解读浙江选考题中的农杆菌转化法

本文从农杆菌Ti质粒的介绍、重组质粒导入农杆菌的方法、农杆菌侵染植物细胞机理和转化法的影响因素4个角度,深入解读了近几年浙江选考题中涉及的农杆菌转化法.     

人生长激素基因转化花叶芋及PEG在转化中的作用

将人生长激素基因插入pBR322衍生质粒载体pLGV1103 DNA中,通过三亲交配,将重组原粒pLB-9引入携带Ti质粒pGV3850的农杆菌,经同源重组,获得共整合重组体pGL198(hgh)Ti质粒。用叶盘共培养法,将pGL198(hgh)转化单子叶植物花叶芋,获得转基因再生植株。经胭脂碱测定、新霉素磷酸转移酶分析和DNA分子杂交,证明人生长素基因已整合到花叶芋DNA中。还探讨了聚乙二醇(PEG)在植物转化中的作用。     

转基因育种

本文对植物基因工程中的受体系统、载体系统及其它转化方法作了较全面的介绍,着重探讨了农杆菌Ti质粒转化系统,同时对外源基因的表达问题了进行了初步分析。     

含LEG工程质粒的构建及其转化甘蓝的研究

将pUC18-leg质粒上的野豌豆贮藏蛋白基因(leg)与pBR325的氯霉素抗性(Cm)基因连接在一起,构建出中间载体pJG9,通过三亲交配技术,将大肠杆菌中的pJG9转移至含pGV3850的农杆菌中,并选出含整合质粒的农杆菌.利用类似叶盘转化法的方法,将pGV3850上的外源基因转入甘蓝中,在含Cm15/μg/ml和先锋霉素500μg/ml的培养基上,选择愈伤组织并由此再生出转化植株,并得到胭脂碱测定和DNA分子杂交的证实.     

Ti质粒上T-DNA怎样从农杆菌转移到植物细胞内——对人教版高中《生物·选修3·现代生物科技专题》的讨论

<正>1问题人教版高中《生物.选修3·现代生物科技专题》P.12介绍了农杆菌转化法:农杆菌将携带的Ti质粒上的T-DNA导人到植物细胞并整合到植物细胞中染色体的DNA上。农杆菌是否侵入植物细胞内,是整个Ti质粒进人植物细胞还是只有T-DNA进人植物细胞?     

土壤农杆菌在植物基因工程中的应用

利用土壤农杆菌转入外源基因是植物基因工程中的有效手段．为此，对土壤农杆菌转化系统中的载体系统、土壤农杆菌转化植物的分子机制以及土壤农杆菌在基因工程中应用的研究进展作了综合评述。     

转基因植物生产食用疫苗的研究进展

目前，用转基因植物生产食用疫苗已成为基因工程的新热点。本综述介绍了用农杆菌Ti质粒介导和以病毒为载体制备生产食用疫苗的策略，表明这是一种最经济而有效的途径。     

农杆菌注射渗透法转化烟草实验研究

利用携带植物表达载体质粒pCambia2301的农杆菌菌株,通过注射渗透法对烟草叶片进行感染转化,组织化学染色检测GUS报告基因瞬时表达的结果表明,在O.D.600值为0.4～0.8范围内的菌液浓度不影响转化效果,感染时间72 h以上可使瞬时表达的阳性检出率达到100%,农杆菌菌株EHA105比LBA4404表现出更强的转化活性.     

根癌农杆菌介导植物遗传转化的分子机制

根癌农杆菌介导转化法是目前应用最广泛的植物转基因方法,通过植物表达载体上DNA的加工和转移将外源DNA转运到植物细胞内.主要介绍了根癌农杆菌介导植物遗传转化的分子机制.     

转基因植物及其应用

20世纪70年代末80年代初，人们用野生型Ri质粒和Ti质粒转化烟草和马铃薯细胞获得再生植株后，以Ti质粒为载体的植物遗传转化技术随之建立。     

用于农杆菌转化的雪花莲外源凝集素(GNA)基因植物中间表达载体的构建

雪花莲外源凝集素(GNA)是一类能特异地和甘露糖残基结合的蛋白质成分,对人畜毒性极低,但对同翅目昆虫有强烈的抗性.为利用雪花莲外源凝集素对同翅目害虫的抗性,将雪花莲外源凝集素基因置于Ubi启动子和Tnos终止子的控制之下,插入pCAMBIA3300的SmaI位点,构建了可用于农杆菌转化的植物中间表达载体-pCUGAN-Bar.将pCUGAN-Bar电击转入农杆菌,得到了带有pCUGAN-Bar的农杆菌菌株,可用于小麦和水稻的转化工作.     

农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理研究

该文就农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理进行研究。方法一:分析vpb1基因启动子序列;方法二:对探测载体中vpb1基因启动子的转录活性进行验证;方法三:设计vbpl基因启动子序列突变位点。结果:(1)基于荧光蛋白表达情况来看,在pRSET-A质粒中的vbpl基因启动子能够将荧光基因的表达予以正常启动。(2)能够正确构建pRSET-m1突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着SigmaA结合位点的去除而降低。(3)能够正确构建p RSET-m2突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-65位碱基的突变而增强。(4)能够正确构建pRSET-m3突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-66位和-68位碱基的突变而消失。结论:深入研究农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理,能够找出影响农杆菌的VBP蛋白表达的相关因素,有可能使所获得的农杆菌菌株具有较高的转化效率,以便能够有效提高植物转基因效率。     

土壤农杆菌在植物基因工程中的应用

土壤农杆菌介导的基因转移是目前最常用的获得转基因植物的方法,农杆菌的Ti质粒包括了复制原点、vir基因、冠瘿碱代谢基因和T-DNA区域。在土壤农杆菌的T-DNA的转移过程中起关键作用的物质和结构是:乙酰丁香酮、T-DNA的右边界、vir基因的诱导表达。     

高等植物遗传转化研究进展

本文总结了高等植物遗传转化的最新进展，系统介绍了农杆菌法，PEG法，电激法，基因枪法，显微注射法等转化方法。通过对植物遗传转化受体以及遗传转化技术的评价，展现了高等植物遗传转化的美好前景。     

转基因植物生产食用疫苗的研究进展

目前，用转基因植物生产食用疫苗已成为基因工程的新热点。本综述介绍了用农杆菌Ti质粒介导和以病毒为载体制备生产食用疫苗的策略，表明这是一种最经济而有效的途径。     

电激法将外源基因导入三种植物的组织细胞

用自制的电容放电式电激系统,将质粒pLGVneo2103上的NPTⅡ基因直接导入到烟草叶片组织细胞和玉米、大豆的愈伤组织细胞中。经过一定时间的卡那霉素选择后,在转化而来的烟草叶片愈伤组织上得到了绿色小苗。经NPTⅡ检测表明,在转化后的玉米和大豆愈伤组织细胞中,外源基因有较明显的表达。这种直接将外源基因导入完整的植物细胞的技术,可以避免因原生质体培养而引起的一系列问题,且在转化受体方面不存在农杆菌Ti质粒介导法所有的物种限制,可以期望,它将在植物基因工程,特别是农作物的基因转化方面得到越来越广泛的应用。     

农杆菌介导的白菜遗传转化影响因子研究进展

白菜遗传转化技术中最常用的方法是农杆菌介导法。由于白菜的再生能力较低，因此农杆菌介导白菜遗传转化的研究报道较少。本文就近十年来的研究进展作一简要回顾，并对影响其转化及再生频率的关键性因子，如植物基因型、外植体及生理状态、农杆菌菌株、感染方法和培养基附加成分等方面进行了较详细的讨论。     

用于农杆菌转化的雪花链外源凝集素（GNA）基因植物中间表达载？…

雪花莲外源凝集素（ＧＮＡ）是一类能特异地和甘露糖残基结合的蛋白质成分，对人畜毒性极低，但对同翅目昆虫有强烈的抗性。为利用雪花链外源集素对同翅目害虫的抗性，将雪花莲外源凝集素基因置于Ｕｂｉ启动子和Ｔｎｏｓ终止子的控制之下，插入ｐＣＡＭＢＩＡ３３００的ＳｍａＩ位点，构建了可用一农杆菌转化的植物中间表达载体－ｐＣＵＧＡＮ－Ｂａｒ．将ｐＣＵＧＡＮ－Ｂａｒ电击转入农杆菌，得到了带有ｐＣＵＧＡＮ－Ｂａｒ的农杆     

向日葵TiT—DNA转化系几个生理生化特性的研究

根癌农杆菌B6S3和T37菌株Ti质粒T-DNA基因(TiT-DNA)在向日葵基因组中的导入与表达,不仅使转化细胞产生特殊的基因产物,并且使之能将D-乳糖作为唯一碳源利用和对某些代谢类似物(BUdR)具有抗性,此外还影响宿主细胞一系列生理生化活动。在无激素和含激素两种培养条件下,向日葵TiT-DNA转化系与相应正常系在过氧化物酶的活性及其同工酶基因的表达、蛋白质的种类及比例、游离氨基酸库等均存在着较大的差异。在转化系内,有关冠瘿碱生物合成的前休氨基酸具有较高的代谢水平。     

Roi基因在三种植物中转化与表达的比较研究

通过改良的叶圆盘转化法,将Ti质粒上的Roi基因(细胞分裂素合成酶基因)转化入一种单子叶植物花叶芋和二种双子叶植物花椰菜和甘蓝的基因组中。在转化后组织当中以及再生植株的苗中,甚至再生植株的无性繁殖后代中均可测得Nos基因的产物胭脂碱的存在。这表明,Ti质粒上的外源基因已经在以上三种转基因植物中得到稳定的整合和表达,新的性状可以随着细胞分裂而传代。