实时荧光定量PCR技术在发育生物学实验

实时荧光定量PCR技术是生命科学研究常用实验技术,发育生物学实验是一门综合性很强的实验课程。为不断完善我院发育生物学实验课程建设,实现培养全面发展人才的教学目标,在本科生发育生物学实验课教学中设计了完整的实时荧光定量PCR实验内容。教学实践结果表明,该实验具有可行性,学生完成情况良好。所设计的实验加深了学生对于基本理论的理解,锻炼了学生的实验技能,激发了学生的学习积极性和创造性,有助于培养学生科学思维以及团队合作精神,获得了良好的教学效果。     

实时荧光定量PCR应用技术

实时荧光定量PCR(real- time quantitative PCR)由Higuchi等人在1992年第一次报告,是一种新兴的分子生物学技术,这项技术灵敏、简便、快速、不需使用放射性同位素.它将EB加入PCR反应体系,再通过改装的带有CCD的PCR仪检测样品的荧光强度,这不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,同时也可以对核酸分子进行精确定量.而且随着PCR技术的不断发展,使得实时荧光定量PCR日益成熟,极大的推动了分子生物学的发展,更是在疾病诊断中发挥了很重要的作用.     

实时荧光定量PCR技术在实验教学中的应用

设计了"实时荧光定量PCR分析IPTG诱导EGFP基因在大肠杆菌中的异源表达"实验,研究IPTG诱导浓度和温度对EGFP基因表达的影响。结果表明,IPTG浓度为270μmol/L、诱导温度为16℃、诱导时间为18h的条件下,EGFP mRNA的表达量最大。通过该实验的学习,使学生掌握实时荧光定量PCR的相关实验原理、技术以及实时荧光定量PCR仪的使用,培养学生的科研能力和综合素质。     

实时荧光定量PCR技术及实例分析

本文主要介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、类型和特点,并通过实例分析介绍了相对定量分析法的实际操作和数据分析。     

荧光定量PCR技术的原理与应用

荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上建立起来的一种利用标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.它特异性强、灵敏度高、操作简便、快速高效,在疾病诊断、食品检测、环境监测以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景.在阐述荧光定量PCR技术原理的基础上,系统论述了该技术在各方面的应用.     

荧光定量PCR对微小RNA的检测及应用

目的:建立一种定量、简单、快速、敏感的微小RNA(miRNA,miR)检测方法,并用其观察一些病理状态下有关miRNA的变化.方法:通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,对miRNA进行反转录,然后用相应miRNA的正反向引物对该miRNA进行定量检测,观察重复性和特异性.用此法检测了人巨细胞病毒(HCMV)对滋养细胞(HPT-8)细胞内miR-513表达水平的影响,也检测了结直肠癌组织miR-145水平.结果:用该法扩增miRNA特异性强,结果重复性好,该法检测到HCMV感染对miR-513表达的梯度效应.也发现癌组织和正常组织间miR-145的表达有明显的差异.结论:用荧光定量PCR可以对微小RNA快速有效的检测,在临床工作中可得到很好的应用.     

微生物生态学中定量分析技术的应用进展

讨论了以PCR技术和荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）技术为基础发展起来的、应用于微生物生态学定量分析研究的一些技术进展．     

应用实时荧光定量PCR检测子宫内膜癌与癌旁组织中microRNA-93的差异表达状况

为分析microRNA-93在人子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中的表达差异状况,初步探讨其在子宫内膜癌中的作用,应用实时荧光定量PCR方法检测32例子宫内膜癌及对照癌旁组织中microRNA-93的表达状况。结果表明,子宫内膜癌组织中microRNA-93的表达量高于癌旁组织（P<0.01）,可见microRNA-93可能作为癌基因参与子宫内膜癌的发生发展过程。     

中学化学定量实验设计要点

中学化学需要了解定量实验设计的意义以及定量实验设计的一般程序;定量实验的误差分析;定量实验设计对提高教师素质和培养学生能力的作用。     

应用荧光定量PCR对PCV2在不同类型猪群血液中感染情况的调查

应用荧光定量PCR对某规模化养猪场340头份不同类型猪群猪只血液中PCV2感染的情况进行了调查。结果表明,所有被检测的猪群均存在PCV2感染,不同类型猪群的感染率为100%,全场猪的平均感染率为76.8%(261/340)。其中,生长肥育猪群PCV2感染率最高为90%,而种公猪群感染率最低为30%。在病毒荷载量方面,整个猪群的血液中病毒荷载量处于103~104copies/μL之间。     

DNA样品目的基因相对拷贝数的定量斑点杂交测定方法

传统斑点杂交由于手工上样存在差异,难以进行目的基因定量分析.该文采用手动芯片点样仪,并结合高灵敏度的North2south生物素标记和化学发光检测试剂盒进行定量斑点杂交,对水稻OsSee27p基因进行测试,结果表明样品中目的基因的拷贝数与杂交信号呈线性关系,根据该标准曲线可以测定未知样品目的基因的相对拷贝数.该文提供了一种经济、简便、切实可行的测定DNA样品中目的基因相对拷贝数的定量方法.     

DGGE和qPCR联用定量分析环境样品中优势菌群

精确定量环境样品中特定微生物类群的数量对阐明环境生物治理/修复过程中微生物的功能和效应具有重要意义.该文以土壤样品为例,将PCR-DGGE技术与定量PCR(qPCR)技术联用,定量检测样品中优势微生物类群数量.方法:抽提样品DNA,针对16S rDNA进行PCR-DGGE分析,明确样品中的优势菌群;再根据特定优势菌群的基因序列设计适合的定量引物,通过针对特定优势菌群的定量PCR分析,得到样品中优势菌群的数量信息.该方法灵敏度高、重复性好,并且无需培养,最大限度地保持了样品原始群落信息.     

生物转盘水处理实验设备的设计制作

生物转盘水处理实验设备是一种既可应用于教学实验又可应用于科研的实验设备,该文介绍了该实验设备的原理、设计思想、结构特点。运行试验的结果表明,该设备启动容易、操作简便,完全能够满足教学及科研的要求。     

基于虚拟机的入侵检测实验设计

入侵检测是一门新的安全领域的学科,它检测已经发生或正在进行的网络攻击,是信息安全课程的重要内容之一。利用虚拟机技术搭建入侵检测实验平台,设计并实施了实验教学的过程,使学生在掌握课程的重要知识点的同时,提高动手能力和实践能力。     

多课程融合的非接触式电流检测实验项目设计

设计了一个非接触式电流谐波检测的综合实验,实验电路包括功率放大、互感线圈、电流-电压转换、有效值检测、程控滤波、单片机控制、现场可编门阵列(FPGA)分频和计数等。实验除了覆盖电子线路、FPGA等硬件课程外,还融合了信号与系统课程中的信号分解与合成的理论知识。设计方案注重新型器件的运用,为电子系统设计的实践教学提供了良好的案例。     

多功能絮凝浮沉水处理实验装置设计

针对传统絮凝、气浮和沉淀实验装置的缺陷,设计一种多功能水处理实验装置.与传统装置相比,该装置中絮凝区可以在往复式隔板絮凝区、折板平板组合絮凝区和机械絮凝区之间转换,气浮沉淀区可以在浮沉区、沉淀区和气浮区之间转换.絮凝区中隔板能够任意改变间距,气浮沉淀区中斜板与水平面的夹角可在20°～160°之间变化,斜板之间的水平间距也可以改变.该实验装置能够适用多种水质的处理,大大缩小了实验设备占据的空间,能够提高学生综合创新能力.     

南水北调中线工程水源区粪大肠菌群和异养细菌丰度与分布

根据2005年5月的南水北调中线水源区调查资料,对其粪大肠菌群及异养细菌的丰度和分布进行了研究,并分析了其与环境因子的相关关系。结果表明,南水北调中线水源区粪大肠菌群数量分布主要受陆源性物质的支配,呈现近岸高,库心未被检出的特征;而异养细菌分布特征为近岸比库心较多。粪大肠杆菌和异养细菌的分布与NH3-N、TN、Chla呈正相关,与TP、COD、T和pH关联性不明显,与BOD、SD呈负相关关系。     

NMR定量技术在教学实验中的运用

研究有机化学必修实验"Cannizzaro歧化反应制备苯甲醇",对教材中的反应条件进行优化,后处理时采用乙酸乙酯替代甲基叔丁基醚(3类致癌物)作为萃取剂,探索使用核磁共振仪对产物进行定量分析。实践表明:将核磁共振(NMR)定量技术新方法带入实验教学,激发了学生探索科学的积极性,提高了他们的分析、解决问题的能力,为实现"双一流"高校创新人才培养打下坚实的基础。     

中学定量设计实验分析

一些定量设计实验较定性制备实验具有明显的优点 ,目的性、实用性强 ,给予学生较大的创造空间。下面我举测定气体摩尔体积这一定量设计实验并加以分析 ,说明它对培养学生思维广度与深度的意义。1　实验原理的创意性测气体摩尔体积 ,必须要测出常温常压下气体的体积与气体的物质的量 ,并折算成标况下 1摩尔气体的体积。测气体的体积常用方法是排水法 ,可使用量筒测体积或托盘天平称量。而求气体的物质的量 ,可由反应物差量或少量反应物物质的量等决定 ,所以测气体摩尔体积可组合成下列三个实验来分别测定。2　实验设计的灵活性根据实验意图设…     

网格反应、斜板沉淀水处理实验设备的设计制作

网格反应、斜板沉淀水处理实验设备是一种既可应用于教学实验又可应用于科研的实验设备。该文介绍了该实验设备的原理、设计思想、结构特点。启动和运行试验的结果表明该设备具有启动容易、操作简便，完全能够满足教学及科研的要求。