商陆寡肽转运蛋白基因PaOPT的cDNA全序列克隆及表达分析

从垂序商陆(Phytolacca americana)的重金属镉胁迫下商陆幼苗叶片的正反向抑制性消减杂交文库(SSH文库)中,获得商陆寡肽转运蛋白基因的EST序列.利用RACE的方法克隆到该基因的全序列cDNA(PaOPT,GenBank注册HQ647015).PaOPT基因在进化中的地位分析表明:它可能属于OPT3基因家族.利用实时荧光定量PCR的方法,分析PaOPT的组织表达特异性以及商陆种子成熟及萌发过程的表达模式.结果表明,该基因是一个在种子中特异性表达的基因,预测它对植物的生长发育有着重要的作用.     

商陆小G蛋白激活蛋白基因 PaAGAP 在逆境下表达研究

利用同源克隆和RACE方法在商陆( Phytolacca acinosa )中得到一个推测的小G蛋白ArfGTPase激活蛋白 ArfGAP (ArfGTPase activating protein) 的全长cDNA序列 PaAGAP . PaAGAP 序列编码332个氨基酸.蛋白含有保守的锌指结构域(CX2CX16CX2C类)和C2结构域.实时荧光定量PCR表明在寒、旱、盐和重金属的不同时间胁迫下,PaAGAP可以被诱导,表达量有不同程度的上调.由此推测 PaAGAP 可能是通过快速启动转录和翻译,使ARF失活,抑制植物生长素极性运输,来参与植物逆境反应的.     

商陆金属硫蛋白基因PaMT的表达分析

从商陆抑制性消减杂交文库中获得金属硫蛋白PaMT,基因全长141 bp,编码46个氨基酸,等电点和分子量分别为3.85和4.7 kD,具有12个半胱氨酸残基:具有典型的金属硫蛋白结构(CXC结构).进化树和蛋白结构分析表明它属于金属硫蛋白家族.PaMT主要在根中表达,且受重金属胁迫上调其基因表达.蛋白融合表达表明,PaMT可以提高大肠杆菌对重金属离子的耐受力.     

叶绿体中表达外源蛋白的研究进展

植物叶绿体可以作为生物反应器表达外源重组蛋白。在叶绿体中表达抗原、抗体、抗癌因子、蛋白类抗生素等药用蛋白,能够大大降低生产成本,同时更加安全,具有巨大的商业价值。经过近些年来的研究和改进,目的蛋白在叶绿体中的表达量有了很大的提高;在叶绿体中生产出来的一些药用蛋白质通过小鼠实验验证,具有高的免疫原性,为商业化生产医用蛋白奠定了基础。本文对在叶绿体中表达外源蛋白的最新研究进展进行了综述。     

中国小麦花叶病毒运动蛋白基因的克隆及其表达

应用RT-PCR技术从小麦病叶中扩增得到中国小麦花叶病毒(CWMV)的运动蛋白(MP)基因,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中得到大量表达,并以含表达产物的凝胶为抗原,免疫小鼠制备特异性抗血清,同时将MP基因重组到质粒pGBKT7中,电击转化酵母Y187菌株。Westernblot分析表明MP基因在酵母体内能以融合蛋白的形式正确表达,并具有免疫活性,可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”质粒。     

CUEDC2蛋白在乳腺癌患者中过量表达产生内分泌抗性

内分泌抗性是治疗乳腺癌的荷尔蒙疗法的最大障碍。虽然人们已经知道雌激素受体α（ER-α）低水平表达是内分泌抗性的主要诱因．但是内分泌抗性中的ER—α下游调节却仍然不为人所知。在这里,     

溶藻弧菌铁调蛋白基因的克隆、表达及其特征分析

铁为一切有机体所必需。对铁摄取与利用的调控在细菌生长和铁毒性中起重要作用。在革兰氏阴性细菌中,铁摄取调节蛋白(Fur)主管铁的代谢。溶藻弧菌是人和海洋动物共感染的一种主要病原弧菌。本研究克隆表达了溶藻弧菌的fur基因,并分析了其相关特征。该基因序列全长994 bp,其中包含450 bp的开放读码框,编码150个氨基酸残基的蛋白,推导的相对分子量为16.78 kD.在编码序列的上下游,RBS序列-、10序列-、35序列和二个潜在的转录终止子分别得到确定,但没有发现存在于大肠杆菌fur基因中的"铁盒子"。氨基酸序列的中段从G46位至D104位,为高度保守区域,其中包括含组氨酸丰富铁结合模型(H3-D-H-L-V-C-L-D-C-G)。SDS-PAGE分析表明,fur基因可在大肠杆菌中大量表达,带His-Tag的重组融和蛋白经镍亲和层析得到纯化,Western-blot分析结果显示,Fur蛋白具有免疫反应性。为进一步研究Fur蛋白的结构与功能打下基础。     

牛支原体广西分离株P48的原核表达及蛋白纯化研究

为获得牛支原体P48蛋白,以提供免疫学诊断产品及疫苗开发原材料,研究运用PCR方法扩增牛支原体广西分离株的脂蛋白P48的编码基因,构建pET32a-P48重组质粒,导入BL21感受态细胞,在诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导作用下获得P48重组蛋白并进行纯化,然后以纯化蛋白免疫小鼠,借助间接ELISA测定血清抗...     

领域本体支持下的语义查询扩展研究

人们在利用搜索引擎进行信息检索时,较少的检索词难以反映用户真正的检索意图,因此对用户输入的检索词进行扩展尤为必要。对传统的查询扩展进行了改进,通过建立领域本体,借助本体及本体的推理机制,将用户输入的检索词从直接和间接两方面扩展为语义联系的查询关键词集合,以提高信息检索质量和效率。     

关于汉语字词扩展必要性的思考

随着社会的发展,需要用语言表达的信息是巨量的。由于新的信息、技术和物品不断大量出现,表达和命名都不是一个简单的问题,需要大量合适的词汇,也需要新的字。针对这些问题,文章思考了汉语字词扩展的必要性。     

商陆属植物的花器官发

为进一步研究商陆科的系统位置提供花器官发生和发育的证据，在扫描电子显微镜下观察了商陆Phytolacca acinosa、多雄蕊商陆P. polyandra和垂序商陆P. americana的花器官发生。结果表明： 商陆属植物花被的发生均为2/5型螺旋发生。在同一个种不同的花蕾中，花被的发生有两种顺序：逆时针方向和顺时针方向。远轴侧非正中位的1枚先发生。雄蕊发生于环状分生组织。在单轮雄蕊的种中8-10枚雄蕊为近同时发生；两轮雄蕊的种8枚内轮雄蕊先发生，6-8枚外轮雄蕊随后发生，内轮雄蕊为同时发生，外轮雄蕊发生次序不规则。心皮原基也发生于环状分生组织，8-10枚心皮原基为同时发生。在后来的发育过程中，商陆的心皮发育成近离生心皮雌蕊；其他2种心皮侧壁联合发育成合生心皮雌蕊。对商陆属植物花器官发生的类型及发育形态学做了分析，结果支持商陆科在石竹目系统发育中处于原始地位的观点。     

商陆属中五基数花起源于三基数花的新证据——非洲商陆的花器官发生

运用扫描电镜和石蜡切片方法对非洲商陆Phytolacca dodecandra L′Her.的花器官发生过程及花器官各部分的位置排列进行了观察。结果表明：非洲商陆萼片5枚，以螺旋向心方式发生；没有观察到花瓣原基的发生；雄蕊为螺旋离心方式发生，前4枚雄蕊分2对出现在对萼位置，但此后发生的雄蕊的发生顺序明显区别于其他种；心皮4-5枚，与内部雄蕊互生。本文探讨了时空因素对花器官发生的影响，基于对非洲商陆花器官发生的观察，否定了“商陆属源于二轮雄蕊样式”的假说，并为商陆属中“五基数花起源于三基数花”的观点提供了新的证据。     

Effect of Resveratrol and Nicotine on PON1 Gene Expression: In Vitro Study

Dietary and lifestyle factors have been shown to have a profound effect on paraoxonase-1 (PON1) activity. Cigarette smoke has been shown to inhibit its mass and activity where as resveratrol has been shown to enhance it. We exposed hepatoma derived cell line (HepG2) to resveratrol and nicotine in varying doses and measured PON1 enzymatic activity and PON1 gene expression. In addition, total protein content of HepG2 cells was also measured. Resveratrol in a dose of 15 μmol/l or above significantly increased the PON1 enzyme activity (p > 0.001) where as nicotine in a dose of 1 μmol/l or higher significantly reduced it (p < 0.05). The resveratrol in this dose also enhanced the PON1 gene expression whereas nicotine decreased it as compared to controls. However, the protein conent of cells was not changed suggesting that they were not cytotoxic in the doses used. Till date the antioxidant vitamins have shown disappointing results against LDL oxidation and cardiovascular protection. However, the effect of resveratrol on PON1 gene expression and activity was significant, suggesting increase in PON1 activity and enhanced gene expression may be its alternative mechanism for offering protection against cardiovascular disease and may be an potential pharmacological agent which can be used for this.     

家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析

家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。     

CD4+单核细胞中HIV-1 gp120与gp160质粒的构建与表达

采用ＰＳＭＴＥ７作为质粒,进行ＨＩＶ－１ｅｎｖ基因对ＣＤ４阳性单核细胞Ｕ９３７－２的导入与表达,ｅｎｖ基因导入细胞在微量重金属镉的诱导下,激活妄动子表达ｇｐ１２０及ｇｐ１６０经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ转移显色后,可得清晰的ｅｎｖ目的的条带,此外,充式细胞仪对表达的ｇｐ１２０与ＣＤ４位点的结合作了分析,验证了该表达蛋白的结构与活性,从实验系可以观察到的表达ｇｐ１６０的ＣＤ４细胞株由于表达ｇｐ１６０而引     

极大螺旋藻藻蓝蛋白基因在巴斯德毕赤酵母X-33中表达的研究

通过PCR技术克隆了极大螺旋藻藻蓝蛋白基因，构建了克隆载体和表达载体，并将该基因导入巴斯德毕赤酵母X-33基因组，筛选了能够有效表达藻蓝蛋白基因的毕赤酵母工程菌株PC8，从而为发酵法生产藻蓝蛋白奠定了基础。