离子交换层析技术在多糖分离纯化中的应用

离子交换层析(Ion-exchange chromatography,简写IEC)是发展最早的层析技术之一.目前,离子交换层析已成为蛋白质分离纯化中最常用的手段,统计显示,在蛋白质的纯化方案中,使用到离子交换层析的占75%,其次是使用亲和层析和凝胶过滤层析.但同时离子交换层析在除蛋白质以外物质(如多糖、核酸)的分离纯化中也得到了一定的应用.     

乳糖诱导Pfu DNA聚合酶基因的表达及酶的纯化

利用乳糖诱导重组大肠杆菌BL21(DE3)中Pfu DNA聚合酶基因的表达。对诱导菌株起始生长量、乳糖浓度和诱导持续时间进行了优化,尝试使用JK110弱阳离子交换柱和Sephadex G-75凝胶层析柱来分离纯化Pfu DNA聚合酶,并用PCR扩增实验检测酶活性。结果表明乳糖可以有效诱导Pfu酶的表达,JK110离子交换柱有较好的纯化效果,从500 mL培养液中可以得到3×105U的酶活,比活达22,200 U/mg,结果好于IPTG诱导表达。     

头孢唑林钠中高分子杂质的检查法

目的:建立凝胶色谱法测定头孢哇林钠的聚合物的方法.方法:采用葡聚糖凝胶Sephadex G-10柱(16mm×33cm),流动相:A:0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0),B:0.01%十二烷基硫酸钠溶液.流速为1.0mol/min;检测波长为254nm,进样量为200uL.结果:头孢唑林钠在6.696～29.54mg/mL范围内,浓度与聚合物的峰面积呈良好线性关系(r=0.9986),可精确对高分子杂质峰进行定量.结论:该方法简便,准确,重现性好.     

菊芋多聚果糖产业化纯化技术的研究进展

菊芋多聚果糖具有重要的生理作用,具有广阔的市场前景,但我国在其纯化方面还存在很多不足,需要进一步的研究。本文提高了菊芋多聚果糖产品的纯度和收率,提高企业的经济效益,促进多聚果糖产业的发展。本文通过文献综述对膜分离、凝胶过滤层析、TMB、SMB和SSMB等纯化技术进行对比分析,最后认为SSMB适宜用于纯化菊芋多聚果糖的产业化生产。该技术可以有效地对菊芋多聚果糖进行高效纯化,达到国际标准,为菊芋多聚果糖的工业化生产提供了一种高效、低耗、环保的纯化技术。     

黑曲霉HYA4菌株产果胶酶酶学性质研究

对黑曲霉HYA4菌株所产果胶酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该酶反应最适温度为48℃,果胶酶最适pH值为4.8,果胶酶活力稳定的pH范围为3.0-6.0;Km值为4.33mg/mL;金属离子Ca2＋、Mg2＋对果胶酶有较强的激活作用,Ba2＋对果胶酶也有一定的激活作用,Ag＋、Mn2＋、Zn2＋、Fe3＋、K＋对果胶酶有抑制作用。由SDS-PAGE测定果胶酶的相对分子量为46000＆#177;3000Da;IEF电泳测定其等电点为4.7＆#177;0.2。     

建立测定注射用头孢孟多酯钠聚合物的方法

目的:建立注射用头孢孟多酯钠聚合物的测定方法。方法:采用葡聚糖凝胶Sephadex G-10不锈钢柱(10mm×300mm),流动相A:磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠17.10g,与磷酸二氢钠0.39g,加水使溶解成1000ml);流动相B:水;流速为0.8ml/min;检测波长为254nm;进样量为200μL;柱温为室温;对照品采用头孢孟多酯钠。结果:注射用头孢孟多酯钠在11.10~40.83mg/mL,(r=0.9999)浓度范围内与聚合物的峰面积呈良好线性关系。结论:方法简便,结果可靠,可以用于注射用头孢孟多酯钠中高分子聚合物杂质的检测。     

大蹼铃蟾皮肤白蛋白的胰蛋白酶抑制活性研究

通过离子交换层析和凝胶过滤层析,在大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤中得到其白蛋白。该蛋白有强烈抑制胰蛋白酶水解小肽底物的活性,但对其它丝氨酸蛋白酶如凝血酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶无抑制。它以1∶1摩尔比同胰蛋白酶形成稳定结合的复合物。经测定发现,该蛋白对温度、pH值及还原剂二硫苏糖醇的耐受性较强,三种因素对其胰蛋白酶抑制活性影响不大。说明大蹼铃蟾皮肤白蛋白具有稳定的胰蛋白酶抑制活性,可能在大蹼铃蟾防御天敌捕食的过程中发挥重要作用。     

Apocynaceae系细胞尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的纯化和表征

经 4步分离纯化的Apocynaceae植物培养细胞尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)的比活为 2 0 4 9U mg ,与细胞粗提液相比 ,活力提高 97倍 ,活力回收率为 2 1 %,可直接用于尿苷二磷酸葡萄糖 (UDPG)的合成 ,并且储存稳定性很好 .UGPase的最适pH值为 7 2 ,UGPase的最适温度为 37℃左右 .Mg2 是UGPase发挥活力所必需的 .高浓度UTP和Glc 6 P均能抑制UGPase的活力     

陕北产蝎毒的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

陕北蝎资源丰富,但迄今关于该地区蝎子的毒液组分研究仍较为滞后。在Sephadex G50柱层析分离体系基础上,利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电(SDS-PAGE)分析了蝎毒的蛋白组分。电泳分析显示,采用10%浓度分离胶对分离粗毒较好,而采用15%浓度分离胶对Sephadex G50分离组分效果较好;蝎粗毒中的蛋白组分分子量较为接近,它们的分子量小于20.1KDa;G50F1峰和G50F2峰蛋白分子量都小于6.5KDa。本研究为陕北产蝎毒蛋白组分的分离纯化和生理生化研究奠定了良好的基础。     

层析技术在生物制药中的应用

层析法可分为吸附层析、聚酰胺薄膜层析、气相层析、分配层析技术、纸上分配层析、薄层层析分离技术、高压液体层析。层析技术在生物制药中主要应用于药物的鉴定、纯度检查、药物的降解率和降解产物的测定、分离供毒性试验的物质。本文对层析技术在生物制药中的应用进行综述。     

果胶酶复合酶制剂的研制

目前,随着饮料工业的发展,果胶酶制剂的研究、生产和应用日益为人们所重视。但国内市场出售的果胶酶制剂标准不一,色泽欠佳,活力不高。影响了生产的发展。我们采用固体发酵技术,通过有机溶剂沉淀的方法,已研制出果胶酶复合酶固体制剂。该酶制剂不仅含有高酶活的果胶酶,纤维素酶活力亦不低,应用效果也优于单纯的果胶酶。其研制过程如下: 1.发酵将筛选到的黑曲酶菌种AS.cpu 4接种至麸皮固体培养基上,该培养基尚含有无机氮源和产酶诱导物。于28℃通气条件下培养48h后,以10倍体积水浸泡2h。由于黑曲酶所产果胶酶等酶成分均为胞外酶,因此过滤浸泡物后,酶成分进入滤液。 2.沉淀所得滤液冷冻待用。将2.5倍体积的冷酒精缓慢加入滤液中,边加边搅。可以     

美国红鱼免疫球蛋白的分离纯化

对灿烂弧菌灭活疫苗接种后的美国红鱼提取血清,采用硫酸铵沉淀和SephadexG-200凝胶层析结合的方法分离纯化出美国红鱼血清免疫球蛋白,并且通过SDS-PAGE对纯化蛋白的部分特性进行分析。结果表明,通过硫酸铵沉淀法可以沉淀血清中大部分的蛋白,电泳条带比较丰富,但仍然含有较多的杂蛋白,经过SephadexG-200凝胶柱层析方法分离,获得纯度较高的免疫球蛋白,经β—巯基乙醇处理后解离形成重链和轻链两个亚单位,分子量分别为69.2 kDa,29.5 kDa,表明美国红鱼血清IgM的分子量与硬骨鱼IgM的分子量范围（H链60~81kDa,L链20-30kDa）是一致。     

胶原酶浓度及消化时间对屠宰猪胰岛分离纯化的影响

本试验为确定分离猪胰岛的最佳胶原酶浓度,以屠宰猪胰腺为试验材料进行猪胰岛分离纯化研究。结果表明,猪胰岛获取量与不同浓度胶原酶1.0 mg/ml、1.5 mg/ml、2.0 mg/ml各组间均差异显著(P0.05);在相同的消化时间(15 min)条件下,猪胰岛分离1758±125个/g,纯化后1485±119个/g,纯度为84%存活率为92%。由此可知,屠宰猪胰岛分离的最佳胶原酶浓度为1.5mg/ml,而最佳消耗时间为15 min。     

静脉注射用人SARS特异性免疫球蛋白的研制

目的研究适合的蛋白纯化和病毒灭活工艺,制备静脉注射用人SARS特异性免疫球蛋白.方法采用低温乙醇和离子交换层析相结合的工艺进行分离纯化,在分离纯化过程中对血浆进行S/D病毒灭活,对原液进行纳米膜过滤去除病毒.对产品的SARS抗体效价、灭活剂残余含量进行检测,对血浆S/D病毒灭活工艺进行验证.结果产品的各项质量指标符合静脉注射要求,产品中SARS抗体效价经ELISA法检测为183,产品中灭活剂TNBP和Triton-X100的残余含量均＜5.0 ug/ml.病毒灭活方法经验证可以有效灭活指示病毒.结论本蛋白纯化工艺可操作性强、产品质量稳定,为从突发病毒性疾病患者康复期血浆中小规模提取特异性免疫球蛋白提供了一种适合的方法.     

辛伐他汀凝胶骨架缓释片制备工艺与体外释放考察

本实验研究辛伐他汀凝胶骨架缓释片的制备方法并建立反相高效液相色谱法测定辛伐他汀凝胶骨架缓释片的体外释放度。方法:采用安捷伦十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(218 mm×4.6mm,5μm),甲醇-水-磷酸(80:20:0.1),检测波长为238nm,流速为1.0ml/min,柱温为25℃。辛伐他汀在10～210mg.mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.99993)。结论:本制剂稳定、可靠,测定方法简便、准确。     

树莓中超氧化物歧化酶(SOD)提取及不同条件下酶活力探究

由冷冻树莓制得粗酶液,测树莓中超氧化物歧化酶(SOD)的活力48.78U/g,其含量228.544μg/g鲜重。通过分别以新鲜的树莓、解冻1h树莓和加入浓度为10-6mol/L的抗坏血酸浸泡1min的树莓果实来探究酶活力。结果表明:相对条件下,冷冻树莓有最大的超氧化物歧化酶(SOD)活力。     

注射用氢化可的松琥珀酸钠细菌内毒素检查方法学验证

目的对注射用氢化可的松琥珀酸钠细菌内毒素的检查方法进行验证。方法采用《中国药典》2010年版二部附录ⅪE的凝胶法。结果注射用氢化可的松琥珀酸钠在稀释至浓度为0.83mg/ml时对试验无干扰。结论注射用氢化可的松琥珀酸钠在稀释至浓度为0.83mg/ml时,采用凝胶法可行,可用于此品种的细菌内毒素检查。     

岩溶地下河水中NO_3~-浓度变化特征研究

环境中的氮素既是生命元素,也是环境的主要污染因子。岩溶地区土层浅薄,缺少天然的防渗和过滤层,地表污染物很容易通过落水洞等地表岩溶形态进入含水层,因此岩溶水易受污染。近年来,随着现代农业和工业的不断发展,大量化肥、农家肥的使用,化粪池以及工业污水的任意排放,致使岩溶区地下水硝酸盐污染问题日益严重。文章以岩溶区典型地下河-官村地下河为例,分析检测不同月份地下河水中的NO3-浓度。实验结果显示,地下河水中的NO3-季节性变化明显,NO3-浓度在9月份(秋季)达到最大值3.55mg/L,最低浓度值出现在3月份(春季)1.23mg/L,极差值为2.32mg/L,秋季是春季浓度的2.88倍。     

概述生物制药中不同类型的亲和层析及其应用

本文介绍了亲和层析的作用机理,并根据配体的类型,对不同类型的亲和层析进行描述,有凝集素亲和层析、硼酸盐亲和层析、免疫亲和色层析、金属螯合层析和染料配体亲和层析。     

内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

通过分子筛层析和离子交换层析等手段,分离纯化了绿色木霉WS-71纤维素酶系中的内切型β-1,4-葡聚糖苷酶组分。通过SDS-PAGE电泳测得分子量为41.8kD,该酶组分的最佳水解温度是50℃,最适pH为4.6。酶在温度40～70℃和在pH4.0￣5.0的区间稳定。Fe3+,K+,Ca2+,Mg2+,Mn2+对酶解有促进作用,Hg2+,Cu2+,Zn2+和EDTA对酶解有不同程度的抑制作用。作用于羧甲基纤维素钠的Km值为16.78mmol/L,Vmax为5.612×10-4mol/min,Kcat为6.97S-1。