一种小鼠原代肝细胞的分离与培养方法

目的:探索一种高效、稳定的小鼠原代肝细胞分离方法,并延长其体外培养的时间。方法:取成年雄性C57BL/6小鼠,以含双抗的D-Hanks灌流液经肝门静脉充分灌注肝脏,然后以0.2 mg/mL的Ⅳ型胶原酶灌注消化,接着过滤、离心、洗涤,获得小鼠原代肝细胞。通过台盼蓝染色检验小鼠原代肝细胞活率,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态变化,糖原染色鉴定细胞纯度,添加ITS-X和HGF细胞因子延长小鼠原代肝细胞的体外培养时间。结果:平均每只成年小鼠肝脏可提取获得原代肝细胞约2×107个,台盼蓝染色显示细胞活率均超过95%,糖原染色结果表明此方法获得的原代肝细胞纯度高于95%,通过添加HGF和ITS-X两种细胞因子能够有效地延长肝细胞形态的体外维持时间。结论:本实验在原有小鼠原代肝细胞两步灌流分离法和培养的基础上,经过优化,成功建立了一种高效、稳定的小鼠原代肝细胞分离和培养方法,为肝脏的体外研究提供了技术保障。     

大鼠骨骼肌细胞的原代培养及鉴定

探讨体外条件下骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化及鉴定的方法。取新生3～5 d的SD大鼠处死清洗后,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶联合酶消化30 min,细胞悬液过滤离心后,用含有10%胎牛血清的培养液悬浮细胞,1 h后重新接种,重新接种2次,最后接种于L-多聚赖氨酸铺底的培养瓶中;采用骨骼肌肌动蛋白(α-sarcometric actin)免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞。肌卫星细胞培养5～6 h后开始贴壁,48 h完全贴壁,之后细胞进一步增多并相互融合,逐渐按一定方向呈有序排列。当细胞增殖至70%密度时,有融合趋势,加入分化培养基培养48 h后可形成多核的肌管,行免疫荧光染色,90%以上的细胞α-sarcometric actin染色阳性,证明培养的为骨骼肌细胞。     

人乳腺癌细胞原代培养体外药敏试验及Her-2、TopoⅡ的表达

目的:研究4种化疗药物对原代培养人乳腺癌细胞的敏感性,结合Her-2、TopoⅡ免疫组化表达结果,分析药敏结果与表达的相关性及临床意义。方法:利用CCK8法检测4种化疗药物对乳腺癌原代细胞生长的影响,免疫组织化学方法检测细胞中Her-2、TopoⅡ的表达情况。结果:⑴4种化疗药物在不同浓度下对乳腺癌细胞的抑制率排序为:紫杉醇>长春瑞滨>阿霉素>卡铂,紫杉醇剂量与疗效之间有量效关系,而阿霉素、长春瑞滨和卡铂则不存在量效关系;⑵Her-2、TopoⅡ阳性表达率分别为25.4%和53.9%;⑶紫杉醇、长春瑞滨、阿霉素对Her-2阳性、TopoⅡ阳性细胞的生长有显著的抑制作用(P<0.05),而卡铂则无显著性抑制作用。结论:原代培养肿瘤细胞的体外药敏试验对临床肿瘤的化疗有很强的指导作用,Her-2、TopoⅡ可作为判断预后很好参考指标。     

大鼠睾丸支持细胞的分离培养及鉴定

目的:通过改进大鼠睾丸支持细胞的分离方法,获得高纯度支持细胞。方法:选用18~22日龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,去除睾丸被膜、剪碎组织块,采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶单次消化,分别在37℃水浴震荡消化15min、10min,经100目细胞筛过滤收集细胞,置于37℃、5%CO2培养箱中进行培养,24h后大多数细胞完全贴壁,观察细胞生长,待长满培养瓶80%进行传代培养。显微观察不同时间段、不同代睾丸支持细胞的形态,采用免疫荧光方法对睾丸支持细胞进行鉴定。结果:显微观察可见分离培养的支持细胞胞质呈不规则的多处突起,细胞核呈圆形或椭圆形,细胞之间交织成网状;免疫荧光Vimentin特异性表达鉴定显示,所分离培养的细胞为睾丸支持细胞,经显微镜下计数其纯度达95%以上。结论:缩短两步酶消化时间,培养24h后用预冷磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗换培养液,连续传代培养至第三代,此方法简化了分离培养支持细胞步骤,同时提高了支持细胞的纯度和细胞数量。     

大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的培养及鉴定

目的：探讨SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞体外培养方法的可行性.方法：分离并消化大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,采用胶原酶消化组织块方法,并进行免疫组化鉴定.结果：大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形,呈长轴平行排列,易体外贴壁,经消化酶消化后,24h内贴壁的细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达较其它时段贴壁的细胞高.结论：大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞原代培养可行,对研究ED病治疗机制有重要意义.     

大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法建立及鉴定

目的:纯化和鉴定体外培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞.方法:取1~3天新生大鼠大脑皮层细胞进行体外培养,通过差速贴壁和传代去除成纤维细胞和神经元等,采用免疫组化法检测星形胶质细胞特异性蛋白—胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定星形胶质细胞.结果:培养的细胞具有典型的星形胶质细胞形态且生长旺盛,第3代95%以上为星形胶质细胞,特异性抗原GFAP表达阳性.结论:该方法操作简单,可靠,是一种有效的新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法.     

大鼠皮层星形胶质细胞体外培养的对比研究

比较3种不同培养星形胶质细胞的方法,以获得高纯度星形胶质细胞,为体外研究其生物学功能奠定基础.取新生SD大鼠的皮层区,应用原代培养法、差速贴壁培养法和震荡法,通过形态学观察、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色法和台盼蓝染色法,对比分析3种不同培养方法所获得星形胶质细胞的纯度和活性.差速贴壁组星形胶质细胞纯度（98.4%）明显高于原代培养组和震荡组.经台盼蓝染色发现,各组细胞活细胞率均大于95%,表明3种培养方法对于细胞活性没有显著影响.差速贴壁培养法培养星形胶质细胞的方法具有简便可行,纯度高的优点,可作为星形胶质细胞体外培养的良好模型.     

高等职业教育的职业技能培养与鉴定

一、职业技能培养是素质教育的重要组成部分１ 职业技能培养是高等院校素质教育的组成部分。从高等教育的角度看 ,人才素质应包括四个方面 :思想道德素质 ,科学文化素质、业务技能素质、身体心理素质。其中思想道德素质是灵魂、科学文化素质是基础、业务技能素质是条件、身体心理素质是载体 ,这四个方面相辅相成 ,统一构成人才的基本素质。目前 ,随着我国改革形势的不断深入 ,人才市场的需求有了明显的变化 ,学历加技能成了用人单位追求的综合指标。为适应人才需求 ,各校相继把职业技能培养纳入议事日程 ,这有力地推动了高等院校储备知识、…     

添加不同类型脂肪酸对罗非鱼肝脏原代细胞内脂类代谢相关基因表达的影响

初步探索了罗非鱼肝脏原代细胞分离、纯化的方法,并在此基础上研究培养基中外源添加不同饱和度的脂肪酸(16:0,18:1 n-9,18:2n-6,20:4 n-6,20:5 n-3和22:6 n-3)对其与脂类代谢相关基因(LPL、MDH和PPARα)mRNA表达的影响.结果表明:60 g,2 min,1次和30 g,2 min,2次的离心条件获得较高细胞产量及纯度;随脂肪酸不饱和程度的增加LPL和PPARαmRNA表达均呈现明显的上升趋势,而MDH则波动性较大.     

初中生数学思维的鉴定与培养

良好的数学思维能力是学生学好数学的一个必备要素,近段时间以来,数学思维成为了当代数学教师的一个重要教学内容,特别是在新课程改革以后,培养和提高学生数学思维能力的重要性体现得更加明显。在初中数学教学阶段,是培养学生数学思维的关键性阶段,初中生处于好奇心和学习性极强的生理时期,教师应该把握时机,在充分认识数学思维与数学教学的关系的基础上,对学生的数学思维发展状况进行科学的鉴定,在结合一系列的方法和措施来对初中生的数学思维进行锻炼和培养。     

职业技能鉴定视阈下文秘专业学生技能的培养

针对社会岗位对文秘专业学生考秘书证的要求,提出教学应以技能培训为主,既要抓好理论教学,又要重视实践操作。     

转某因小鼠库的建立与优化

目的:通过对转基因小鼠基因型的鉴定及配种繁育,得到一定数量带有目的基因的小鼠,建立转基因小鼠库.方法:利用PCR法对小鼠基因型进行鉴定,采用经典育种与PCR相结合的方法对转基因小鼠进行繁育.结果:Fmmr1/PCP-cre双转小鼠共产仔14窝,总计91只,阳性有70只,阳性率为76.92％;Fmr1/PV-ere双转小鼠共产仔21窝,总计164只,阳性有126只,阳性率为76.83％;chat-ere小鼠共产仔19窝,总计102只,阳性有40只,阳性率为39.22％;Ai35小鼠共产仔11窝,总计75只,阳性有29只,阳性率为38.67％;Ai14小鼠共产仔7窝,总计40只,阳性有26只,阳性率为65.00％.结论:成功繁育鉴定出实验所需数量的阳性转基因小鼠,并对转基因小鼠的鉴定及繁育建系方式进行了优化,建立了转基因小鼠库,为深入研究小鼠的生理性功能提供了良好的实验动物模型.     

少数民族学生对寄生虫病原的辨别、鉴定及动手能力的兴趣培养

动物寄生虫作为一类病原体寄生于宿主动物体内外,导致畜禽发病,故《兽医寄生虫学》与临床实践相结合,对培养学生兽医临床诊疗技能方面具有重要作用。笔者通过抽取不同年级共40人(少数民族学生),对其开展了寄生虫病原认识、标本制作及鉴定的兴趣培养,经过综合考察,取得了良好的试验效果;并通过问卷调查的形式了解兴趣培养的同年级学生与未经培训的学生对比,前者的病原辨别、鉴定能力、操作综合能力均明显高于后者。     

阻滞和非阻滞品系小鼠早胚体外培养的比较

收集阻滞品系昆明(Kunming,KM)小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠受精卵,以及KM小鼠和B6C3F1小鼠交叉交配所得受精卵,进行体外培养,研究阻滞品系小鼠早胚体外发育阻滞原因。结果表明,卵母细胞内在因素对子一代早胚体外发育的能力影响较大,即体外培养是否发生2-细胞阻滞与卵母细胞有关。     

高中语文核心素养的实质及培养路径研究

随着教育理念的发展和提升,我国人才培养方向 发生了根本的改变,根据国家发展需求培养高素质人才已经成 为现代化教育的出发点和落脚点。高中语文核心素养的提升 需要对核心素养有清晰的认知,需要课堂教学与课下学习的配 合,需要教师和学生的共同努力。     

高中语文核心素养的实质内涵及培养路径

语文是一门比较基础的学科,与其他学科联系最为紧密,为其他学科的学习奠定了良好的基础。在语文课堂上,教师要明确语文核心素养的基本概念,了解到核心素养的具体特征,明确学生需要掌握的基本能力,创设出一系列全新的教学策略,使学生掌握课堂教学的重点内容,形成较高的语文核心素养,从而提高课堂教学效率,增强学生的综合素质。     

四鳃鲈内脏组织细胞原代培养

采用动物组织块培养法对四鳃鲈（Trachidermus fasciatus）内脏组织进行离体培养研究.对培养条件进行了优化,比较了不同培养基（DMEM、M199）、不同生长条件（加生长因子、不加生长因子）和不同培养条件（CO2培养箱、恒温培养箱）下离体培养细胞的生长情况.结果显示：内脏组织接种后3～5 h,细胞迁移伸展,6 d后生长细胞集群汇合,来源于不同组织的再生细胞呈现不同的形态.在M199培养基中添加青链霉素抗生素（0.28%）及10%小牛血清和1%碱性成纤维生长因子、控温27℃、pH值为7.2～7.4并在CO2（5%）培养箱中培养的内脏细胞生长最快.不同来源的组织培养中肝细胞在离体培养中细胞增殖生长速度最快.     

《精细化工产品分析及鉴定》实验中培养学生综合能力的实践探索

通过《精细化工产品分析及鉴定》实验的教学内容、教学思想、实验操作、实验条件等方面的教学实践,探讨了精细化工产品分析及鉴定实验对学生综合能力培养的实施效果。结果表明,系统化教学思想、整合教学资源、严格实验操作规范等措施的实施,充分调动了学生实验积极性、主动性,培养了学生严谨的科学态度,并提高了学生分析问题、解决问题能力和团队合作意识等综合能力。     

浅谈档案价值鉴定的意义及方法

档案价值鉴定是档案管理的重要环节，档案的内容、来源、时效、名称等属性和社会利用需求决定档案的价值，是档案价值鉴定的基础和核心。