极大螺旋藻(Spirulina maxima)藻蓝蛋白基因的克隆及其同源性分析

藻蓝蛋白是红藻和蓝绿藻中一种重要的捕光色素蛋白．克隆了编码极大螺旋藻藻蓝蛋白α和β两个亚基的基因，序列分析表明该基因全长为1119bp．β亚基基因位于α亚基基因上游，两个亚基基因序列长度分别为519bp和489bp，中间被111bp的基因片段间隔．除编码α和β两个亚基的开放阅读密码框外，还存在两个潜在的开放阅读密码框，但这两个密码框的意义还不清楚．比较了该藻蓝蛋白氨基酸序列和来自于其他藻类的藻蓝蛋白氨基酸序列的同源性以及藻蓝蛋白α和β两个亚基之间氨基酸序列的同源性，总的来说其同源性在45．9％．99％之间，α和β两个亚基氨基酸序列同源性为27．1％．藻蓝蛋白包含许多疏水性氨基酸，这些疏水性氨基酸在藻胆蛋白的聚集过程中起着极为重要的作用．分析表明编码藻蓝蛋白α和β两个亚基基因的密码子显示出非对称性．     

一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达

提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET鄄30a( )后相连接,构建重组表达载体pET鄄clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS鄄PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右。该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。     

鸡白细胞介素18全长基因的克隆、表达及分子进化分析

根据鸡白细胞介素18（IL-18）cDNA基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因（Genbank accession,AY628648）。扩增片段全长591bp,共编码197个氨基酸的前体蛋白,其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98．99％。只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失,分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在Ecoli中得到表达,获得45kD的GST-IL-18融合蛋白。经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达,并对其分子进化进行了分析。为深入研究其功能奠定了基础。     

厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1在大肠杆菌中的表达

厌氧真菌能够产生高比活力的纤维素酶,但由于对厌氧环境的生产条件要求严格,生长速度缓慢,并不适合规模生产。本研究将厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)连接,得到重组质粒pET-28a(+)-af1。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,重组质粒转化后获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-af1。采用SDS-PAGE蛋白电泳对重组大肠杆菌的表达产物进行分析,在40 kDa附近得到与目的基因af1表达蛋白理论值相当的明显条带。AF1酶蛋白的最适pH为6.0,最适温度为45°C。重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验结果显示:诱导培养18 h时,内切型-β-葡聚糖酶(CMC酶)活力可达410 U/mL。该项研究工作为进一步构建内切型-β-葡聚糖酶高产菌株奠定了良好的基础。     

SV40早期启动子中原核增强子样序列的初步研究

萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2可在原核细胞中高效表达。该载体中含有SV40早期启动子及荧光素酶基因cDNA5'端总长共758bp的DNA碱基序列，经计算机分析发现，在SV40早期启动子中含有SV40基因组HindⅢB片断中一段长为49bp的DNA序列，且荧光素酶基因cDNA编码区的5'端含有一个原核细胞基因表达调控区相似序列。将pGL2中的荧光素酶基因cDNA（Luc）克隆入真核表达载体pED中，构建成pED-Luc。该载体经表达测定后，只在真核细胞中表达，在原核细胞不中表达。这说明荧光素酶基因cDNA编码区的5'端的原核细胞基因表达调控区相似序列不具表达有活性的荧光 素酶的功能。经DNA序列对比研究，认为pGL2含有的SV40基因组Hind ⅢB片段5123bp-5171bp长49bp的DNA序列可能就是Hind ⅢB片段的原核增强子功能的决定序列。     

基于动物纤维素酶基因工程的科学前沿动态可视化方法研究

为了系统、全面、准确地反映国内动物基因工程研究演进及知识结构,以CNKI为平台,采用多元统计等 可视化方法,在分时段分析国内该领域前沿热点特征的同时,增加对该研究密切相关的非热点主题的观察.结果显示:相关研究主要集中于纤维素酶产生菌的分离鉴定,纤维素基因的克隆、表达;纤维素酶基因的筛选集中于天牛、白蚁等真核生物;纤维素酶基因的研究更多集中于实际研究方法学的改进,建立宏基因组文库对瘤胃中产纤维素酶的微生物进行研究.通过精确检索,多视角科学观察,为该领域科研人员提供了科学决策参考依据.     

内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

通过分子筛层析和离子交换层析等手段,分离纯化了绿色木霉WS-71纤维素酶系中的内切型β-1,4-葡聚糖苷酶组分。通过SDS-PAGE电泳测得分子量为41.8kD,该酶组分的最佳水解温度是50℃,最适pH为4.6。酶在温度40～70℃和在pH4.0￣5.0的区间稳定。Fe3+,K+,Ca2+,Mg2+,Mn2+对酶解有促进作用,Hg2+,Cu2+,Zn2+和EDTA对酶解有不同程度的抑制作用。作用于羧甲基纤维素钠的Km值为16.78mmol/L,Vmax为5.612×10-4mol/min,Kcat为6.97S-1。     

小鼠超高硫角蛋白基因启动子的分子克隆及序列分析

根据小鼠超高硫角蛋白（UHS）基因已知DNA序列设计合成了两个特异性引物,以小鼠全血提取的总DNA为模板,PCR扩增出688bp的特异性片段,连接到pMD19T载体中获得该片段克隆p19TU。经过快速提取质粒法筛选、限制性内切酶分析证明该克隆就是UHS基因5’端的调控区序列。序列分析结果也表明该克隆片段与原基因调控序列相比具有很高的一致性。研究结果为今后制备转基因克隆动物、在毛囊细胞中特异性表达绒毛生长调控基因奠定了基础。     

人Dcp2基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用

mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式。细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动。其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用，但对其降解mRNA的详细作用机制了解甚少。到目前为止，尚没有该基因市售的抗体出现，阻碍了对该基因机理的研究。本文目的是利用PCR方法，从人的胎肝文库中克隆到Dcp2基因，制备其多克隆抗体血清。实验结果显示，通过溴化氰偶联柱子对该多克隆抗体血清经纯化得到的多克隆抗体，用于Western Blotting 试验，可以检测到该蛋白内源性的表达；用于激光共聚焦定位实验显示该内源性蛋白定位在细胞核内；此抗体同时可用于免疫沉淀实验。因此Dcp2基因和多克隆抗体的获得，为进一步研究该基因的功能创造了条件。     

商陆扩展蛋白基因PaEXP1在逆境胁迫下的表达

利用同源克隆的方法,从商陆中克隆得到扩展蛋白基因的全长cDNA序列,命名为PaEXP1(GenBank 登录号为GQ851947).PaEXP1长1128bp,含有759bp的完整开放阅读框,编码252个氨基酸,分子量27.1kD,等电点8.55.PaEXP1氨基酸序列N端含有8个半胱氨酸残基,1个组氨酸(His-Phe-Asp,HFD)域,C末端存在4个保守的色氨酸残基,具有扩展蛋白的典型结构.系统进化树分析表明,PaEXP1属于扩展蛋白的α-扩展蛋白家族.Real time-PCR结果表明,PaEXP1主要在根中表达,低温、盐、重金属和渗透胁迫均强烈地抑制其基因的表达.酵母转化实验表明,转PaEXP1可以提高酵母的平均直径,说明PaEXP1参与细胞壁的松弛扩展和细胞的增大过程.     

The Consequences of Information: Institutional Implications of Technological Change,by Jannis Kallinikos. Cheltenham,UK: Edward Elgar, 2006. $35.00 paper/$95.00 cloth. ISBN 978-1-84720-500-1 paper/978-1-84542-328-5 cloth

Abstract

The U.S. Department of Agriculture has been mandated to “acquire and diffuse among the people of the United States useful information on subjects connected with agriculture in the most general and comprehensive sense of that word. …” With this authority the department has taken advantage of continuing advances of communications and computer technologies by initiating several programs related to the electronic dissemination of agricultural information. For example, the Foreign Agricultural Service has begun testing the release of agricultural trade leads through the University of Nebraska's AGNET computer‐based network. The Agricultural Marketing Service disseminates updated market data on more than 150 farm commodities over its leased wire market news network; the system has 140 terminals linked by some 14,500 miles of leased wires. Additional projects described in the article include a pilot project to deliver market news information to farmers via public television, programs testing the electronic marketing of livestock, and the electronic mail network operated by the department's Office of Governmental and Public Affairs.     

银河亿次巨型计算机工程组织管理研究

中国巨型计算机技术是在国家高度重视、正确领导下发展起来的,是改革开放、大力协作的产物。从工程哲学的视角,分析银河亿次巨型计算机工程的决策背景,探讨其指导思想、组织机构、队伍建设、规章制度和政治工作等方面的改进与创新,对于当代中国工程创新的理论与实践,具有积极意义。     

计及碳排放的电力工业与火电行业生态效率实证分析(2001—2011)

提升生态效率是促进我国电力工业特别是火电行业节能减排与持续健康发展的主要途径。利用2001—2011年全国电力工业和火电行业的发电量、装机容量、从业人员、原料投入和SO2、CO2排放数据,采用数据包络分析方法计算整个电力工业和火电行业的生态效率,结果表明:火电为主的行业结构是影响电力工业生态效率的主要因素。将生态效率分解为经济效率和环境效率,采用Tobit回归分析方法分析电力工业与火电行业的生态效率、经济效率与环境效率之间的计量关系,结果表明:经济效率对生态效率存在负向的影响,进一步提高电力工业的经济效率将使生态效率降低;而环境效率对生态效率存在正向影响,火电行业的环境问题是影响整个电力工业生态效率的主要因素。