大黄鱼线粒体DNA的限制性内切酶图谱

从大黄鱼(Pseudosciaena crocen)肝脏中提取线粒体DNA(mtDNA)。用限制性核酸内切酶酶切后,得到酶切图谱。以1 kb ladder作为相对分子量标准,以电泳迁移率为纵坐标,分子量的对数值为横坐标作标准图,利用电泳迁移率与分子量的对数值的线性关系,计算出各酶切片段的分子量,并推算出大黄鱼mtDNA分子量为27．33×10~6 D,大小为16．891 kb左右。根据单酶切和双酶切的数据,以及mtDNA是环状分子等特征,建立了大黄鱼的mtDNA酶切图谱。     

植物基因组DNA提取及酶切技术的初步探讨

随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用,人们经常需要提取高分子量的植物DNA,用于构建基因文库、酶切及克隆等,这是研究基因结构和功能的重要步骤。本研究通过用机械方法使组织和细胞破碎,然后加入离子型表面活性剂,溶解细胞膜和核膜蛋白,细胞膜和核膜破裂,进入细胞核内的表面活性剂解聚核中的核蛋白并与蛋白质形成混合物,用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）在低盐浓度下加入酚和氯仿等表面活性剂使蛋白质变性,通过离心得植物总DNA溶液的过程总结CTAB 提取DNA 的方法,进一步了解DNA 的性质。     

内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

通过分子筛层析和离子交换层析等手段,分离纯化了绿色木霉WS-71纤维素酶系中的内切型β-1,4-葡聚糖苷酶组分。通过SDS-PAGE电泳测得分子量为41.8kD,该酶组分的最佳水解温度是50℃,最适pH为4.6。酶在温度40～70℃和在pH4.0￣5.0的区间稳定。Fe3+,K+,Ca2+,Mg2+,Mn2+对酶解有促进作用,Hg2+,Cu2+,Zn2+和EDTA对酶解有不同程度的抑制作用。作用于羧甲基纤维素钠的Km值为16.78mmol/L,Vmax为5.612×10-4mol/min,Kcat为6.97S-1。     

大菜粉蝶颗粒体病毒(pbGV)包涵体蛋白mRNA的提取及电镜观察

包涵体蛋白 mRNA 是大菜粉蝶颗粒体病毒(pbGV)感染晚期合成的主要信使 RNA.我们从染病晚期幼虫脂肪体中,用饱和苯酚法提取总核酸,用 LiCl 去除其中 DNA,经 Oligo-(dT)纤维素层析柱,mRNA 呈现二个洗脱峰,将洗脱峰组份用尿素-高甲酰胺法制样电镜观察.电镜下 mRNA 分子柔软、粗糙,呈弯曲的线状,分子长度约0.3μ(30个统计)     

氧化硫硫杆菌质粒pTt12酶切图谱分析及其在E．coli中克隆

目的改造氧化硫硫杆菌的质粒pTt12,建立一个既能在氧化硫硫杆菌中复制又能在大肠杆菌中复制的穿梭质粒,为用基因工程改造在细菌浸矿、环境保护中使用的．T-业菌株提供实验根据。方法首先进行氧化硫硫杆菌（Thiobacillusthiooxidans-1）的pTt12质粒的限制性内切酶XhoⅠ、PvuⅡ、Bgl Ⅱ、HindⅢ、EcoRⅠ、PstⅠ、BamHⅠ和SalⅠ酶切分析,构建质粒pTt12的物理图谱。通过pBR325质粒（E．cold的SalⅠ切点和pTt12质粒的XhoI切点进行了体外重塑,构成了一个分子量为12．71Md的杂合质粒pSD125,并成功地转入了大肠杆菌HB101菌种。结论经分子量测定、酶切分析、转化试验证明,pSD125质粒确系pBR325和pTt12重组而成,且能在大肠杆菌HB101和Thiobacillusthlooxidans--1中转化克隆。     

斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株pif-2基因的克隆及原核表达

为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura muhicapsid nucleopolyhedrovirus．SpltMNPV）侵染规律,根据SphMNPV中国株（G2）ORF135基因序列设计引物,经PCR扩增,从SpltMNPV日本株（B）基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明,该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV）pif-2的同源物,读码框含1278bp,编码425个氨基酸的蛋白质,推定分子量为48．6kD。与其他杆状病毒的同源物比对显示．SpltMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守。联配分析表明,SphMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异。将pif-2克隆至原核表达载体pET32a（＋）,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达,SDS-PAGE分析表明在约69kD处有特异性表达条带,经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。     

酶联免疫吸附法测定大米中黄曲霉毒素B1

与传统的薄层分析法比较,利用黄曲霉测定仪法测定AFTB1,能得到理想的结果。AFTB1是国家强制性卫生指标,为生产企业实施卫生质量监控,开发应用黄曲霉测定仪提供可靠依据。     

家蚕质型多角体病毒(苏州株)基因组片段8 cDNA克隆与分析

为研究家蚕质型多角体病毒(BmCPV1)的遗传与变异、探讨S8片段的功能,通过RT-PCR克隆BmCPV1苏州株(BmCPV1-SZ)S8的cDNA,并对其核苷酸序列(GenBank登录号:GQ150539)和编码的氨基酸序列进行生物信息学分析.结果显示:S8由1328 bp构成,具有一个编码390个氨基酸残基的开放阅读框;在BmCPV1-SZ S8的编码氨基酸序列与BmCPV1-I和BmCPV1-H的一致性达93%,但与其他非CPV1型的相似程度较低;在推导的蛋白的氨基酸序列中间区域;具有E-丰富和P-丰富的区,域,其局部区域的氨基酸序列与某些蛋白的功能(细胞周期控制、蛋白降解和RNA降解)区域的序列具有一定的相似性;结构域家族分析显示,BmCPV1-SZ S8编码蛋白属GcrA家族,具有与DNA结合的HTH结构域.Blocks分析显示,S8编码蛋白同时具有DNA聚合酶家族、RNA聚合酶2的结构功能域;高级结构分类显示,S8编码蛋白具有与TIM桶酶、肽酶、核苷三磷酸水解酶相似的同源结构.推测该蛋白具有转录调控因子和多功能酶的功能.基于S8编码的氨基酸序列的进化分析显示,相同类型的CPV聚为一类,同一宿主不同类型的CPV相距较远,推测CPV主要根据其类型聚类,而宿主昆虫对聚类的影响相对较小.     

求解0-1背包问题的克隆选择算法

针对传统克隆选择算法中随机点变异求解0-1背包问题中存在的不足,将受体编辑功能引入克隆选择算法中,提出了基于混合克隆选择算法的0-1背包问题求解算法。受体编辑机制中基因片断反转功能能够有效促进克隆进化。实验结果表明,与传统克隆选择算法相比,该算法对0-1背包问题有着较好的寻优能力和执行效率。     

一类H1N1型流行病模型的综合分析

本文建立了一类描述H1N1型流行病的常微分方程模型,利用常微分方程动力系统的理论,研究了我们所建立的模型,得出了该系统的奇点以及奇点的类型,并做了相图,并且得出结论,在H1N1流感的控制中,政府行为是最重要的元素.     

虎杖查尔酮合酶PcCHS1基因的克隆与功能分析

从中药虎杖中通过RACE等方法克隆到一个查尔酮合酶基因的全长cDNA,命名为PcCHS1.该cDNA全长1182 bp,编码一个含393个氨基酸的蛋白质.体外酶促活性研究表明,重组PcCHS1在pH 7～8时催化形成查尔酮为其单一产物,在pH 9时除催化形成查尔酮外,还产生一定量的苯亚甲基丙酮.对PcCHS1第216位和第333位氨基酸进行了定点突变研究,结果表明这些位点对PcCHS1的体外酶促活性影响较大.     

1Dx5+1Dy10品质基因共转化小麦后代的胚乳特异性表达及检测分析

采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）的方法对可育转基因栽培小麦鄂恩1号（EN1）和鄂麦11号（EM11）植株的T1代种子中的谷蛋白亚基成份进行分析,验证种子中是否含有对增强小麦展弹性有显著作用的转基因胚乳特异性表达产物——优质高分子量谷蛋白亚基（HMW—GS）。转基因株D193种子中连锁表达两种亚基基因1Dx5和1Dy10,转基因株D185和D186则均表达其中的1Dx5亚基基因,不同基因型受体可能影响转基因的连锁表达。Χ^2检验表明鄂麦1号、鄂麦11号二种基因型T代种子中转基因表达蛋白1Dx5和1Dx5＋1Dy10产生的表型比均符合预期分离比3：1（P〉0．05）,两种外源基因在小麦基因组中可能均为单位点整合。表明遗传转化分子育种可以成为改良我国小麦加工品质的有效途径。同时并讨论了SDS-PAGE有效检测转基因在早期世代表达的关键步骤。     

乳糖诱导Pfu DNA聚合酶基因的表达及酶的纯化

利用乳糖诱导重组大肠杆菌BL21(DE3)中Pfu DNA聚合酶基因的表达。对诱导菌株起始生长量、乳糖浓度和诱导持续时间进行了优化,尝试使用JK110弱阳离子交换柱和Sephadex G-75凝胶层析柱来分离纯化Pfu DNA聚合酶,并用PCR扩增实验检测酶活性。结果表明乳糖可以有效诱导Pfu酶的表达,JK110离子交换柱有较好的纯化效果,从500 mL培养液中可以得到3×105U的酶活,比活达22,200 U/mg,结果好于IPTG诱导表达。     

1％噻虫啉微胶囊颗粒防治松褐天牛试验初报

噻虫啉为国家林业局主推的一种防治松褐天牛的高效、低毒、低残留的仿生物农药。为真正了解其防治效果,作为松材线虫病发生区的金沙县,松褐天牛发生面积较大,开展噻虫啉防治松褐天牛林间试验尤为重要。试验在厂方提供的最佳防治时间和最适防治药剂量下进行;结果表明,噻虫啉药剂在金沙防治松褐天牛的效果比较明显,对松褐天牛有很好的杀灭作用,可广泛应用在松褐天牛上的防治上。     

微柱法及果糖胺法测定糖尿病患者HbA_(1c)、HbA_1及Gpp的比较研究

采用Trivelli等报道的Bio-Rex70阳离子交换树脂微柱层析法和Roger等报道的果糖胺法(两法均作了适当修改),分别对73例糖尿病患者及61例正常人进行了HbA_(1c)、HbA_1及糖基化血浆蛋白(Gpp)的测定.结果显示患者与正常人之间HbA_(1c)、HbA_1、Gpp均值有非常显著性差别.患者空腹血糖均值与HbA_(1c)、HbA_1、Gpp均值之间均有极显著的相关性.患者HbA_(1c)与HbA_1之间相关系数有极显著意义.证明HbA_(1c)、HbA_1与Gpp均可作为糖尿病控制较准确的客观指标.作者在提高微柱法分离度的关键问题上作了改进,找出了恰当的洗脱液Ⅰ与Ⅱ的Na~+浓度,分别为0.020mol/L与0.070mol/L.分离HbA_(1a+b)与HbA_(1c)结果尚称满意,柱间CV分别为3.1％与2.2％.在降低洗脱液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中剧毒物质氰化钾的浓度问题上也作了研究,找出了较文献报道低2.5倍的氰化钾浓度,即由0.010mol/L降低到0.004mol/L.在果糖胺法中,采用5min与15min两次比色,用10％冰醋酸终止反应,提高了此法的精密度与重复性,批内CV为2.3％,批间CV为2.7％.     

从i+1理论看体音美学生大学英语分级教学的必要性

目前国内大学英语分级教学研究集中在对普通专业学生英语学习的研究上,很少关注体音美特殊专业大学英语教与学的研究。为了更好地把握特殊专业大学英语教学规律,巩固大学英语分级教学成果,进一步提高体音美大学英语教学质量,文章从i+1理论入手具体分析了体音美学生大学英语分级教学的必要性,并在此基础上提出了相应的改革措施。     

厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1在大肠杆菌中的表达

厌氧真菌能够产生高比活力的纤维素酶,但由于对厌氧环境的生产条件要求严格,生长速度缓慢,并不适合规模生产。本研究将厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)连接,得到重组质粒pET-28a(+)-af1。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,重组质粒转化后获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-af1。采用SDS-PAGE蛋白电泳对重组大肠杆菌的表达产物进行分析,在40 kDa附近得到与目的基因af1表达蛋白理论值相当的明显条带。AF1酶蛋白的最适pH为6.0,最适温度为45°C。重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验结果显示:诱导培养18 h时,内切型-β-葡聚糖酶(CMC酶)活力可达410 U/mL。该项研究工作为进一步构建内切型-β-葡聚糖酶高产菌株奠定了良好的基础。     

新形势下1+X证书制度实施的难点及对策分析与研究

虽然我国人口受教育程度不断提高,但是职业教育仍然存在许多问题,严重阻碍了我国国民经济的发展。本文首先简要论述1+X证书制度实施的意义,然后详细分析了1+X证书制度实施的难点,最后参考相关文献,根据自身工作经验,对如何有效实施1+X证书制度,提出了几点措施,以期促进我国职业教育的可持续发展。