实时荧光定量PCR应用技术

实时荧光定量PCR(real- time quantitative PCR)由Higuchi等人在1992年第一次报告,是一种新兴的分子生物学技术,这项技术灵敏、简便、快速、不需使用放射性同位素.它将EB加入PCR反应体系,再通过改装的带有CCD的PCR仪检测样品的荧光强度,这不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,同时也可以对核酸分子进行精确定量.而且随着PCR技术的不断发展,使得实时荧光定量PCR日益成熟,极大的推动了分子生物学的发展,更是在疾病诊断中发挥了很重要的作用.     

实时荧光定量PCR技术在实验教学中的应用

设计了"实时荧光定量PCR分析IPTG诱导EGFP基因在大肠杆菌中的异源表达"实验,研究IPTG诱导浓度和温度对EGFP基因表达的影响。结果表明,IPTG浓度为270μmol/L、诱导温度为16℃、诱导时间为18h的条件下,EGFP mRNA的表达量最大。通过该实验的学习,使学生掌握实时荧光定量PCR的相关实验原理、技术以及实时荧光定量PCR仪的使用,培养学生的科研能力和综合素质。     

实时荧光定量PCR技术及实例分析

本文主要介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、类型和特点,并通过实例分析介绍了相对定量分析法的实际操作和数据分析。     

实时荧光定量PCR技术的操作实践

采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBR(R) Green I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验.介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性.     

荧光定量PCR技术的原理与应用

荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上建立起来的一种利用标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.它特异性强、灵敏度高、操作简便、快速高效,在疾病诊断、食品检测、环境监测以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景.在阐述荧光定量PCR技术原理的基础上,系统论述了该技术在各方面的应用.     

水样中大肠菌数定量PCR检测实验设计

为不断完善环境微生物学实验课程建设,培养学生的实际样品分析能力,设计了一套检测水样中大肠菌数的实时荧光定量PCR(pdymerase chain reaction)实验。教学实践表明,实验方案切实可行,学生完成情况良好,学生了解并践行了实时荧光定量PCR技术检测环境样品中的大肠菌数的方法,切身体会到新实验技术的简便性与灵敏性,提升了学生的学习兴趣与创新能力。     

荧光定量PCR对微小RNA的检测及应用

目的:建立一种定量、简单、快速、敏感的微小RNA(miRNA,miR)检测方法,并用其观察一些病理状态下有关miRNA的变化.方法:通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,对miRNA进行反转录,然后用相应miRNA的正反向引物对该miRNA进行定量检测,观察重复性和特异性.用此法检测了人巨细胞病毒(HCMV)对滋养细胞(HPT-8)细胞内miR-513表达水平的影响,也检测了结直肠癌组织miR-145水平.结果:用该法扩增miRNA特异性强,结果重复性好,该法检测到HCMV感染对miR-513表达的梯度效应.也发现癌组织和正常组织间miR-145的表达有明显的差异.结论:用荧光定量PCR可以对微小RNA快速有效的检测,在临床工作中可得到很好的应用.     

应用实时荧光定量PCR检测子宫内膜癌与癌旁组织中microRNA-93的差异表达状况

为分析microRNA-93在人子宫内膜癌组织和癌旁正常组织中的表达差异状况,初步探讨其在子宫内膜癌中的作用,应用实时荧光定量PCR方法检测32例子宫内膜癌及对照癌旁组织中microRNA-93的表达状况。结果表明,子宫内膜癌组织中microRNA-93的表达量高于癌旁组织（P<0.01）,可见microRNA-93可能作为癌基因参与子宫内膜癌的发生发展过程。     

中学化学定量实验

定量实验的考查一直是这几年高考的热点。定量实验的考查将会在以后的高考中不断出现 ,而且份量会更大 ,题型更富于创造性 ,对学生的能力要求更高。这不仅是素质教育的必然要求 ,也是化学这门学科特点所决定的。因此探讨定量实验问题很有必要。对于定量实验问题 ,从近几年高考的考查情况来看 ,它主要特点是阅读量大 ,信息多 ,联系生活实际密切 ,学生很难把要考查的问题与所学习过的相关的化学知识联系起来。因此处理起来感到无从下手 ,对着试题发怵。笔者认为 ,这主要还是由于学生不善于拨开“枝叶”,寻求“主干”,对定量实验问题所关联的课…     

生物学实验改进点滴

观察红墨水在茎中的运输　选用粗壮、淡绿、半透明状芹菜茎 (约 5ｃｍ长 ,可带叶 )做材料 ,按常规实验方法 ,在阳光下 10分钟 ,即可观察到实验现象。姚鑫睿(北京市十八里店中学　 10 0 0 2 3)▲观察质壁分离　取葫芦藓叶 2～ 3片 ,置载玻片水滴中 ,盖片后轻压即可观察。王旭雁(浙江省绍兴市第一中学初中部　 312 0 0 0 )▲观察血液循环　用蝌蚪 (特别是已长出后肢的蝌蚪 )的尾 ,无色素细胞干扰 ,可见动脉、静脉和毛细血管及其血细胞 (用 4 0 0Ｘ)。此材料实验后可放回自然界。郄银东、侍野(南京师范大学附属实验学校　 2 10 0 46)▲观察细胞…     

生物工程专业分子生物实验课教学改革探索

分子生物学实验在生物工程专业培养目标中定位于必修课,也是专业核心课程。该课程与生物学及生命科学密切相关,前后与其他学科的普通生物学、生物化学、分子生物学、细胞生物学等课程有密切联系。分子生物学实验课是一门承上启下的课程,是连接研究生与本科生之间的纽带。为满足现代生物工程专业培养创新型人才的需要,分子生物学实验课程的改革创新是势在必行的,能够为生物工程专业创新创业人才的培养奠定基础。     

中学生物新课程教学中研究性实验教学初探

根据实验原理、实验目的、实验步骤、教材中的某些“不许”、“不能”、“注意”以及教材内容设计一些研究性实验,从而发展学生的创新思维,激发学生的学习兴趣和参与意识,培养他们学习的自主性及发展他们的个性．     

《分子生物学实验》课程设计和实践

为了加强分子生物学实验课和全面提高分子生物学实验教学质量,探索适合师范学院分子生物学实践教学体系,从实验项目的选定、教学手段和方法、成绩的考核等多方面着手进行了探索,尝试了在教学模式和考核体系的设计和实践,取得了良好效果.     

浅谈"分子生物学实验"国家精品课程的建设

文章总结了国家精品课程“本科分子生物学实验“建设改革的经验及成果.介绍了其教学理念、完整的课程内容和体系、教学研究小组的建设及运行模式、自编教材成果、突出“研究型特色“的教学方式及配套的教学环境和制度等.     

STEAM教育在高校生物实验课的教学改革与实践

STEAM教育是跨学科整合的一种综合教育模式.该教学项目从不同的角度,将STEAM教育理念融入生物学实验教学方法的设计中,使学生在理解生物学知识的基础上,体会艺术与科学的交叉融合,体验科学实验的乐趣.不仅有助于加深理解和掌握相关的生物学知识,也能提高教学语言的艺术性,活跃学生的学习思维,激发学生的学习兴趣,增强教学效果...     

以能力培养为目标的“细胞生物学实验”教学改革

细胞生物学是当今生命科学的四个前沿学科之一,对于提高本科生在细胞水平的认知具有重大意义,细胞生物学实验课对于学生较好地掌握这门基础学科至关重要。为了提高学生的实验技能水平,培养创新意识,增强学生学习的自信心和学习兴趣,以及提升课堂教学效果,该文依据"细胞生物学实验"教学现状,从教学理念、教学方法及内容和成绩评定体系等方面对教学改革措施进行了深入探析,以期发挥实验课的实践性优势,从而提高学生的实际动手操作能力及观察分析问题的能力,培养科学、严谨的科研精神,培养创新性强的高素质人才。     

基于现代信息技术的“分子生物学实验”课程建设与实践

"分子生物学实验"作为生命科学领域基础课程,是一门实践性学科。该文通过论证,对教学内容进行更新,引进综合性实验,提升学生的综合能力;基于现代信息技术,对分子生物学实验课程教学进行了较大幅度的改革,以期取得更好的实验教学效果,提高学生运用知识的能力和科研素质。     

生物学实验中的安全教育

实验室安全是实践教学顺利开展的保障。通过新生入学安全教育、生物类实验室安全防护虚拟仿真实训、课内安全教育、责任明晰、防火演练等方式增强师生安全责任意识,培养学生临危不慌、妥善处理突发事件、及时合理地展开自救的能力。安全意识的培养不仅能确保学生实验的顺利完成,也将确保今后的工作学习顺利完成。