MIF通过PI3K/AKT通路对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移的影响研究

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是否通过PI3K/AKT通路对肺腺癌A549细胞的增殖、凋亡、迁移产生影响。方法:免疫组织化学技术检测MIF抗体在肺腺癌癌组织和癌旁组织中的表达情况,DEME完全培养基培养肺腺癌A549细胞株作为对照组,加入不同浓度人重组巨噬细胞移动抑制因子(rh MIF)和PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002预处理作为实验组,应用MTT(噻唑蓝比色法)观察A549细胞株的增殖情况,(2) FCM(流式细胞仪技术)检测A549细胞株凋亡情况(3) Western-Blot测定A549细胞株PI3K、p AKT及相关抗凋亡抗体p53、Bcl-2蛋白表达情况。结果:(1)免疫组化发现MIF在肺腺癌癌组织中高表达,且高表达率与癌旁组织有显著差异(2)经rh MIF刺激后PI3K、p AKT、p53、Bcl-2表达更明显,迁移更显著;(3) rh MIF对A549细胞株作用均呈浓度-时间依赖性,rh MIF在50 ng/ml 24 h对A549细胞增殖率最高,LY294002在25μmol/L 24 h对A549细胞抑制作用最显著。结论:MIF在肺腺癌中高表达,肺腺癌细胞中加入rh MIF,rh MIF刺激A549细胞株增殖、迁移,抑制凋亡,与LY294002共同作用下,A549细胞株增殖率和迁移力下降、凋亡率升高,表明MIF有可能通过PI3K/AKT通路对肺腺癌细胞的增殖、凋亡和迁移产生影响。     

冻存胚胎复苏移植的影响因素

为探讨冻存胚胎复苏移植妊娠的影响因素，统计分析了28个周期127个冻存胚胎复苏移植的妊娠率与胚胎冻存前形态，细胞数，保存时间，复苏后存活率，培养至次日的继续分裂率等因素的关系，表明妊娠周期冻存前胚胎形态良好比较，复苏后存活率，复苏后培养至次日继续分裂的比例有增高的趋势，胚胎细胞数妊娠与非妊娠周期相似，形态良好胚胎复苏后存活率显著高于形态不良者，说明冻存前胚胎形态与胚胎复苏存活率和冻存胚胎复苏移植妊娠率关系重要。     

纳米氧化锌对人肺腺癌细胞A549的毒性

探讨纳米氧化锌（ZnO）对体外培养的人肺腺癌细胞A549的生物学效应。使用原子力显微镜（AFM）、透射电镜（TEM）和X射线衍射仪（XRD）研究纳米ZnO颗粒物的理化性质。然后,使用0mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的纳米ZnO处理体外培养的人肺腺癌A549细胞,MTT 法测定细胞生长活性。并且测定1mmol/L 纳米ZnO染毒24h后细胞培养液上清中,乳酸脱氢酶（LDH）和胞内的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量。使用透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。荧光染色检测细胞产生活性氧（ROS）的生成。实验所用的ZnO纳米颗粒为长75 nm、直径20nm的针状纤锌矿晶体。细胞实验结果表明,纳米ZnO颗粒对A549细胞的生长活性具有明显的抑制作用,存在剂量－效应关系。培养液上清中LDH活性显著升高（P < 0.05）,胞内CAT活性显著下降、MDA含量显著升高（P < 0.01）,但SOD活性下降不明显。荧光染色检测发现染毒后A549细胞出现细胞凋亡,而且细胞内ROS的生成与纳米ZnO存在剂量－效应关系。结论是纳米氧化锌诱导人肺腺癌A549细胞产生活性氧,引发细胞凋亡,并产生细胞毒性。     

新兴的云南省第二人民医院血液科

血液科成立于2005年6月,设病床30张(为单人、双人和三人病房),造血干细胞移植病房一个单元(4张层流净化病床),血液实验研究室一个(含细胞培养室、分子生物学实验室、流式细胞研究室、细胞治疗室及血液病理实验室),配备有开展血液疾病临床诊断、治疗、研究所需要的先进设备,如:流式细胞仪、细胞分离机、程控细胞冻存仪、荧光例置显微镜、CO2培养箱、超低温冰箱、定量PCR仪等,为云南省诊疗、研究条件最为完善的血液科,为临床诊断治疗及研究提供了良好的技术支撑,为血液病诊疗水平及研究水平的提高奠定了良好基础。科室现有专业技术人员20人,…     

基于应用型人才培养的细胞生物学实验教学体系的改革与探索

细胞生物学实验是应用生物学的一门必修课。然而,长期以来因其实验内容陈旧、教学模式单调、综合性实验欠缺、考核指标和体系单一、细胞培养技术训练缺失、课时少以及实验条件受限等特点,限制了其学生的思维、影响授课效果、制约了应用型人才的培养,课程教学体系的改革势在必行。本文就细胞生物学实验教学体系现状进行分析,通过走访、学习、考察、召开座谈会,制定了利于应用型人才培养的细胞生物学实验教学大纲,形成包括经典验证实验、细胞培养技术、自主设计实验及实训实习四个层次的系统性教学体系,并取得一定成效。     

低温冷链细胞存储设备在全自动无人化细胞库中的应用

细胞存储是细胞治疗技术产业链的上游基础,上游的细胞冻存质量是细胞治疗的核心要素,它关系到下游细胞治疗技术的提高与应用。为此,本文的目的是介绍低温冷链细胞存储设备在无人化细胞库中的应用,无人化细胞库的全低温冷链存储系统,通过智能化、信息化的存储方式。阐述了细胞冻存设备的功能、存储流程;研究的结果是不同功能的设备能够按照规划流程,智能化式作业,完成细胞冻存任务,最后得出低温存储设备能冻存满足活性要求的细胞,以供给细胞治疗应用的结论。     

氯化铵对顺铂诱导A549细胞凋亡的形态学研究

目的探讨氯化铵(NH4CL)对顺铂(cisplatin,CDDP)抑制A549细胞增殖的影响。方法体外培养人肺癌A549细胞,MTT法检测NH4CL及CDDP对人肺癌A549细胞增殖率的影响;光镜下观察NH4CL及CDDP对A549细胞生长的影响;共聚焦显微镜下观察A549细胞核的形态变化。结果与对照组相比,给予不同浓度的NH4CL及CDDP导致A549细胞增殖率明显下降;光镜下观察A549细胞经非毒性剂量的NH4CL与CDDP联合应用处理后细胞生长抑制明显高于单独给予CDDP组;共聚焦显微镜观察可见非毒性剂量的NH4CL与CDDP联合应用处理A549细胞核碎裂现象明显多于单独CDDP处理组。结论 NH4CL可以促进CDDP对A549A细胞的凋亡诱导作用。     

重组CHO细胞的冻存与复苏条件研究

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rh TNFR-Fc)在治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎等方面具有显著疗效~([1]),并日益显示出其重要作用和广阔的市场前景。随着细胞融合技术及基因工程的发展,大规模动物细胞培养技术已成为生物制药走向产业化的关键和核心。本文以表达rhTNFR-Fc的CHO细胞为研究对象,通过确定合理的冻存及复苏条件,建立合理的控制策略,为提高CHO细胞的细胞密度和目的蛋白产量,为rhTNFR-Fc融合蛋白的工业化生产奠定基础。     

动物胚胎的玻璃化冻存

动物胚胎的玻璃化冻存是一项新的深低温冷冻方法,已成功地冻存了多种动物和人的胚胎,具有较高的实际应用和研究价值。本文结合本实验室的研究工作,论述玻璃化冻存方法在动物胚胎保存中的应用,不同保护剂和玻璃化溶液对胚胎存活率的影响,分析影响玻璃化冻存的主要因素包括冷冻保护剂与玻璃化溶液的选择、预平衡过程、冷却和复温速率控制、去玻璃化的避免、冻存后玻璃化溶液的洗脱等。     

长春新碱对人胃癌细胞形态和热休克蛋白表达的影响

长春新碱(Vincristine,VCR),是临床常用的植物性抗肿瘤药物。关于VCR对热休克蛋白(HSP)的影响极少报告。我们利用细胞培养和SP免疫组化染色技术,观察了VCR对人胃癌BGC-823细胞株HSP27和HSP70表达的影响。为深入认识VCR的作用途径,提供科学依据。1,材料与方法1.1,材料硫酸长春新碱由深圳万乐药业有限公司生产。BGC-823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供。SP免疫组织化学试剂盒及兔抗人HSP27和鼠抗人HSP70抗血清(I抗)和DAB显色剂,由北京中山生物技术公司提供。1.2,方法将5×10.4/ml浓度的BCG-823胃癌细胞,置无菌96孔板中,于C…     

CHO细胞克隆孔板简易冻存方法

大规模筛选动物细胞克隆中需要将细胞冻存备份,对贴壁细胞通常冻存程序一般是,消化细胞,离心去上清,然后加入冻存液,梯度降温然后液氮保存。使用该方法工作量较大。针对这一问题,本文探索一种能够使细胞处于孔板中生长状态下即可冻存细胞的方法。结果表明,细胞在三个月内,细胞数量、活率、表达能力,处于稳定状态。这简化了筛选克隆细胞的工作。     

经典藏药佐太对15种人源肿瘤细胞系的体外增殖抑制研究

为了探索经典藏药佐太对人源肿瘤细胞系的体外抑制作用 , 文章选用 11 种临床常见癌症(肝癌、乳腺癌、胃癌、肠癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、胶质母细胞瘤、肾癌、皮肤癌、白血病)15 种人源肿瘤细胞系,在体外测定培养基稀释后的佐太 5 种前处理液(DMSO 悬液、未过膜人工胃液浸提液、过膜人工胃液浸提液、未过膜人工肠液浸提液和过膜人工肠液浸提液)对肿瘤细胞的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC₅₀)。实验发现培养基稀释的佐太 DMSO 悬液对肝癌细胞(BEL-7402 和 SMMC-7721)、乳腺癌细胞(MDA-MB-231 和 MCF-7)、胃癌细胞(MKN-45 和 SGC-7901)、结肠癌细胞 HCT 116、卵巢癌细胞(HO-8910 和 SK-OV-3)、宫颈癌细胞Hela、肺癌细胞 A549、脑星型胶质母细胞瘤 U-87 MG、肾透明细胞腺癌细胞 786-O、表皮癌细胞 A-431 和人原髓细胞白血病细胞 HL-60 的半数抑制浓度(IC₅₀)范围为 0.094～0.453 mg/mL,小于有效阈值 0.5 mg/mL,即有效 ;其他...     

圣和散对胃癌SGC-7901细胞Fas∕FasL表达的影响

Fas∕FasL结合是介导胃癌细胞凋亡的主要方式,圣和散能诱导肿瘤细胞凋亡,其作用是否通来启动Fas∕FasL实现。1,材料与方法1.1,材料人胃低分化腺癌细胞SGC-7901(引自第四军医大学西京医院);RPMI1640(美国Gibco公司),Fas、FasL多抗(北京中山公司),流式细胞仪(美国BD公司),顺铂CDDP,山东齐鲁制药厂)。1.2,方法1.2.1,细胞培养人胃癌SGC-7901细胞常规培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、50U/ml庆大霉素的RPMI1640培养液中,在37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱内传代培养。中国科技信息20051.2.2,药物处理将中药圣和散SHP)(主要含党参…     

观察新型快速病理诊断技术在肺恶性肿瘤活检操作中的临床价值

目的:探究肺恶性肿瘤活检操作中采取新型快速病理诊断技术的临床价值。方法:抽取本院肺穿刺、支气管镜活检患者48例患者纳入研究,肺活检患者均采取新型快速病理诊断技术,观察新型快速病理诊断技术的分析过程与结果,分析肺活检中采取新型快速病理诊断技术的应用价值。结果:支气管镜活检中,首次活检发现癌细胞患者占比82.6%;首次活检发现癌细胞患者占比13.0%; 4.3%活检内未发现癌细胞。结论:随着医疗科学技术的快速发展,临床医护人员对于肺活检样本的质量有了更高的要求。肺恶性肿瘤活检操作中采取新型快速病理诊断技术可有效提升肺活检组织的检验质量,检测成本更低,值得临床大力推广。     

三元能量对体外培养细胞的影响

应用细胞培养与标记分子技术,测定＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷、＾３Ｈ－尿嘧啶核苷及＾３Ｈ－亮氨酸等大分子进入细胞的参入率,研究三元能量对培养细胞代谢变化的影响。结果显示：经三元能量处理过的几种癌细胞的ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质的合成过程,都受到一定程度的抑制。表明三元能量对癌细胞的生长,增殖中的物质利用都受到一定程度的阻遏,对癌细胞有一定的促衰亡作用,而对其他的转化细胞,三元能量的影响作用较少。     

大麦幼胚的超低温保存

大麦(Hordeum vulgare L.)幼胚经二甲亚砜(DMSO)和山梨醇复合保护处理,可以在液氮(-196℃)超低温保存.山梨醇预培养2天可以明显提高两步冷冻法冻存幼胚的存活率.4℃预处理4小时对胚存活率的影响不大,但它使幼胚分化能力下降,超低温冷冻对盾片的伤害小于对胚轴的伤害.快速冷冻法冷冻大麦幼胚取得良好的保存效果,冻存后的幼胚经过恢复培养,长出绿苗.     

如何提高初中生物实验教学质量

实验是人类认识和研究生物科学的重要手段,也是生物学教学的一种重要手段。生物实验是教师指导学生利用一定的材料、药品、仪器设备,按照指定的条件去进行的生物实践活动。生物学实验可以向学生提供生物界的感性认识,培养学生的基本技能和观察、分析综合运用生物学知识的能力。可以激发学生学习生物学的兴趣,培养实事求是的科学态度。可见,实验是生物学教学的重要组成部分,是提高生物教学质量的重要环节。而当前初中生物教学中存在一些薄弱环节：一是教师对实验教学的质量重视不够;二是教师对实验教学的组织能力差;三是课前准备与精心设计不够;四是忽视操作技能的改进或教师本身的操作技能差。因此,必须重视实验教学的研究和探讨,下面就初中实验教学的具体环节谈谈自己的看法。     

在生物学实验中培养学生的创新意识

如今的社会是一个创新的社会 ,创新的时代 ,需要创新的教育。中学生物学实验在教材内容编排中占的比例不大 ,有的实验方法陈旧、实验材料单一、操作过程限制过多 ,加上时间安排不合理及实验条件有限等原因 ,在一定程度上减少和限制了学生实践、创新的机会。那么 ,如何在生物学实验中培养学生的创新意识 ,是一个值得研究的课题。1　在实验预习中培养创新意识实验预习是完成实验的基础 ,学生的创新意识应从此开始培养。以往的预习总是要求学生看一遍实验目的、实验步骤 ,甚至有的学生连实验结果也照书抄写。这样的预习固然能更好地完成实验 ,…     

动物组织细胞玻璃化冻存方法的研究进展

动物组织细胞的玻璃化冻存是一项新的深低温冷冻保存方法，已成功地冻存了多种动物细胞，具有较高的实际应用和研究价值。本文论述几种主要组织细胞玻璃化冻存方法的研究及其进展，如小鼠胰岛和卵母细胞，大鼠卵巢、牛胚泡、牛卵母细胞、猪胚胎、人胚胎等，不同冷冻保护剂，玻璃化溶液和冷冻程序对细胞存活率的影响。并提出了玻璃化冻存动物以及组织细胞的问题与展望。     

浅谈如何上好初中生物实验课

生物学是一门实验性科学,观察和实验是生物科学的基本研究方法,在生物学的教学中,对于实验课的重视以及对学生实验能力的培养是不容忽视的。