3种抗HBV核苷(酸)类似物体外抗乙肝病毒作用

比较3种抗HBV核苷(酸)类似物(拉米夫定、恩替卡韦、替诺福韦)对HepG 2.2.15细胞的毒性作用和对HBsAg、HBeAg和HBV-DNA表达的抑制效果。用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测药物的细胞毒性;酶联免疫(ELISA)法检测HBsAg和HBeAg表达水平;PCR-荧光探针法定量检测HBV-DNA含量。结果:在最高浓度200 mg/L时,拉米夫定组存活率为74.72%,恩替卡韦组存活率仅为36.74%,替诺福韦组存活率为95.22%;拉米夫定和替诺福韦对HBsAg、HBeAg表达无明显抑制,恩替卡韦对HBsAg、HBeAg表达有抑制并与其细胞毒性相一致。在第9天,3种药物对HBV-DNA抑制作用明显,在6.25 mg/L浓度时,抑制率均高于90%;3种药物在相同药物浓度下,恩替卡韦对HepG 2.2.15细胞毒性最大,替诺福韦几乎没有细胞毒性,拉米夫定有一定毒性。     

接种不同剂量乙肝疫苗对阻断乙肝病毒HBsAg、HBeAg双阳性母婴传播效果评价

目的:研究评价接种不同剂量乙肝疫苗对阻断乙肝病毒HBsAg、HBeAg 双阳性母婴传播的效果,探讨有效的乙肝免疫策略,为乙肝防治工作提供科学依据.方法:在我市范围内选择乙肝病毒HBsAg、HBeAg双阳性的孕妇于2008年～2009年所生的新生儿,分别按0-1-6方案接种5μg、10μg 重组酵母乙肝疫苗和20μg 重组(CHO细胞)乙肝疫苗,三针完成1月后采集2-3ml静脉血,观察不同剂量疫苗免疫后阻断乙肝病毒母婴传播效果.结果:接种5μg重组酵母乙肝疫苗新生儿的HBsAg阳性率14.71%,抗-HBs阳性率41.17%;接种10μg重组酵母乙肝疫苗新生儿的HBsAg阳性率7.81%,抗-HBs阳性率65.63%;接种20μg重组(CHO细胞)乙肝疫苗儿童HBsAg阳性率1.52%,抗-HBs阳性率95.45%.结论:20μg重组(CHO细胞)乙肝疫苗与10μg重组酵母乙肝疫苗免疫效果优于5μg重组酵母乙肝疫苗.     

大蒜素抑制卵巢癌SKOV-3／DDP细胞生长作用浓度的实验研究

目的:筛选大蒜素有效作用于人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP的合适的浓度范围,为进一步探讨大蒜素抑制卵巢癌SKOV-3/DDP细胞生长的作用机制奠定基础.方法:首先培养人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP,细胞生长至时数生长期后选取0.625～200μg/ml共9个浓度的大蒜素分别作用SKOV-3/DDP细胞株24、48小时后,用MTT法测定细胞活力.结果:0.625～200μg/ml大蒜素均能抑制SKOV-3/DDP细胞的生长,且呈时间--剂量依赖性,但高浓度(100～200μg/ml)时细胞毒性作用明显,作用24小时细胞抑制率分别为75.12%、82.79%,作用48小时细胞几乎全部死亡.结论:以上MTT结果可作为后期药物实验的大蒜素浓度及观察时间筛选的实验依据,可选择中低浓度(0.625～50μg/ml)作为进一步探讨大蒜素抑制卵巢癌SKOV-3/DDP细胞生长的作用机制(如观察大蒜素对SKOV-3/DDP细胞周期的影响等)的浓度范围.     

外周血单个核细胞感染乙型肝炎病毒在母婴垂直传播中的作用

目的:探讨HBsAg、HBeAg阳性孕妇外周血单个核细胞(PBMC)内乙型肝炎病毒(HBV)DNA感染状况及其在宫内母婴垂直传播中的作用.方法:对HBsAg/HBeAg双阳性共67对孕妇及其新生儿静脉血分离和提纯PBMC后,经抽提、纯化后的DNA进入PCR扩增反应,引物为HBV C区基因序列.结果:67名HBsAg及HBeAg双阳性的孕妇中有35例(52.2%)PBMC中HBV DNA阳性,25例孕妇在血清及PBMC中均发现HBV DNA.67名新生儿有22例感染HBV DNA,感染率32.8%,其中血清HBV DNA阳性者10例,PBMC HBVDNA阳性者19例,二者均阳性者7例.结论:母亲PBMC内HBV DNA阳性可能导致新生儿PBMC中HBV DNA阳性,PBMC内的HBV DNA可能是HBV母婴垂直传播的一条重要途径,同时,HBsAg及HBeAg阳性母亲若血清HBV DNA为阳性就极大增加了其新生儿感染HBV的危险性.     

乙肝病毒标志物定量检测与乙肝患者肝损伤的相关性分析

目的:分析乙肝病毒标志物定量检测与患者肝脏损伤间的相关关系,为乙肝的诊疗提供较好的监测指标.方法:选择新入院乙肝患者的血清,应用时间分辨免疫荧光分析法(TRIFA)测定乙肝病毒标志物的含量;采用实时荧光定量PCR法(FQPCR)测定HBV DNA的含量;同步监测肝损伤指标(ALT、AST、ALB、TBI、CRP)等的变化,并分析其相关关系.结果:总体而言,乙肝患者肝脏损伤指标与乙肝病毒标志物定量检测间无明显相关关系.但乙肝活动期时,肝损伤指标与HBsAg、HBeAg、HBV DNA测定结果之间呈现一定的正相关.结论:乙肝病毒标志物与乙肝炎症活动期肝损伤指标间有一定的相关关系,二者结合可作为乙肝肝损伤的重要监测指标.     

以单细胞凝胶电泳技术检测氟对L-02细胞DNA的损伤作用

目的:探讨氟对人胎肝细胞(L-02细胞)DNA的损伤作用。方法:采用40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml氟化钠对培养的L-02细胞进行染毒,24小时后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测氟化物对L-02细胞的DNA损伤情况。结果:各染氟组人胎肝细胞DNA损伤率明显高于对照组,Ridit值得分别为0.5815、0.8145和0.8923;同时,高剂量氟组与低剂量氟组之间细胞DNA损伤率之间也存在显著性差异(P<0.05)。结论:氟化物可导致L-02细胞DNA损伤,并呈现一定的剂量-反应关系。     

顺铂联合热处理对术中回收血红细胞及其中混杂的肝肿瘤细胞株(HepG2)的影响（英文）

目的:研究离体热处理和顺铂联合热处理对术中回收血红细胞功能的影响及其中混杂的肝肿瘤细胞株(HepG2)的杀灭作用。创新点:(1)采用多种评价指标研究了不同时间离体热处理对术中回收血中混杂的HepG2的杀灭作用及对红细胞的影响,并确定了对红细胞安全且能有效杀灭HepG2的离体热处理时间。(2)从多个角度评价了离体顺铂联合热处理对术中回收血红细胞的影响及对其中混杂的HepG2的杀灭作用,确定了该方案中对红细胞安全且能有效去除HepG2的顺铂浓度。方法:采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)和平板克隆形成评估HepG2的细胞存活率、DNA复制率和克隆形成能力(图1和3);从红细胞渗透脆性、携氧能力(2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)、半饱和氧分压(P50))、能量代谢(Na+-K+-ATPase、pH)、膜完整性(游离血红蛋白(Hb)、血清K+和Na+浓度、细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻比例)等角度评估红细胞功能(图2和4;表3)。结论:肝肿瘤术中回收血经离体顺铂联合热处理(42°C,50μg/ml)60min后,能有效清除其中混杂的HepG2,但对红细胞无显著影响,值得体内进一步研究顺铂热处理有效应用于肿瘤手术自体血液回输的安全方案。     

金钱榕提取物抑制3T3-L1脂肪细胞抗脂肪沉积研究(英文)

研究目的:对两个品种金钱榕(var.deltoidea和var.angustifolia)叶片提取物抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪沉积进行研究,为基于金钱榕的抗肥胖功能产品开发提供理论基础。研究方法:用甲醇和水分别对两个品种金钱榕的叶片进行提取,并分别分析了提取物中的总黄酮含量(TFC)和总酚含量(TPC)。通过MTT法确定提取物对3T3-L1脂肪细胞的最大无毒剂量(MNTD)。然后,通过油红O染色和吸光度测定来定性和定量研究提取物对抗脂肪细胞脂肪沉积的作用。重要结论:金钱榕两个品种deltoidea和angustifolia的甲醇提取物中的TFC含量分别为1.36和1.97 g QE/100 g DW,水提取物中的TPC含量分别为5.61和2.73 g GAE/100 g DW。金钱榕deltoidea品种的甲醇和水提取物对3T3-L1细胞的MNTD分别为(300.0±28.3)和(225.0±21.2)μg/ml,而angustifolia品种的MNTDs则较低(其甲醇和水提取物的MNTDs分别为(60.0±2.0)和(8.0±1.0)μg/ml)。金钱榕两个品种的甲醇提取物和angustifolia品种的水提取物在MNTD或1/2MNTD的浓度下,均具有显著抑制前脂肪细胞的成熟的作用。因此,根据其抑制成熟脂肪细胞形成的结果可以得出金钱榕叶片提取物具有潜在的抗肥胖效果。     

克霉灵对毛木耳及绿色木霉菌丝生长的影响

采用二倍稀释法测定了克霉灵对毛木耳(Auriculariapolytricha)及绿色木霉(Trichodermaviride)菌丝生长的影响.结果表明:不同浓度的克霉灵对绿色木霉菌丝生长均表现为抑制作用,其中以1600μg/ml和3200μg/ml克霉灵对绿色木霉菌丝生长抑制作用最强,200μg/ml～1600μg/ml的克霉灵对毛木耳菌丝生长有促进作用,其中1600μg/ml的克霉灵促进作用最强,而3200μg/ml的克霉灵对毛木耳菌丝生长有抑制作用.     

2009年宁河县食品及公共场所从业人员HBsAg检出情况分析

目的:了解天津市宁河县食品、公共场所从业人员乙肝病毒(HBV)的感染者情况,为进一步做好乙型肝炎防治工作提供科学依据.方法:HBV血清标志物采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行检测.结果:宁河县2009-01-01-2009-10-31日食品、公共场所从业人员HBsAg检测阳性率1.74%,HBsAg、HBeAg双阳性率20.27%.食品、公共场所从业人员来源该地与外埠的HBsAg阳性率分别为1.56%,3.05%.差异有统计学意义(χ2=6.89,P<0.01)结论:宁河县食品、公共场所从业人员HBsAg阳性率低于普通人群感染率(4.4%~8.0%),外埠食品、公共场所从业人员HBsAg阳性率高于本地从业人员.说明我县几年来公共卫生监督防疫部门力度到位,继续开展从业人员每年健康体检和加强乙肝疫苗的预防接种有着重要意义.     

硒对氟致L-02细胞DNA损伤的影响

目的:探讨硒对氟导致的L-02细胞DNA损伤的影响。方法:采用80μg/m l氟化钠、1.73μg/m l亚硒酸钠以及80μg/m l氟化钠和1.73μg/m l亚硒酸钠对培养的L-02细胞进行染毒,24小时后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测各组L-02细胞DNA损伤情况。结果:氟组L-02细胞DNA损伤率明显高于对照组、硒组和氟硒组(P<0.01);而对照组L-02细胞DNA损伤率与硒组和氟硒组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:氟可导致L-02细胞DNA损伤,适量硒可拮抗氟导致的L-02细胞DNA损伤作用。     

鞣花酸对前列腺癌PC-3细胞生长和凋亡的影响

目的观察鞣花酸对前列腺癌PC-3细胞株的影响。方法：体外培养人前列腺癌PC-3细胞,加入0μg/ml、2．5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的鞣花酸作用于PC-3细胞,分别作用12小时、24小时和48小时后,应用MTr法测定各浓度组鞣花酸对PC-3细胞的生长抑制作用。应用流式细胞仪检测鞣花酸作用48小时后,PC-3细胞的周期时相变化及凋亡情况。应用免疫细胞化学检测10μg/ml鞣花酸作用24小时后,实验组与对照组细胞Caspase-3蛋白表达情况。结果：鞣花酸明显抑制PC-3细胞的生长,抑制效应呈时间依赖型和浓度依赖型,与对照组比较均有统计学意义（P〈0．05）。应用流式细胞仪检测结果显示,鞣花酸可将PC-3细胞阻滞于G1／S期,并诱导PC-3细胞凋亡。免疫细胞化学结果显示实验组Ctmpase-3蛋白表达明显升高。结论：鞣花酸对前列腺癌PC-3细胞株有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

磷酸三(1,3-二氯二丙基)酯(TDCPP)对斑马鱼胚胎急性毒性研究

磷酸三(1,3-二氯二丙基)酯(TDCPP)是环境中广泛存在的新兴持久性有机污染物。实验将受精1 h后的斑马鱼胚胎暴露于TDCPP(0,5μg/L,20μg/L,80μg/L和180μg/L)至受精后168 h,在特定时间点观察并记录胚胎/幼鱼的存活率(24～120 haf)、孵化率与畸形率(72 haf)、心率(48 haf,84 haf)、体重与体长(168 haf)。结果显示:与对照组相比,急性暴露TDCPP使斑马鱼胚胎/幼鱼的存活率与孵化率降低、畸形率增加、心率以及体长受到显著抑制,表明TDCPP对斑马鱼胚胎存在显著的急性毒性,并且这种影响随着暴露液TDCPP浓度的增大更为明显。     

Ni~(2+)、Hg~(2+)对果蝇生长发育的影响

以黑体红眼长翅果蝇(Drosophila melanogaster)为材料,培养基用硝酸镍和氯化汞染毒(浓度为0.5μg/mL、5μ/mL、15μg/mL、30μg/mL)后对果蝇后代的雌雄性比、存活率,体重的影响进行研究.结果表明:随着镍、汞浓度的增加和处理世代的增加,Ni2+对果蝇雌雄性比、存活率和体重的毒害较Hg2+轻;高浓度的Hg2+严重抑制雄果蝇的发育;降低果蝇的存活率,抑制果蝇体重的增加.这表明Hg2+对果蝇的毒害要比Ni2+重.     

姜黄素抑制Wnt信号通路对人胰腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究姜黄素对经典Wnt信号通路活性的调控作用,探讨姜黄素在体外对人胰腺癌细胞SW1990增殖凋亡、β-catenin蛋白表达以及下游相关靶基因表达的影响.方法:应用MTT法检测不同浓度姜黄素(20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L、100μmol/L)对人胰腺癌细胞SW1990增殖的抑制作用,用流式细胞仪分析细胞的凋亡率,用Western Blot方法检测姜黄素对β-catenin蛋白表达的影响,用半定量PCR法检测靶基因c-myc、VEGF和cyclinD1在不同浓度姜黄素作用后表达情况的变化.结果:姜黄素作用于人胰腺癌细胞SW1990后,细胞增殖的水平明显下降,凋亡率升高,且呈剂量依赖性.Western Blot结果显示姜黄素能降低胞质蛋白β-catenin的水平.姜黄素抑制SW1990细胞内Wnt信号通路下游靶基因c-myc、VEGF以及cyclinD1的表达水平.结论:姜黄素能抑制胰腺癌细胞的增殖并促进凋亡(apoptosis),其机制与姜黄素下调经典Wnt信号通路中核心蛋白β-catenin的水平有关.     

克霉灵对毛木耳及绿色木霉菌丝生长的影响

采用二倍稀释法测定了克霉灵对毛木耳（Auricularia polytricha)及绿色木霉（Trichoderma viride)菌丝生长的影响。结果表明：不同浓度的克霉灵对绿色木霉菌丝生长均表现为抑制作用,其中以1600μg/ml和3200μg/ml克霉灵对绿色木霉菌丝生长抑制作用最强;200μg/ml－1600μg/ml的克霉灵对毛木耳菌丝生长有促进作用,其中1600μg/ml的克霉灵促进作用最强,而3200μg/ml的克霉灵对毛木耳菌丝生长有抑制作用。     

反催化动力学光度法测定痕量铜

研究了铜阻抑过硫酸钾氧化甲基红褪色反应;应用动力学光度法原理测定铜条件.试验表明,在酸性介质中,其体系灵敏度提高,建立了反催化动力学光度法测定铜最佳测定条件,即过硫酸钾溶液(0.01mol/ml)7ml;无水乙醇6ml:磷酸溶液(1mol/L)0.5ml:甲基红溶液(0.5mmol/L)5ml,其检出限量为8.349×10~(12)g/mL:线性范围0.01—0.08μg/25ml.方法选择性高,一定量的常见离子不干扰测定.可用于测定发样、水样和豆样中的铜.     

白术多糖对离体蛙心生理功能的影响

采用不同浓度的白术多糖溶液和两种不同的受体阻断剂(β受体阻断剂-心得安和M受体阻断剂-阿托品)对蟾蜍进行离体心脏灌流,并对实验结果进行记录和统计分析。结果发现10μg/ml的白术多糖溶液即可加强心肌的收缩能力,二者呈现显著的量效关系。白术多糖溶液在一定浓度范围内不影响心率,但升高到500μ/ml时可使蟾蜍心率增加,至1000μg/ml时引起心肌过度收缩和心动过速,去药后出现心脏功能衰竭。在进行机理研究时选择100μg/ml的白术多糖浓度。结果表明:白术多糖对心肌的作用类似于肾上腺素,可被β受体阻断剂所抑制,M受体阻断剂对其作用几乎没有影响。讨论了心肌细胞和自律细胞对不同浓度白术多糖的敏感性以及可能存在的介导途径。     

强聚硒酵母摇瓶发酵条件的优化研究

通过摇瓶培养条件试验确定了强聚硒酵母最适发酵条件:麦芽汁%,初始硒浓度20μg/mL,在其发酵进入到对数生长期后再添加亚硒酸钠使硒浓度达到60μg/mL,接种量为10%,在28℃、200 r/min的摇床上培养29 h.在此条件下,强聚硒酵母生物量(干重)达到8.25 g/L,酵母细胞中硒含量达到1230.21μg/g.     

基于聚乳酸羟乙酸共聚物的青蒿琥酯纳米颗粒的制备,及其抗疟活性和毒性评价（英文）

目的:为疟疾治疗制定基于聚合物的青蒿琥酯纳米粒。创新点:以聚乳酸羟乙酸共聚物(PLGA)为载体,制备青蒿琥酯纳米颗粒。并以小鼠为模型,评估其抗疟疗效和安全性。方法:以PLGA为载体,采用从单一的水包油乳剂中进行溶剂蒸发的方法制备青蒿琥酯纳米颗粒。借助X射线衍射和差示扫描量热分析对纳米颗粒进行表征。以4 mg/kg的剂量对感染疟原虫的雄性瑞士白化小鼠进行体内抗疟活性的研究,测定血液和肝毒性的相关指标。体外实验以小鼠腹腔巨噬细胞细胞系RAW 264.7为模型,在7.8~1000μg/ml浓度范围内,测定游离型和包裹型青蒿琥酯的细胞毒性。结论:实验结果表明,纳米颗粒的粒径为(329.3±21.7)nm,包封率为(38.4±10.1)%。与游离青蒿琥酯(58.2%)相比,基于PLGA的青蒿琥酯纳米颗粒(Art-PLGA)具有较高的抑虫率(62.6%),P0.05。就血小板计数结果而言,对照组(305 000.00±148 492.40)明显地高于游离青蒿琥酯组(139 500.00±20 506.10)和Art-PLGA组(163 500.00±3535.53),P0.05。因此,药物的使用没有导致肝毒性的产生。体外细胞毒性试验结果表明,Art-PLGA的半数抑制浓度(IC50,468.0μg/ml)显著高于游离青蒿琥酯(7.3μg/ml),P0.05。基于PLGA的青蒿琥酯纳米颗粒是一种有效安全的抗疟治疗方法。