日本七鳃鳗pcna基因克隆、生物信息学分析及真核表达

增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),也称周期蛋白或DNA聚合酶的辅助蛋白,是真核细胞合成所必需的核蛋白,在DNA复制中起重要作用。前期实验发现日本七鳃鳗肝脏cDNA文库的表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)中存在与高等脊椎动物pcna基因同源的序列。提取日本七鳃鳗(Lampetra japonica)肝脏组织RNA,通过RT-PCR方法扩增七鳃鳗pcna基因,对其进行生物信息学分析,并将Lj-pcna基因成功构建到pGFP-N2真核表达载体上,重组质粒PGFP-N2-Lj-pcna转染人Hela细胞,荧光显微镜下观察有荧光蛋白的表达。日本七鳃鳗pcna基因的真核表达载体成功构建和转染,为探讨七鳃鳗pcna基因功能研究及其它七鳃鳗相关研究提供条件。     

粉防己碱对VSMC表型转化和p38及MKP-1表达的影响

研究粉防己碱(tetrandrine,Tet)抑制内膜损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和对p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)及丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达的影响。采用HE染色检测28 d假损伤组(S组)、损伤组(I组)和损伤 Tet治疗组(Tet组)血管形态学改变;分别使用免疫组化、Western blot和RT-PCR技术检测I组和Tet组7、14、28 d增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)、p38 MAPK和MKP-1表达的变化。结果为:①28天S组血管壁各层结构完整;I组新生内膜(NI)面积显著增加,管腔面积(LA)显著缩小;Tet组NI增殖较I组明显减轻,LA增加。②损伤后7 d,Tet组与I组之间血管壁SMα-actin、PCNA、p38 MAPK和MKP-1表达基本一致,NI增殖程度亦基本相同。Tet组14和28 d,血管壁中PCNA和p38 MAPK表达均低于I组;而MKP-1表达均高于I组;14、28 d SMα-actin表达均略高于I组。因此Tet可不同程度地拮抗内膜损伤后P38MAPK信号转导途径及其调节,抑制VSMC表型转化,继而减缓NI增殖。     

地塞米松对视网膜色素上皮细胞增殖的影响

检测地塞米松对体外培养的人视网膜色素上皮细胞生长的影响．对hRPE细胞进行常规培养,取3-4代生长良好的细胞用于实验,采用MTT法研究不同浓度、不同作用时间．地塞米松对hRPE细胞增殖的影响．用免疫细胞化学染色法检测添加不同浓度、不同作用时间地塞米松对hRPE细胞核内细胞增殖核抗原表达的影响．MTT法发现小剂量地塞米松促进hRPE细胞的增殖．50-200mg／L浓度组随着浓度的增高。hRPE细胞的增殖更加明显．大剂量地塞米松抑制hRPE细胞的增殖,且随着浓度的增高,对hRPE细胞的增殖的抑制更加明显．免疫细胞化学染色法发现．在50-200mg／L浓度组,随着浓度的增高,hRPE细胞核内PCNA表达增强。光密度值增大．在400-800mg／L浓度组。随着浓度的增高。hRPE细胞核内PCNA表达减弱．光密度值减少．小剂量地塞米松促进体外培养的hRPE细胞的增殖及细胞核内PCNA的表达,大剂量地塞米松抑制体外培养的hRPE细胞的增殖及细胞核内PCNA的表达．     

基因工程专题辅导提纲

基因工程是指将某特定的基因(DNA片段),通过载体或其他手段送入受体细胞,使它在受体细胞中增殖并表达的一种遗传学操作。采用基因工程的方法,能够将一种生物DNA片段(外源基因)导入另一种生物体内,使两者的遗传物质结合起来,以改变其遗传结构,从而创造出新物种或新品种。1 基因工程操作的主要步骤1.1 获取目的基因(外源基因) 利用基因“剪刀”——DNA限制性内切酶,将外源DNA切成许多片段,从中获取所需要的目的基因。1.2 目的基因和载体连接载体是基因的“运输工     

心脏为什么不长癌

从没听说过心脏癌,这是为啥?研究表明,在各种致癌因素的作用下,癌细胞有一种疯狂的、过度的分裂增殖现象,并完全脱离了机体的各种调节和控制机能的制约,通常细胞核内的DNA控制着蛋白质的合成过程,因此,细胞的繁殖取决于DNA的合成情况。     

蜂王浆主蛋白对人胚肺成纤维细胞HFL-I的抗衰老作用及其作用机制研究（英文）

目的:探讨不同浓度蜂王浆主蛋白(MRJPs)对人胚肺成纤维细胞HFL-I的抗衰老作用,并对其可能的分子机理进行预测。创新点:本实验采用拉曼光谱法探究添加MRJPs对HFL-I细胞内成分的影响。实验发现添加MRJPs的HFL-I与对照组的HFL-I的拉曼光谱图中,与DNA和蛋白质合成相关的拉曼峰发生了变化。该发现在未来可作为鉴定衰老HFL-I的一种手段。方法:实验以蜂王浆为原料,利用透析法得到MRJPs。通过对不同浓度MRJPs处理的HFL-I进行细胞形态学观察,测定HFL-I生命周期以及检测其β-半乳糖苷酶活性,评价了MRJPs的抗衰老效果。并且通过MTT法考察了不同浓度MRJPs对HFL-I的促增殖作用。同时,实验一方面采用实时定量聚合酶链反应(q PCR)测量了不同浓度MRJPs处理的HFL-I的细胞端粒相对长度以及MTOR、SOD1、CTNNB1、TP53四种衰老相关基因的相对表达量;另一方面还通过拉曼光谱实验法,进一步探索了MRJPs抗衰老的分子机理。结论:本实验结果显示,添加MRJPs能降低HFL-I衰老细胞所占比例,显著延长HFL-I的生命周期,一定量的MRJPs还能够促进HFL-I的增殖。此外,MRJPs还能减缓细胞端粒长度的缩短,上调衰老相关基因SOD1的表达,下调抗衰老基因MTOR、CTNNB1和TP53的表达。通过MRJPs添加组细胞的拉曼光谱上出现的独特的碱基、酰胺羰基和芳香氢峰,推测MRJPs的抗衰老作用可能与促进DNA及蛋白质在细胞中的合成密切相关。     

专题三 细胞的增殖、分化、衰老和凋亡

知识梳理一、细胞的增殖1.细胞不能无限长大的原因(1)细胞表面积与体积的关系限制了细胞的长大。(2)细胞核中的DNA不会因为体积的增大而增多,随细胞体积增大,造成核质比不平衡,细胞核对     

专题三细胞的增殖、分化、衰老和凋亡

知识梳理 一、细胞的增殖 1.细胞不能无限长大的原因 (1)细胞表面积与体积的关系限制了细胞的长大. (2)细胞核中的DNA不会因为体积的增大而增多,随细胞体积增大,造成核质比不平衡,细胞核对细胞的控制力就越低,从而引起分裂.     

人KLK7基因的表达及其对细胞增殖与凋亡的影响

本研究旨在对人激肽释放酶7 (KLK7)基因进行原核与真核表达,研究其功能,并为后续KLK7新型生物抑制剂的研制提供基础材料。采用PCR扩增KLK7基因,将其克隆至原核表达载体pGEX4T-1和真核表达载体pEGFP-C1,构建重组表达质粒pGEX4T-1-KLK7和pEGFP-C1-KLK7,分别转化Transetta (DE3)和DH5α感受态细胞,筛选阳性菌株,用IPTG诱导重组KLK7蛋白（rKLK7）表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。将pEGFP-C1-KLK7转染人角质形成细胞HaCaT,观察KLK7在细胞中的定位,检测KLK7基因过表达对角质化细胞增殖的影响。KLK7基因开放阅读框为762 bp,编码254个aa。原核系统表达的rKLK7分子量为53.5 kDa。EGFP-KLK7融合蛋白定位在细胞质。KLK7的过表达对HaCaT细胞的增殖有一定的抑制作用,但差异不显著（P>0.05）。DNA检测表明,KLK7过表达可促进HaCaT细胞的凋亡。KLK7在原核表达系统和真核细胞中均成功表达,KLK7蛋白过表达对HaCaT细胞的增殖有一定的抑...     

有丝分裂和减数分裂

分裂是生活细胞的重要特征。每个细胞都是通过分裂而来,又通过分裂而维持其生存;细胞一旦停止分裂就趋向分化,甚至衰老和死亡。有增殖能力的细胞每次分裂后都要进行生长和DNA复制,然后再进行分裂,细胞的这种生长和分裂的周期称细胞周期。它是指一次细胞分裂结束后,细胞开始生长,到下一次分裂结束所经历的过程。所以整个细胞周期包括细胞的生长、DNA复制和细胞分裂。1953年Howard和Pelc根据细胞形态和生物化学的变化把它分为G_1、S、G_2和M等四个时期(图1)     

MCM5在细胞复制中的调控与肿瘤发生的研究进展

MCM(微小染色体维持蛋白)是DNA复制允许因子之一,由六个保守亚基组成六聚体,表现复制型DNA解旋酶的活性.该分子参与细胞复制过程中DNA复制起始的调控.自1992年发现MCM分子以来,在细胞生物学、遗传学和蛋白分子生物学不同领域中对其进行了广泛而深入的研究:一方面研究MCM如何参与细胞DNA复制起始和细胞增殖的;另一方面研究细胞异常增殖时MCM5蛋白的表达可作为肿瘤细胞发生的标记物.MCM5蛋白已成为研究细胞生命过程以及早期诊断肿瘤细胞的一类重要分子.     

线粒体的DNA与遗传简述

线粒体是真核细胞中的重要细胞器.早在1963年由Cheverment等发现成纤维细胞的线粒体在适当条件下可产生Feulgen阳性反应.从而首先证明了其内有DNA的存在.随着细胞生物学的发展和研究的不断深入又知道:线粒体具有独立自主复制和转录的DNA基因.可编码合成rRNA和tRNA进而合成线粒体中的少部分蛋白质.当然,组成线粒体的大部分蛋白质成分仍由核DNA编码.也就是说线粒体的发育增殖是核DNA和线粒体DNA共同控制的,线粒体DNA绝大多数是一种双链环状分子.它的一级结构中基本上没有重复的核苷酸序列.多聚核苷酸序列短,其分子内部核苷酸的组成不均一.一般认为,线粒体DNA复制不在细胞周期的S期而是在G_2期,复制不可缺少的DNA聚合酶虽由核基因编码但与真核细胞其他的DNA聚合酶不同,只能在线粒体中     

比较转录组学分析揭示阿霉素经p53信号通路诱导视网膜色素上皮细胞凋亡（英文）

目的:通过比较阿霉素(ADR)作用的视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)和正常ARPE-19间的差异表达基因和信号通路,探究ADR治疗玻璃体视网膜增殖性疾病的潜在机制。创新点:首次运用基因芯片技术通过比较转录组学分析探究ADR促进ARPE-19细胞凋亡的机制。方法:采用磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法和碘化丙啶(PI)单染结合流式细胞术检测ADR对ARPE-19细胞的增殖抑制作用;通过基因芯片技术筛选ADR作用的ARPE-19细胞(实验组)和正常ARPE-19细胞(对照组)间的差异表达基因和相关信号通路;用JC-1染色结合流式细胞术和Bcl2/Bax蛋白表达比率检测线粒体功能;通过检测γ-H2AX、p-CHK1、 p-CHK2等蛋白表达量分析DNA的损伤和修复。结论:ADR通过启动DNA损伤反应,引起p53信号通路依赖的线粒体功能失调并激活caspase依赖的凋亡,最终导致ARPE-19细胞死亡。     

线粒体DNA及其研究意义

本文阐述了核外遗传物质线拉体 DNA(mtDNA)的结构特点、合成与表达及 mtDNA 在细胞、分子生物学和进化生物学等学科中研究意义与最新进展。     

P_(53)、PCNA在胃粘膜中的表达及其与胃癌发生的关系

目的为探讨P_(53)、PCNA抗原在胃粘膜中的表达情况及其与胃癌发生的关系方法：应用LsAB免疫织化方法对80例胃粘膜进行了检测结果显了胃癌中P_(53)、PCNA强阳性表达率（80％、93．3％）明显高于异型增生（467％,53．3％）异型增生中P_(53)、PCNA强阳性表达率明显高于慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎．结论研究结果表明,检测P_(53)、PCNA在肖粘膜中的不同表达,对胃癌发生机理的认识有重要意义．     

深耕核心素养 引导高中教学——以2023年高考广东卷第2题为例

<正>1原题呈现例题中外科学家经多年合作研究,发现circDNMT1 (一种RNA分子)通过与抑癌基因p53表达的蛋白结合诱发乳腺癌,为解决乳腺癌这一威胁全球女性健康的重大问题提供了新思路。下列叙述错误的是(C)A. p53基因突变可能引起细胞癌变B.p53蛋白能够调控细胞的生长和增殖C.circDNMT1高表达会使乳腺癌细胞增殖变慢D.circDNMT1的基因编辑可用于乳腺癌的基础研究     

联合使用IFN-α和TT-1通过增强NKG2D和MICA的相互作用达到抗肝癌效果的研究（英文）

目的:评估干扰素α(IFN-α)和TT-1(一种蜂毒肽的类似物)联合用药的抗肿瘤效果,并初步研究联合用药的抗肿瘤及免疫调节机制。创新点:为了增强蜂毒肽的抗肿瘤效果,本课题组在其基础上进行改造,合成了一种新的化合物TT-1。该研究第一次将蜂毒肽类似物和免疫细胞因子IFN-α联合使用,并通过实验证实联合用药可以通过激活免疫调节来增强TT-1的抗肿瘤效果。方法:首先通过MTT实验验证TT-1对HepG-2/Huh7细胞的增殖抑制作用。接着建立HepG-2/Huh7小鼠移植瘤模型,考察TT-1+IFN-α的体内抗肿瘤效果;使用anti-asialo GM-1抗体消除自然杀伤(NK)细胞,验证NK细胞在联合用药中的关键作用。使用流式细胞术和酶联免疫吸附法(ELISA)验证TT-1对HepG-2/Huh7细胞MHC I链相关分子A(MICA)表达的影响,并用实时聚合酶联反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)对其机制进行探究;通过细胞毒性实验考察TT-1+IFN-α是否可以增强NK细胞对HepG-2/Huh7细胞的特异性杀伤作用。最后使用免疫组化的方法考察TT-1+IFN-α联合用药对肿瘤组织中MICA和NKG2D的表达量的影响。结论:MTT实验表明TT-1可以在体外有效地抑制HepG-2/Huh7细胞的增殖。小鼠移植瘤模型实验结果显示TT-1+IFN-α联合用药比TT-1单独给药更能有效地抑制HepG-2/Huh7移植瘤的生长,但是在消除NK细胞之后该效应明显减弱,说明TT-1+IFN-α的抗肿瘤效应是通过NK细胞特异性介导的。TT-1不仅可以上调肿瘤细胞表面MICA的表达量,而且可以减少可溶性MICA的分泌;进一步研究表明,TT-1通过抑制去整合素金属蛋白酶10(ADAM 10)的表达来阻止MICA从肿瘤细胞表面脱落。细胞毒性实验表明,TT-1+IFN-α可以显著增强NK细胞对HepG-2/Huh7细胞的杀伤作用。免疫组化实验结果显示,TT-1+IFN-α联合用药可以明显增加肿瘤组织中肿瘤细胞表面MICA和NK细胞NKG2D的表达量。综上所述,TT-1+IFN-α联合用药可以通过增强MICA和NKG2D的相互作用达到显著的抗肿瘤效果。     

病毒、原核生物、原生生物的区分

一、知识归纳(1)病毒(如噬菌体)是没有细胞结构、由蛋白质和核酸(每种病毒只含一种核酸,如DNA或RNA)等物质组成的简单生命体,营寄生生活,以复制的方式增殖.离开寄主无生命活性.不要把它们当成原核生物.     

介绍与“非典”有关的一组综合题

1 “非典”即SARS病 ,是由冠状病毒的一个变种引发的一种严重急性呼吸系统综合症 .病毒有包膜 ,包膜上有棘突 ,整个病毒象日冕 ,它是一种RNA病毒 .图 1是SARS病毒结构示意图 ,请回答下列问题 :图 1(1 )SARS病毒的遗传物质是 [　 ]　　　 ,它的基本组成单位是　　　　　 .决定病毒抗原特异性的物质是 [　 ]　　　 ,它的基本组成单位是　　　 .(2 )病毒浸入人体后 ,在 [3 ]的作用下 ,能形成DNA并整合到人体细胞的DNA分子中 ,可见 [3 ]是　　　　酶 .在DNA的指导下 ,在人体细胞的　　　中 ,利用人体细胞的　　　合成病毒的包膜 .2 …     

2007年普通高等学校招生全国统一考试（天津卷）——理科综合测试生物部分

一、选择题1.下列关于细胞基因复制与表达的叙述,正确的是()A.一种密码子可以编码多种氨基酸B.基因的内含子能翻译成多肽C.编码区增加一个碱基对,只会改变肽链上的一个氨基酸D.DNA分子经过复制后,子代DNA分子中(C T)/(A G)=12.下列关于动物新陈代谢的叙述,不正确的是()A.在正常情况下,肝脏细胞可以将多余的脂肪合成为脂蛋白B.当血糖含量升高时,肌肉细胞可以将葡萄糖合成为糖原C.糖类分解时可以产生与必需氨基酸相对应的中间产物D.氨基酸脱氨基产生的不含氮部分可以合成为脂肪3.下列叙述正确的是()A.当病毒侵入人体后,只有细胞免疫发…