

目的:通过体外实验,探讨拳卷地钱总黄酮提取物抗乙肝病毒的作用。方法:将拳卷地钱总黄酮提取物作用于HBV-DNA转染细胞系2.2.15细胞,通过检测细胞培养液中HBsAg、HBeAg的变化来评价拳卷地钱总黄酮提取物抗乙肝病毒的效果及其可能的药理活性部位。结果:当拳卷地钱总黄酮提取物的最大无毒浓度为31.3μg·mL-1,对2.2.15细胞HBeAg、HBsAg分泌抑制率分别为51.56%、39.69%;治疗指数(TI)>2。结论:在2.2.15细胞无毒浓度下,拳卷地钱总黄酮对2.2.15细胞HBsAg、HBeAg分泌具有比较好的抑制作用;且可以有效阻止HBV-DNA表达和复制。提示:拳卷地钱总黄酮提取物在体外有一定的抗乙肝病毒作用。     

Phellinus chrysoloma（Fr.）Donk抗肿瘤作用初步研究

本文通过体外细胞毒试验，体内肿瘤细胞抑制试验。研究了Phollinus chrysoloma（Fr.）Donk（P．chrysoloma）丙酮、甲醇，水分级提取物的细胞毒．抗肿瘤活性。结果显示 P.chrysoloma．丙酮及甲醇提取物可显著抑制S-180细胞的增殖，各级提取物均具有显著抑制S-180肿瘤生长的作用。     

体外法测定青藏高原冬季草场放牧牦牛甲烷排放量

牦牛甲烷排放量试验采用体外产气法对冬季牧场放牧牦牛甲烷排放进行了初步研究。采集冬季牧场主要的可食牧草早熟禾（Poaannua）、中华扁穗草（Blysmussinocompressus）、獐牙菜（Swertiabimaculata）作为培养底物,并选择3头大通牦牛（1ive—weight：170±5kg）,通过瘤胃采样器采集瘤胃液进行体外培养,36h后终止发酵。结果表明,随着培养的增加,体外产气量也逐渐上升,在24h达到最大值。早熟禾、中华扁穗草、獐牙菜24h累计产气量分别为129．2mL、70．8mL和73．8mL。而甲烷产量在0—6h逐渐升高,在9h达到最大,早熟禾为31．10L／Kg和獐牙菜18．74L／Kg,之后随培养时间的增加而逐渐降低。在牦牛采食上述三种牧草的情况下,其一天产甲烷量在18．74L／kg-31．10L／kg之间。     

EGFR在IL-1介导下人牙龈成纤维细胞表达的研究

目的：观察表皮生长因子受体（EGFR）在IL-1干预下在牙龈成纤维细胞中的表达。方法：利用免疫组化的方法,先建立了人牙龈成纤维细胞的体外模型,然后将细胞随机分为六组,对照组加入DMEM培养液（无血清）,实验组为IL-1浓度分别为0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的培养基（无血清）,静置培养24h。结果：数据分析结果运用了SPSS统计软件,差异具有统计学意义,P<0.05,EGFR胞浆染色强度随IL-1由于升高的干预浓度有增强趋势。结论：牙龈组织炎症的发生发展中EGFR起着重要的作用,为进一步研究EGFR在牙龈组织炎症中的调控作用提供实验基础,对于早期终止和治疗牙周组织炎症进程有很大的意义。     

仙人掌提取物抑菌作用实验研究

目的：观察仙人掌提取物对各种不同细菌的抑菌作用。方法：以药敏试验管碟法检测三种不同浓度仙人掌提取物（250mg/ml；200mg/ml；100mg/ml）对10种细菌的抑菌效果。结果：三种不同浓度仙人掌提取物对金黄色葡萄球菌、宋内志贺菌、鲍氏志贺菌均有明显抑制作用。     

HPLC法测定索拉非尼含量及有关物质

目的：建立索拉非尼的HPLC法测定含量。方法：采用phenomenex C8色谱柱（250mm×4．6μm×，5μm），流动相：三乙胺磷酸缓冲液（取纯水990mL，加入三乙胺10mL，用磷酸调节PH至5．4）-乙腈（60：40），检测波长250nm，流速：1．0mL／min。结果：索拉非尼浓度在200．17-480．41μg／mL范围内，与峰面积呈良好的的线性关系（r=0．9998），最低检测限为0．1ng。结论：本法简便，专属，重现性好，可用于测定索拉非尼含量。     

人骨髓间充质干细胞在新生小鼠脑中的植入和分化

背景与目的：探讨人骨髓间充质干细胞（human mesenchymal stem cells.hMSCs）在体内向神经细胞分化的可能性,材料与方法：将标记绿色荧光蛋白的人骨髓间充质干细胞植入到新生3d的小鼠侧脑室中,分别于移植后0d,9d和14d处死受体鼠,取其脑组织,4％多聚甲醛固定后行冠状面冰冻切片,荧光显微镜下观察hMSCs的植入,激光共聚焦显微镜检测植入细胞神经特异性蛋白的表达,定位双重标记的植入细胞,结果：受体小鼠脑中均可检出植入的细胞,此类细胞表达神经元细胞特异的微管相关蛋β-Ⅲ-Tubulin（Tuj1）,微管相关蛋白2（MAP2）,一些细胞表达神经胶质细胞特异的胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）,结论：hMSCs植入后受到脑组织特定微环境的影响,在体内可以向神经细胞分化并参与到发育的神经系统中。