实时荧光定量PCR应用技术

实时荧光定量PCR(real- time quantitative PCR)由Higuchi等人在1992年第一次报告,是一种新兴的分子生物学技术,这项技术灵敏、简便、快速、不需使用放射性同位素.它将EB加入PCR反应体系,再通过改装的带有CCD的PCR仪检测样品的荧光强度,这不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,同时也可以对核酸分子进行精确定量.而且随着PCR技术的不断发展,使得实时荧光定量PCR日益成熟,极大的推动了分子生物学的发展,更是在疾病诊断中发挥了很重要的作用.     

实时荧光定量PCR技术在实验教学中的应用

设计了"实时荧光定量PCR分析IPTG诱导EGFP基因在大肠杆菌中的异源表达"实验,研究IPTG诱导浓度和温度对EGFP基因表达的影响。结果表明,IPTG浓度为270μmol/L、诱导温度为16℃、诱导时间为18h的条件下,EGFP mRNA的表达量最大。通过该实验的学习,使学生掌握实时荧光定量PCR的相关实验原理、技术以及实时荧光定量PCR仪的使用,培养学生的科研能力和综合素质。     

实时荧光定量PCR技术及实例分析

本文主要介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、类型和特点,并通过实例分析介绍了相对定量分析法的实际操作和数据分析。     

实时荧光定量PCR技术在发育生物学实验

实时荧光定量PCR技术是生命科学研究常用实验技术,发育生物学实验是一门综合性很强的实验课程。为不断完善我院发育生物学实验课程建设,实现培养全面发展人才的教学目标,在本科生发育生物学实验课教学中设计了完整的实时荧光定量PCR实验内容。教学实践结果表明,该实验具有可行性,学生完成情况良好。所设计的实验加深了学生对于基本理论的理解,锻炼了学生的实验技能,激发了学生的学习积极性和创造性,有助于培养学生科学思维以及团队合作精神,获得了良好的教学效果。     

实时荧光定量PCR技术的操作实践

采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBR(R) Green I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验.介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性.     

荧光定量PCR对微小RNA的检测及应用

目的:建立一种定量、简单、快速、敏感的微小RNA(miRNA,miR)检测方法,并用其观察一些病理状态下有关miRNA的变化.方法:通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,对miRNA进行反转录,然后用相应miRNA的正反向引物对该miRNA进行定量检测,观察重复性和特异性.用此法检测了人巨细胞病毒(HCMV)对滋养细胞(HPT-8)细胞内miR-513表达水平的影响,也检测了结直肠癌组织miR-145水平.结果:用该法扩增miRNA特异性强,结果重复性好,该法检测到HCMV感染对miR-513表达的梯度效应.也发现癌组织和正常组织间miR-145的表达有明显的差异.结论:用荧光定量PCR可以对微小RNA快速有效的检测,在临床工作中可得到很好的应用.     

应用荧光定量PCR对PCV2在不同类型猪群血液中感染情况的调查

应用荧光定量PCR对某规模化养猪场340头份不同类型猪群猪只血液中PCV2感染的情况进行了调查。结果表明,所有被检测的猪群均存在PCV2感染,不同类型猪群的感染率为100%,全场猪的平均感染率为76.8%(261/340)。其中,生长肥育猪群PCV2感染率最高为90%,而种公猪群感染率最低为30%。在病毒荷载量方面,整个猪群的血液中病毒荷载量处于103~104copies/μL之间。     

水样中大肠菌数定量PCR检测实验设计

为不断完善环境微生物学实验课程建设,培养学生的实际样品分析能力,设计了一套检测水样中大肠菌数的实时荧光定量PCR(pdymerase chain reaction)实验。教学实践表明,实验方案切实可行,学生完成情况良好,学生了解并践行了实时荧光定量PCR技术检测环境样品中的大肠菌数的方法,切身体会到新实验技术的简便性与灵敏性,提升了学生的学习兴趣与创新能力。     

微生物生态学中定量分析技术的应用进展

讨论了以PCR技术和荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）技术为基础发展起来的、应用于微生物生态学定量分析研究的一些技术进展．     

应用实时荧光定量PCR检测子宫内膜癌与癌旁组织中microRNA-93的差异表达状况

为分析microRNA-93在人子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中的表达差异状况,初步探讨其在子宫内膜癌中的作用,应用实时荧光定量PCR方法检测32例子宫内膜癌及对照癌旁组织中microRNA-93的表达状况。结果表明,子宫内膜癌组织中microRNA-93的表达量高于癌旁组织（P<0.01）,可见microRNA-93可能作为癌基因参与子宫内膜癌的发生发展过程。     

地方高校教育培养成本个案计量分析

本文在探讨教育培养成本计量理论的基础上,对广州某一所普通高校2002—2003学年度教育培养成本进行了实证计量分析,并就高校教育培养成本问题提出若干政策建议。     

高速通道压裂技术机理研究与应用

高速通道压裂技术实现了支撑剂的不连续分散充填,改变了裂缝产生导流能力的方式。文章阐述了该技术的基本原理和特点、射孔工艺、泵注工艺,重点对裂缝通道的渗透率、产能及其导流能力的理论计算进行了推导,并研究了适用于该技术的压后支撑剂回流控制方法,最后调研了高速通道压裂技术的现场应用效果,并以俄罗斯Taylakovskoe油田为例对其应用效果进行了分析。     

PCR技术的应用及前景展望

综述现代生物技术PCR在分子生物学研究、医学、法学和生物化学等领域的多种应用,展望PCR技术广阔的发展前景     

一种新的连接性拓扑指数与卤代苯毒性的定量关系

借助元素的有效主量子数改造了原子点价,定义了一个新的表征卤代苯结构的分子连接性指数Xz*,用它研究了17种卤代苯化合物对生物的毒性,通过最小二乘法建立了相应的定量结构———毒性相关方程,其相关系数为0.990,并在α=0.01水平下通过F检验,结果表明Xz*计算简单,物理意义明确,预测结果令人满意,为该类化学品的环境危险性评价提供了依据.     

化油器自动加浓阀的原理与应用

自动加浓阀主要由PTC、石蜡体和针阀组成。改变PTC与石蜡体的配方,可以使化油器在各种环境下都能提供给发动机起动与暖机过程中所需的理想空燃比的混合气,提高化油器的综合性能。     

PCR在动物源性食品安全方面的应用

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术是一项体外酶促扩增DNA技术,具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速高效等特点。在肉品科学方面有潜在的应用价值,本文综述PCR在肉类科学中的应用：如微生物的检测,肉类品种的鉴定等。     

基于网络的电力系统安全机制的研究与应用

随着计算机网络的迅速发展，信息安全问题面临新的挑战．电力系统信息安全问题已威胁到电力系统的安全、稳定、优质和经济运行等方面，影响着“数字电力系统”的实现进程．研究电力系统信息安全问题、开发相应的应用系统、制定信息安全的防范与系统恢复措施是当前信息化工作的重要内容。     

基于事件流的应用共享机制研究

本文分析了基于“事件分发法”的应用共享技术中的共享机制问题,重点探讨了“事件分发法”系统中对输入事件流进行截获与解析的途径,在解决事件冲突并且保持操作结果一致性的问题上,提出了在相容优先方式下“全局序列”与“改进的多版本机制”相结合的并发机制,设计了采用有向图结构存储冲突版本的“事件”序列的方法,该机制提高了相容优先方式下系统处理冲突的能力,同时节省了空间与时间开销。     

光伏效应的产生机理及应用

光伏效应是一种重要的光子效应,本文详细分析了它的产生机理和伏安特性,并简要介绍了它的应用.     

热色性材料变色机理及应用

本文介绍了各类热色性材料的变色机理 ,重点探讨了国内外在可逆热色性材料领域的研究动态、应用及发展趋势