蚓激酶基因在毕赤酵母中的表达

将蚓激酶基因克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)表达裁体pPICgk-lum3.将其线性化后转化毕赤酵母GS115,挑选Muts型毕赤酵每转化子,经甲醇诱导表达,纤维平板法检测其上清液纤溶酶活性最大为80U/mL.     

毕赤酵母表达系统中启动元件的研究进展

毕赤酵母是真核细胞常用表达系统之一,具有细胞密度高、纯化方法简单、转录后修饰功能完善等优点.作为重要的调控元件,表达系统中启动元件的功能强弱与表达效率的高低密切相关.目前,毕赤酵母表达系统中常用的启动元件分为三类,分别是以p A OX为代表的甲醇诱导型、以pGAP为代表的非甲醇诱导型,还有一些新型工业酵母启动子也是理想的表达系统启动元件.充分了解这些酵母启动子的最新研究进展,可以为工业酵母表达系统的优化提供重要的发展思路.     

拟穴青蟹抗菌肽scygonadin在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性

采用PCR方法克隆获得拟穴青蟹抗菌肽scygonadin基因成熟肽片段,将其连接到Pichia pastoris酵母表达载体pPIC9K中,构建了分泌表达载体pPICgk-Scy．电击转化毕赤酵母GS115,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合人酵母基因组中．以甲醇诱导表达阳性克隆,上清中表达产物经过Tricine-SDS-PAGE鉴定与预期的目的蛋白大小（约10ku）相符．并利用琼脂孔穴扩散法证明了表达产物能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长．     

毕赤酵母直接基因敲除方法的研究

甲醇营养型巴斯德毕赤酵母已被广泛应用于外源蛋白的表达,但是作为一个外源蛋白表达系统,其还有待进一步完善。进一步提高外源蛋白的表达量以及形成折叠正确的目的蛋白,成为了改造毕赤酵母菌株的一个热点。基因缺失,是一个常用的改造和构建新的毕赤酵母重组菌株常用的方法。巴斯德毕赤酵母直接基因缺失方法主要分为两类:有标记的插入替换和无标记的Pop-In/Pop-Out。本文系统地介绍了这两种方法,分别比较了各自的优缺点,为它们在巴斯德毕赤酵母中进行基因敲除提供了一定参考意义。     

重组毕赤酵母培养基碳源的选择

目的：对毕赤酵母重组菌GS115-Ch—Glu菌种进行发酵脱毒条件的优化,为大规模发酵重组毕赤酵母获得高表达目的蛋白奠定基础。方法：以毕赤酵母重组菌为实验菌株,分别以葡萄糖、乳糖、玉米淀粉、蛋白胨、甘油、玉米淀粉＋甘油为碳源,研究不同碳源对菌株细胞生长的影响。结果：毕赤酵母重组菌的最适碳源为玉米淀粉,最适浓度为2．5％。     

不同碳源对重组毕赤酵母表达嗜热β-半乳糖苷酶的影响

为分析碳源对嗜热β-半乳糖苷酶在组成型重组毕赤酵母中的表达水平,葡萄糖、果糖、丙三醇、乳糖、蔗糖和麦芽糖分别用于配制培养基的碳源.当以单糖和甘油为碳源时,酵母的生长和重组嗜热β-半乳糖苷酶的分泌水平要优于双糖;以果糖为碳源时,重组酵母分泌嗜热β-半乳糖苷酶的水平最高,其次为葡萄糖和丙三醇,蔗糖要高于麦芽糖,乳糖最低.     

内切纤维素酶EGII基因克隆及其在毕赤酵母中高密度发酵表达

该文利用RT-PCR方法从里氏木霉mRNA获得EGII cDNA,插入酵母表达载体pPIC9K,整合到毕赤酵母染色体上,获得重组酵母菌株GS115-EGII,通过高密度发酵条件下甲醇诱导,使EGII基因在毕赤酵母中得到了高效表达。     

毕赤酵母发酵过程胞内活性氧的定量分析

利用流式细胞术对毕赤酵母发酵过程中胞内活性氧（ROS）的变化进行定量检测和分析,建立发酵过程单位细胞胞内ROS的相对含量以及单位体积细胞胞内ROS相对含量的计算方法,分析ROS积累对毕赤酵母细胞活力的影响,研究结果表明：在甲醇流加阶段,单位细胞的DCF（2′,7′-二氯荧光黄）染色平均荧光强度随着时间的增加而增加,即单位细胞胞内ROS的含量在甲醇流加阶段一直增加,细胞内产生持续的氧化压力,导致部分细胞死亡;单位体积酵母细胞的胞内ROS含量在甲醇流加阶段保持在一个相对稳定的范围。     

24孔板培养毕赤酵母GYW-1合成谷胱甘肽条件的优化

为了优化24孔板培养毕赤酵母GYW-1合成谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的发酵条件,本文采用单因素实验和正交试验对24孔板的发酵条件进行优化.结果表明,毕赤酵母GYW-1 24孔板发酵产GSH的最优发酵条件为:酵母粉44 g/L、柠檬酸铵15 g/L、接种量12%.通过对发酵条件的优化,可以明显提高毕赤酵母GYW-124孔板发酵产GSH的产量(43.815 mg/L),较初始条件的产量增加了55%.     

几种外源基因真核表达体系研究进展

随着分子生物学的飞速发展,进入到后基因组时代后,人们对蛋白质的结构和功能研究越加深入,对蛋白质表达载体的研究也逐渐丰富．本文主要综述了几种常见的真核表达载体以及影响外源基因在这些载体中表达效率的一些因素,旨在对研究者有所启发．     

Expression of human acidic fibroblast growth factor in Pichia pastoris

1. Introduction Acidic fibroblast growth factor (aFGF), a member of a family of structurally related polypeptides, is a kind of multifunctional protein that can stimulate cellular proliferation, migration and differentiation. In vivo, aFGF displays angiogenic activity promoting vascular endothelial cell mitogenesis as well as chemotaxis and induction of proteases involved in tissue regeneration [1]. Due to this wide range of biological activities, many potential therapeutic usages of aFGF …     

Expression of Drosophila melanogaster acetylcholinesterase (DmAChE) gene splice variants in Pichia pastoris and evaluation of its sensitivity to organophosphorus pesticides

Acetylcholinesterase(AChE) is a key enzyme used to detect organophosphorus pesticide residues by the enzyme inhibition method.An accidental discovery of a mutant strain with AChE activity was made in our laboratory during the process of AChE expression by Pichia pastoris.The pPIC9 K-Drosophila melanogaster acetylcholinesterase(DmAChE)-like expression vector was constructed by codon optimization of this mutant strain,which was transformed into P.pastoris GS115,and positive clones were selected on yeast peptone dextrose(YPD) plate with G418 at 4.0 mg/mL.The GS115-pPIC9 K-DmAChE-like strain was subjected to 0.5% methanol induction expression for 120 h,with a protein band at 4.3 kDa found by the tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE) pattern of the fermentation supernatant.After preliminary purification by ammonium sulfate precipitation,the enzyme activity was detected to be 76.9 U/(mL·min).In addition,the pesticide sensitivity test proved that DmAChE-like is selective and sensitive to organophosphorus pesticides.     

神经干细胞分化相关的一个新基因的研究

1IntroductionNeural stemcells(NSCs)are a subtype of progenitorcells in the nervous systemthat can differentiate intoneurons and glia[1-3].Due to their feature of self-re-newal,NSCs have expectations for treatment of ner-vous system diseases such as Parkin…     

合成双吲哚甲烷衍生物的研究进展

对双吲哚甲烷类化合物的制备进行了总结,按吲哚与不同的底物反应合成双吲哚甲烷衍生物作了如下的论述：（1）吲哚与醛/酮的反应;（2）吲哚与希夫碱的反应;（3）吲哚与其它化合物的反应.     

健美操对健康体适能影响的研究进展

在阅读和研究大量健美操相关文献资料的基础上,对国内外健美操运动影响人体健康体适能的五个方面（心肺功能、肌力、肌耐力、柔韧性和体脂成分）进行分析,旨在探讨健美操在改善健康体适能方面的功效,为指导科学健身提供依据。     

C型产气荚膜梭菌致病因子分子生物学研究进展

C型产气荚膜梭菌是引起仔猪肠毒血症的主要病原菌之一,其致病因子是菌体产生的α、β毒素.作者就α毒素的检测方法、基因克隆与表达调控、结构与功能以及β毒素的分子生物学研究进展进行了介绍.     

新型Ni-P合金镀层材料的研究进展

通过对温度、pH值、搅拌方式等工艺参数在Ni-P合金镀层和Ni-P-PTFE(聚四氟乙烯)复合镀层中粒子分布和含量的影响,对化学镀层的重要性能,特别是耐磨性和耐腐蚀性进行了研究,总结了近年来国内外在化学镀层方面的发展情况,并对Ni-P-PTFE复合镀层和Ni-P合金镀层前景进行了展望。     

美国国家公园管理体制进展研究

国家公园是保护自然和人文资源完整性的重要形式。自1872年第一个国家公园———美国黄石国家公园建立以来,经过一个多世纪的演变与发展,美国国家公园的管理体制日趋成熟完善。我国国家公园发展时间不长,在管理体制方面尚存不足。对美国国家公园管理体制相关文献进行梳理,将美国国家公园的管理体制的内容进行划分,包括国家公园设立标准、管理机构设置、法律基础、规划管理、教育和解说系统、游客体验与资源保护的平衡、资金来源和门票管理及特许经营体制等,运用文献分析法对具代表性论文进行综述,以期为我国该领域以后的研究发展提供借鉴和参考。