重组单克隆抗体生产的宿主细胞系的研究进展

许多表达系统可以表达单克隆抗体,并且也在研究中。CHO细胞是最常用于研究的细胞系,直到今天仍然是单克隆抗体生产的主力。对宿主细胞系进行改造提高产品产量及质量,不同的宿主细胞系生产的产品质量存在差异。     

团头鲂尾鳍细胞系TQ—8801的建立

通过组织培养,成功地建立了团头鲂(Megalobrama amblyocephala)尾鳍组织来源的细胞系,定名为TQ-8801,培养基选用含10％小牛血清的“199”,培养温度25～27℃,pH6.8～7.0,传代时适宜细胞密度为2×10~5个/ml。染色体分析,82％的细胞染色体数在46～51之间,其中2n=48占66.7％。这说明该细胞系属正常二倍体细胞系。迄今细胞生长稳定,已传至40代。     

抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体高表达细胞株的克隆筛选

目的:以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为宿主,构建高表达抗表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体的细胞株。方法:本研究将构建好的抗EGFR单克隆抗体轻链和重链的表达载体,通过优化的电转方法转入CHO宿主细胞,确定G418的工作浓度,在含G418的化学成分已知的培养基中进行克隆筛选,最后筛选后的转染库进行三次克隆筛选,获得稳定高表达抗EGFR抗体的细胞株。结果:通过进行表达量稳定性分析后,筛选出一株表达量较高的细胞株。结论:该克隆筛选方法可行,为抗EGFR抗体的生产提供了稳定高产的细胞系。     

重组CHO细胞的冻存与复苏条件研究

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rh TNFR-Fc)在治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎等方面具有显著疗效~([1]),并日益显示出其重要作用和广阔的市场前景。随着细胞融合技术及基因工程的发展,大规模动物细胞培养技术已成为生物制药走向产业化的关键和核心。本文以表达rhTNFR-Fc的CHO细胞为研究对象,通过确定合理的冻存及复苏条件,建立合理的控制策略,为提高CHO细胞的细胞密度和目的蛋白产量,为rhTNFR-Fc融合蛋白的工业化生产奠定基础。     

细胞癌细胞系的建立与生物学特性的关联研究

目的以原代培养的喉鳞状细胞癌组织细胞为例,观测细胞癌细胞系的生物学特性。方法通过组织块培养法,体外原代培养喉鳞状细胞癌组织细胞,细胞传代超过25次时,观察细胞的样态、细胞角蛋白的组织化学染色、检验细胞增值周期、培养法检验支原体、聚合酶链反应法(PCR法)鉴别细胞种类、STR-短串联重复序列基因分型。结果新建立一株喉鳞状细胞癌细胞系,定名为TR-LCC-1,其大多数形态为多边形细胞,铺路石样变异、叠层生长,除了形态区别于其他细胞外,其体积也比较大。细胞角蛋白的组织化学染色呈阳性。繁衍30代之后,细胞群体倍增时间提高到201.2小时。对细胞间期进行检验,发现DNA合成前期(G1期)占51.71%,DNA合成期(S期)占44.56%,DNA合成后期(G2期)占2.28%。培养法检验支原体,未发现污染。聚合酶链反应法(PCR法)鉴别TR-LCC-1种类属于人来源细胞。对STR-短串联重复序列进行检验,发现P26与P6一致,异于已知细胞的短串联重复序列。结论人来源喉鳞状细胞癌的细胞系TRLCC-1,可以作为样本以研究喉鳞状细胞癌的特性。     

细胞癌细胞系的建立与生物学特性的关联研究

目的以原代培养的喉鳞状细胞癌组织细胞为例,观测细胞癌细胞系的生物学特性。方法通过组织块培养法,体外原代培养喉鳞状细胞癌组织细胞,细胞传代超过25次时,观察细胞的样态、细胞角蛋白的组织化学染色、检验细胞增值周期、培养法检验支原体、聚合酶链反应法(PCR法)鉴别细胞种类、STR-短串联重复序列基因分型。结果新建立一株喉鳞状细胞癌细胞系,定名为TR-LCC-1,其大多数形态为多边形细胞,铺路石样变异、叠层生长,除了形态区别于其他细胞外,其体积也比较大。细胞角蛋白的组织化学染色呈阳性。繁衍30代之后,细胞群体倍增时间提高到201.2小时。对细胞间期进行检验,发现DNA合成前期(G1期)占51.71%,DNA合成期(S期)占44.56%,DNA合成后期(G2期)占2.28%。培养法检验支原体,未发现污染。聚合酶链反应法(PCR法)鉴别TR-LCC-1种类属于人来源细胞。对STR-短串联重复序列进行检验,发现P26与P6一致,异于已知细胞的短串联重复序列。结论人来源喉鳞状细胞癌的细胞系TRLCC-1,可以作为样本以研究喉鳞状细胞癌的特性。     

丁酸钠对CHO细胞表达EPO的影响

研究了培养基中添加不同浓度丁酸钠对CHO细胞表达EPO的影响。细胞计数、dotblot、唾液酸含量等检测结果表明,丁酸钠能够抑制细胞生长,影响细胞活率,增加EPO表达并且提高唾液酸含量。     

人类胚胎干细胞安全培养新方法

美国科学家近日称，他们开发出了不含有动物结缔组织细胞或血清细胞的人类胚胎干细胞培养方法，从而可避免此类细胞在培养中可能被动物细胞分子所污染。     

两种转染试剂转染重组质粒至人肝癌细胞SMMC-7721细胞转染条件的比较

使用X-treme GENE HP DNA和Ex Gen 500转染试剂分别转染经绿色荧光蛋白标记的重组质粒至人肝癌SMMC-7721细胞,培养48h后,通过计算发现随着转染试剂的增加,转染效率和细胞毒性都逐渐增加,X-treme GENE HP的转染效率高于Ex Gen500(P0.05);X-treme GENE HP的细胞毒性低于Ex Gen 500(P0.05);血清和抗生素对转染效率影响无显著性差异(P0.05)。X-treme GENE HP对SMMC-7721细胞有较高的转染效率和较小的细胞毒性,转染时使用正常培养基培养。     

成人睾丸干细胞

虽然成人睾丸细胞仅限于在正常发育过程中产生生殖细胞,但来自几个方面的证据都表明．它们在适当条件下可成为多能细胞。现在．这些条件已被发现。从来自成人睾丸的未成熟人类精子细胞开始．Conrad等人确定了可像人胚胎干细胞一样被操纵和分化的细胞系。这些细胞可被稳定地分化成为分泌胰岛素的细胞或肌性细胞系、成骨细胞系和与神经细胞相似的细胞系。当在皮下移植时．这些细胞会在小鼠身上形成畸胎瘤,这是它们具有多能性的进一步证据,也反映了这些细胞在再生治疗中所具有的潜力。     

中华猕猴桃多糖对巨噬细胞T细胞免疫介质的作用

一种从我省野生中华猕猴桃药材中提取的多糖化合物:ACPS-R,经体内或体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)和脾淋巴细胞,受刺激的这些细胞的培养上清液,对相应的C3H/HeJ小鼠胸腺及CTLL细胞株,有明显的促增殖作用,提示Mφ及淋巴细胞培养上清液中分别含有IL-1及IL-2,受刺激后的小鼠血清成分,能抑制水泡性口炎病毒对L_(929)细胞的致病变作用,提示该血清中含有干扰素,结果表明,中华猕猴桃多糖化合物对Mφ-T细胞免疫网络中的多种调节介质,具有促分泌作用。     

重组人促红细胞生成素的制备与临床应用

本研究主要探讨采用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞来生产重组人促红细胞生成素(rhEPO),该类细胞株的稳定性好并且有较高的表达效率,rhEPO的理化性质和生物学特性与人尿的促红细胞生成素(EPO)没有差别;其在临床应用上对治疗肾性贫血有较好的疗效,同时其对非肾性贫血的治疗也有良好前景。     

克隆技术及其应用

“克隆”的含义是无性繁殖 ,即由同一个祖先细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系 ,这个细胞系中每个细胞的基因彼此是相同的。动物克隆 ,就是指通过无性繁殖由一个细胞产生一个和亲代遗传性状一致 ,形态非常相像的动物。随着动物克隆研究的发展、克隆技术将广泛应用于医学、畜牧业和濒危动物保护等领域。     

不同海拔藏、汉族青年生化参考值的研究

目的研究高原不同海拔地区藏、汉族临床部分常用生化系列正常参考值及不同民族间的差异.方法采用日立(HITACHI)7020机型全自动生化系列测定仪,测定了2406名藏、汉族健康男性血清中TBIL、DBIL、CHO、TG、TP、ALB、ALT、AST共8个项目.分设高脂、清淡饮食组,并进行同一海拔高度和不同海拔高度组间的对比观察.结果①ALT、AST、TBIL、DBIL林芝、拉萨、那曲三个地区间相比有非常显著差异(p＜0.001);CHO、TG那曲与林芝、拉萨均值之比有显著差异(p＜0.001),②ALT、AST、TBIL、DBIL藏、汉族的高脂组均高于清淡组(p＜0.05).③TBIL、DBIL汉族均值高于藏族两组间有显著差异(p＜0.05).     

肿瘤标志物检测在肺癌患者血清中的临床观察

目的:分析研究肺癌患者血清肿瘤标志物检测的方法以及应用价值,为临床提供依据。方法:选取2014年1月到2015年1月肺癌患者资料50例以及肺部非肿瘤性疾病患者资料50例实施回顾性分析,对两组患者治疗之前以及治疗之后的血清癌胚抗原、神经元特异性烯醇化酶以及细胞角质蛋白19片段水平进行检测,将检测结果进行统计学分析。结果:肺癌组患者的血清癌胚抗原、神经元特异性烯醇化酶以及细胞角质蛋白19片段水平显著高于非肺癌组患者(P0.05),具有统计学意义,其中血清癌胚抗原水平最高,小细胞癌患者血清神经元特异性烯醇化酶水平最高,鳞癌患者血清细胞角质蛋白19片段水平最高;化疗有效和化疗无效患者之间的血清肿瘤标志物比较存在明显的差异(P0.05),具有统计学意义。结论:对肺癌患者进行血清癌胚抗原、神经元特异性烯醇化酶以及细胞角质蛋白19片段水平检测可以帮助对肿瘤细胞类型的判断,患者化疗之前以及化疗之后的血清水平改变情况和治疗效果密切相关。     

生物技术与医学诊断制剂

目前生物工程技术在商业上的种种应用中,单克隆抗体在数量上居领先地位。这在很大程度上是由于单克隆抗体在体外诊断上的应用。体外诊断制品不必像经过体内服用药品那样严格的安全检验。以单克隆抗体为基础的产品数量的增加是由于杂交瘤技术以及抗体功能知识的进展。单抗技术的进一步改进将使其在制药工业包括体内诊断,预防法、治疗法上得到大量应用。 来自人细胞的(而不是啮齿动物)杂交瘤(单克隆抗体分泌细胞系)己被应用到制药工业上。来自人细胞的单克隆抗体应用于内服药物比来自鼠的在免疫反应上害处要少些。在技术上,人杂交瘤的制备仍然在襁褓中,但从人的细胞系生产单克隆抗体的进展将促进以单克隆抗体为基础的新药和替代药物。     

神经、骨及软骨组织工程学研究进展

组织工程化骨和软骨组织已初步用于临床修复骨和 软骨缺损,显示了临床应用前景。在周围神经的组织工程研究中,已建立了MSC 800永生雪 旺细胞系。用多孔、中空纤维管复合多种细胞外基质和雪旺细胞,有显著促进神经再生作用 。用不同来源的成骨细胞与不同组成成分和结构的支架复合,在体内和体外都观察到成骨现 象。在动态压力下培养软骨细胞,与高分子支架材料复合培养形成的软骨组织具有更好的形 态和功能。     

IL-18-GPI融合蛋白的表达及其免疫增强作用的研究

目的:构建真核表达IL-18-GPI融合基因的表达载体,观察融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达动力学及生物学活性,为进一步研究细胞因子作为免疫增强剂在临床肿瘤治疗中的应用奠定基础.方法:通过RT-PCR的方法从脂多糖刺激的外周血淋巴细胞中钓取IL-18基因,通过共用限制性酶切位点与GPI相连形成pcDNA-IL-18-GPI真核表达质粒.将质粒转染CHO细胞后建立稳定表达融合蛋白的细胞株用于融合蛋白的提取.对提取纯化的蛋白进行生物学特性、蛋白质转移分析和γ-IFN诱导实验.结果:获得714 bp的核酸序列并构建重组质粒pcDNA-IL-18-GPI.SDS-PAGE和West-blot显示在CHO细胞中表达的IL-18-GPI融合蛋白分子量约为27.5 kD,该蛋白具有明显的蛋白转移和诱生γ-IFN的作用.结论:IL-18-GPI融合蛋白是一种潜在的肿瘤疫苗增强剂,具有良好的应用前景.     

浅析动物细胞悬浮培养反应器

生物反应器是大规模细胞悬浮培养的核心设备,由于动物细胞与微生物细胞有很大差异,对体外培养环境有严格的要求,所以借助生物反应器模拟体内环境使细胞进行增殖,是动物细胞能在体外存活并大量繁殖的有效途径。因此,生物反应器是动物细胞悬浮培养的重要支柱,它的设计和选择直接影响动物细胞悬浮培养的成败,文章对生物反应器的各个系统进行了剖析,予以在实践中指导试验和生产。     

科教大事：NATURE最新内容精选

人类ISL1心祖细胞产生多种多功能心血管细胞系最近研究发现,小鼠的多功能胚胎ISL1（表达Islet 1）祖细胞能够生成心脏中所有主要的细胞类型。与鼠类不同．在人类心脏发育过程中．心细胞系分化和表达要经历更长的时间．因而人心脏生成的途径一直被认为是相对多样化的。