CALCRL基因在肺腺癌中的表达和预后研究

肺癌是当今世界上最受关注的癌症之一,其发病率逐年上升,死亡率极高。本论文将要对非小细胞癌中的肺腺癌进行研究,该类型是肺癌中发病率最高的种类,其癌细胞的浸润性强,因此常会破坏胸膜的正常组织及功能,引起胸腔积液。我所研究的CALCRL基因是一种蛋白质编码基因,属于细胞表面受体中最大的家族G-蛋白偶联受体的成员,它通过多种相关的信号通路参与调节重要的生命活动,如参与细胞增殖、细胞凋亡等。肿瘤组织是由于细胞恶性增殖与凋亡程序发生异常所造成的,而该基因表达产物具有调节细胞增殖与凋亡的功能,因此本论文将把该基因所参与的调节细胞增殖与凋亡的细胞通路作为重点展开研究。本研究主要使用TCGA、human protein atlas、Kmplotter数据库初步探讨CALCRL的在肺腺癌中的表达及其与患者生存预后的关系,研究其在肺组织中高度表达对于患者生存率的影响,该基因将有可能成为肺腺癌的靶向治疗目标或早期的诊断依据。     

细胞凋亡分子机制的研究进展

细胞凋亡（apoptosis）,又称程序性细胞死亡（programme d cell death）,是一种进化保守和遗传决定的细胞自杀,其性质为生理性。在多细胞动物 ,凋亡对正常机体的发育和自身稳定起着极其重要的作用。现已发现, 有许多疾病的发生和 发展与凋亡机制异常有关。细胞凋亡为生物医学领域中最热门的课题之一。在过去5年里对 细胞凋亡的分子机制的研究取得了突破性进展。现已证明,多种基因产物参与了细胞凋亡过 程,其中包括肿瘤坏死因子受体（TNFR）基因超家族的产物死亡受体(death receptors)、 连接蛋白(adapters)、天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspases)和Bcl2家族调节蛋白 （Bcl2 protein family regulators）等。目前对每组蛋白的成员的化学特性、基本功能 和它们的上游和下游的相互作用分子等均有了较清楚的了解。这些结果为发展以凋亡机制相 关蛋白为靶分子的治疗性细胞凋亡干预手段奠定了基础。     

神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化的研究

神经生长因子的研究是目前医学生物学研究的热点之一,其诱导瘤细胞的分化更引人注目。我们的研究发现,神经生长因子仅能诱导具有短神经突起的N型瘤细胞分化成神经元样的细胞。这些细胞均无N-myc扩增,均具有高、低亲和性神经生长因子受体。而对神经生长因子无反应的细胞系或为S型细胞,或缺少神经生长因子受体的表达,或有N-myc扩增。进一步研究发现,不同细胞类型代表着瘤细胞的不同分化方向。神经生长因子仅能诱导向神经元方向分化的细胞分化。分化的瘤细胞中,C-myc的表达明显下降,提示神经生长因子可能通过抑制C-myc的表达而促进分化。用基因重组技术,恢复瘤细胞中神经生长因子受体的表达,可部分恢复其对神经生长因子的反应。针对N-myc的反义基因调控,可促进其分化过程。对瘤细胞原位凋亡检测和细胞凋亡相关基因的研究表明:诱导分化过程中伴随着bcl-2表达的下降和瘤细胞凋亡的增加。     

手术后早期非小细胞肺癌临床护理相关性因素分析方法研究

目的:通过对早期非小细胞肺癌术后进行恢复性护理观察分析,促进早期非小细胞肺癌术后的康复。方法:以8例早期非小细胞肺癌患者为研究对象,早期非小细胞肺癌的恶化程度达到了II度和III度,在早期非小细胞肺癌术后重建修复过程中,对其进行早期非小细胞肺癌术后重建的生理指标进行跟踪测试,并通过优化护理观察和分析,促进病情好转。结果:对于复发性早期非小细胞肺癌患者,通过肺叶或袖式肺叶切除术后,进行术后重建修复性护理,肿瘤感染率大幅度下降,然后在差异性特征分析的基础上,对早期非小细胞肺癌患者术后的相关生理性指标进行观测,进行早期非小细胞肺癌患者术后护理,患者得到康复,生理指标趋于平稳,效果较好。结论:结合生理指标跟踪观察分析,通过早期非小细胞肺癌术后重建修复优化护理,促进患者康复。     

五种重组人源IL-18突变子表达质粒的构建及其在BxPC-3细胞中的表达

目的:设计获得5段hIL-18异构体,定向插入pEGFP-C1质粒形成融合基因,转染胰腺癌Bx-PC-3细胞并表达,为进一步研究改建的hIL-18蛋白功能奠定实验基础.方法:设计引物从pGEM-T-hIL-18质粒中PCR扩增得到5段不同的hIL-18片段,分别连接入pEGFP-C1载体构建不同的突变子(Mu0、Mu1、Mu2、Mu3和Mu4),转染原位胰腺癌BxPC-3细胞,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法检测转染细胞中hIL-18表达水平.结果:(1)五种重组质粒经酶切与测序证实构建成功;(2)BxPC-3细胞转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:(1)成功构建了hIL-18五种异构体的绿色荧光蛋白表达载体;(2)改建的hIL-18蛋白可与绿色荧光蛋白在BxPC-3细胞融合表达.     

荧光素酶标记人肝癌细胞的动物模型的建立

目的:利用荧光素酶基因标记的人肝癌细胞株HEPG2建立裸鼠肝原位移植动物模型。方法:裸鼠肝门静脉接种1×106个细胞使其成瘤,经活体荧光成像观察肿瘤的生长情况。结果:利用荧光索酶基因标记的人肝癌细胞HEPG2,成功建立了原位肝癌裸鼠模型。结论:利用荧光索酶基因标记的人肝癌细胞HEPG2,可建立了原位肝癌裸鼠模型。小动物活体成像可为原位肿瘤模型的建立提供了一种新的可靠的技术,为进一步研究肝癌生长转移机制和药物开发提供了新的有用工具。     

联合检测肺癌外周血CK19、MCU1基因表达在非小细胞肺癌微转移的临床应用

目的:检测肺癌患者外周血中CK19-mRNA和MUC1-mRNA的表达情况,以探讨用于诊断非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法:采用逆转录(RT-PCR)方法,分别检测有明确肿瘤病灶的25非小细胞肺癌患者,20例肺部良性疾病患者和20例健康对照者外周血中CK19-mRNA和MUC1-mRNA的表达。结果25例肺癌患者外周血中CK19-mRNA和MUC1-mRNA表达阳性率分别为44.00%和56.00%,肺部良性疾病患者中CK19-mRNA有1例表达阳性(5%),而MUC1-mRNA则全为阴性;20例健康对照者两者皆表达为阴性。肺癌组与肺部良性疾病组、健康对照组间阳性率均有显著性差异(P<0.01)。结论CK19-mRNAandMUC1-mRNA作为外周血中肺癌的两项分子检测指标,是检测肺癌患者外周血微转移的较好标志物,具有一定的临床应用价值,值得进一步扩大样本研究及随访。     

胃癌耐药分子机制研究取得突破性进展--中国科学院北京基因组研究所“百人计划”赵永良研究员创新成果

当前化疗（以铂类药物为一线药物）是大多数胃癌病人主要的治疗手段。大量研究表明,多药耐药基因MDR1过表达是导致肿瘤细胞耐药性产生的主要原因之一,但MDR1基因激活的分子机制,特别是与胃癌细胞耐药性产生之间的相关性目前还不清楚。阐明其调控机制,对于提高胃癌临床疗效,改善病人预后具有重要的临床意义。在973计划、国家自然科学基金以及中国科学院相关项目的支持下,中国科学院北京基因组研究所精准基因组医学重点实验室赵永良研究团队以胃癌细胞为模型,在肿瘤耐药性分子机制研究中获得重要进展,发现人类解旋酶RecQL4通过促进转录因子YB1的磷酸化而调控其下游耐药基因MDR1的表达,进而促进胃癌细胞耐药性的产生。相关研究结果2016年3月在线发表于国际肿瘤学杂志Cancer Research。     

沉默EGF受体对鼻咽癌CNE2细胞周期和凋亡的影响

研究RNA干扰EGFR表达对鼻咽癌CNE2细胞的细胞周期趋势的影响.利用携带EGFR小发夹干扰RNA(small hairpin RNA shRNA)的重组表达载体,脂质体法染到CNE2细胞.流式细胞仪检测鼻咽癌CNE2细胞在EGFR沉默后在细胞各期的细胞比例和增殖指数,吉姆萨染色检测细胞的形态学变化.实验EGFR沉默后的鼻咽癌CNE2细胞周期分布发生明显的改变,与对照组和空白组对比.G0/G1和G2/M期细胞比例和凋亡率明显增加.而S期细胞比例显著降低;凋亡率显著升高.结论:靶向干扰EGFR可抑制鼻咽癌CNE2细胞增植,并诱导其凋亡.     

分子生物传感器与细胞内分子影像

分子生物传感器是由生物大分子通过基因重组或DNA合成所构成的传感器,能够实时、可视化探测活细胞及活体内关键分子事件。目前研究热度高、应用广的分子生物传感器包括分子信标(MB)、共振能量转移系统(荧光共振能量转移和生物发光共振能量转移)和分子荧光互补系统(如双分子荧光互补、三分子荧光互补等)。文章介绍了这几类分子生物传感器的原理和特点,重点强调了它们在活细胞分子影像学中的运用,如:研究细胞内蛋白之间的相互作用,探索生物大分子在细胞中的定位、运动和动力学等。此外,还讨论了分子生物传感器的局限性和面临的挑战,并展望了未来发展方向。"眼见为实",分子生物传感器在这方面发挥独特的作用,它使我们前所未有地深入到细胞内部去观察生物分子事件乃至生物学过程,从而解答更多的生物学难题。     

CD44与乳腺癌的相关研究进展

细胞粘附因子CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白,它能将信号从细胞表面受体传导至细胞核,介导相关因子的转录活化,从而影响细胞的增殖、凋亡与癌变等多种生物学反应;CD44+/CD24-/LOW蛋白是指表达CD4 4基因,不表达或低表达CD24基因的细胞表面糖蛋白,它是乳腺癌干细胞表面标志物。CD44、CD44+/CD24-/LOW与乳腺癌复发转移相关,下调CD44或CD44+/CD24-/LOW可以有效降低乳腺癌细胞增殖侵润转移能力。     

MIF通过PI3K/AKT通路对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移的影响研究

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是否通过PI3K/AKT通路对肺腺癌A549细胞的增殖、凋亡、迁移产生影响。方法:免疫组织化学技术检测MIF抗体在肺腺癌癌组织和癌旁组织中的表达情况,DEME完全培养基培养肺腺癌A549细胞株作为对照组,加入不同浓度人重组巨噬细胞移动抑制因子(rh MIF)和PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002预处理作为实验组,应用MTT(噻唑蓝比色法)观察A549细胞株的增殖情况,(2) FCM(流式细胞仪技术)检测A549细胞株凋亡情况(3) Western-Blot测定A549细胞株PI3K、p AKT及相关抗凋亡抗体p53、Bcl-2蛋白表达情况。结果:(1)免疫组化发现MIF在肺腺癌癌组织中高表达,且高表达率与癌旁组织有显著差异(2)经rh MIF刺激后PI3K、p AKT、p53、Bcl-2表达更明显,迁移更显著;(3) rh MIF对A549细胞株作用均呈浓度-时间依赖性,rh MIF在50 ng/ml 24 h对A549细胞增殖率最高,LY294002在25μmol/L 24 h对A549细胞抑制作用最显著。结论:MIF在肺腺癌中高表达,肺腺癌细胞中加入rh MIF,rh MIF刺激A549细胞株增殖、迁移,抑制凋亡,与LY294002共同作用下,A549细胞株增殖率和迁移力下降、凋亡率升高,表明MIF有可能通过PI3K/AKT通路对肺腺癌细胞的增殖、凋亡和迁移产生影响。     

细胞凋亡初探

细胞凋亡是近年来人们较为关注的一个研究课题,了解细胞凋亡的发生机制和发生过程,以及控制和诱导细胞凋亡的相关基因及底物,对于治愈人体组织器官退化和癌症都有着极其重要的意义。     

三唑磷对斑马鱼HULC基因的表达调控

HULC(highly upregulated in liver cancer)属lncRNA(长链非编码RNA),调控细胞自噬,在肝癌组织中高度上调表达。本文利用生物信息学数据库和实时荧光定量PCR技术对三唑磷处理后斑马鱼中lncRNA HULC调控机制进行研究,进一步了解lncRNA-miRNA-mRNA的调控网络,并且深入了解农药三唑磷对斑马鱼的环境毒理影响。基于芯片技术检测HTT、HOTTIP、NEAT1、NPPA和HULC的表达情况,三唑磷处理斑马鱼前后HTT表达无差异,HOTTIP表达略微下调,NEAT1、NPPA和HULC出现明显上调表达。软件RegRNA 2.0预测出dre-miR-2185*等7条miRNA与HULC发生相互作用,进一步预测其调控靶基因,构建调控网络。荧光定量PCR结果表明,HULC表达上调1.5倍、dre-miR-2185*表达下调6.63倍和离子型谷氨酸受体基因gria1a表达下调2倍。同时三者都可作为生物标志物来监测化学物质对环境和生物体的影响,以期对肝癌等相关疾病提供新的治疗方法。     

细胞凋亡的线粒体途径研究进展

细胞凋亡是机体细胞的一种程序性死亡,它在维持细胞动态平衡中具有十分重要的作用。细胞凋亡存在内在和外在两种途径,线粒体作为细胞凋亡调控的活动中心,在细胞凋亡内在途径中起着重要作用。细胞凋亡受到一系列相关基因的严格调控,这是近年来生命科学领域的研究热点,已经取得突破性进展。通过查阅近期国内外文献,以线粒体膜为切入点,对细胞凋亡过程中线粒体膜相关诱变因子的变化进行综述。     

黑果枸杞黑白果中花青素合成7个关键结构基因的表达模式

为分析黑果枸杞黑白浆果两者体内与花青素合成有关的7个关键结构基因(CHS、CHI、F3'5'H、F3H、F3'H、DFR和ANS)的表达模式,本实验测定了黑白浆果各发育时期(S1～S2)的花青素含量,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术测定并分析了黑白浆果不同发育时期各部位中花青素合成关键结构基因的表达.结果表...     

TCTE3mRNA在人肝癌细胞株中的表达特征

探讨TCTE3 mRNA在人肝癌细胞株中的表达水平及意义。采用实时荧光定量PCR技术分别检测TCTE3基因在常规培养或缺氧诱导（CoCl2为诱导剂）的人肝癌细胞株中的表达情况。TCTE3 mRNA在常规培养的人正常肝细胞株L02,肝癌细胞株Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和QGY-7701中不表达或极低表达;但经缺氧诱导后,SMMC-7721细胞中的TCTE3 mRNA表达量逐渐升高,4h达到最大,随后逐渐降低,与HIF1a mRNA表达的曲线变化有一定相似之处,只是这种变化的时间要早于HIF1a基因。在缺氧状态下肝癌细胞TCTE3 mRNA表达增加,且这种上调表达可能对HIF1a mRNA的表达有一定的促进作用。     

三元能量对人肝癌细胞凋亡的生物学效应

以人的肝癌细胞为材料,从细胞水平到分子水平,以现代先进科学技术综合研究三元能量对人的肝癌细胞凋亡的影响。实验组与对照组比较,培养态的细胞变化、ＨＥ染色镜检,荧光染色,胎盼蓝染色,细胞存活率,ＭＴＴ法细胞存活率等都表明,实验组的凋亡细胞特征明显,提出三元能量对治疗癌症有一定疗效。     

我国肺癌检测技术获突破性进展

经3年多临床攻关,复旦大学附属肿瘤医院陈海泉教授领衔的课题组,发明了一种能快速准确检测携带"ALK融合基因"的肺癌分子诊断技术,可为患者节省巨额检测费用,并为晚期肺癌患者选择"有特效的"分子靶向药物进行个性化治疗赢得宝贵时间。相关论文已发表在最近出版的国际著名肿瘤学期刊《临床癌症研究》上。     

柽柳NAC7基因的表达及功能分析

为了论证柽柳NAC7基因的抗逆性功能,利用实时定量PCR技术分析,在ABA、盐、旱条件下柽柳NAC7基因在根、叶中的表达情况。并且成功构建了植物过表达载体pROK2-ThNAC7和抑制表达载体pFGC5941-ThNAC7。通过瞬时转化技术获得过表达、RNAi抑制表达的柽柳种子苗,将pBI121-EHA105瞬时侵染的对照柽柳种子苗作为对照,对这3种幼苗施加盐、旱及ABA等处理,并测定逆境相关的生理指标,包括失水率、相对电导率、叶绿素含量和丙二醛含量等。结果表明:过表达thNAC7转基因柽柳在各种胁迫下的抗逆性均要高于对照,说明与抗逆相关,能够提高植物的抗逆能力。