一次性使用无菌注射器细胞毒性检测

本文研究一次性使用无菌注射器的细胞毒性.方法:参考GB/T14233.2-2005和ISO10993-5的试验原则,将一次性使用无菌注射器浸提液与L929细胞培养接触,通过倒置显微镜观察其形态,采用MTT(四唑盐)法量化细胞毒性,计算相对增殖率(RGR),对一次性使用无菌注射器进行了细胞毒性试验.结果:部分一次性使用注射器对L929细胞有一定细胞毒性.结论:为客观评价一次性使用无菌注射器的产品质量,保证产品安全提供参考.     

TCTE3mRNA在人肝癌细胞株中的表达特征

探讨TCTE3 mRNA在人肝癌细胞株中的表达水平及意义。采用实时荧光定量PCR技术分别检测TCTE3基因在常规培养或缺氧诱导（CoCl2为诱导剂）的人肝癌细胞株中的表达情况。TCTE3 mRNA在常规培养的人正常肝细胞株L02,肝癌细胞株Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和QGY-7701中不表达或极低表达;但经缺氧诱导后,SMMC-7721细胞中的TCTE3 mRNA表达量逐渐升高,4h达到最大,随后逐渐降低,与HIF1a mRNA表达的曲线变化有一定相似之处,只是这种变化的时间要早于HIF1a基因。在缺氧状态下肝癌细胞TCTE3 mRNA表达增加,且这种上调表达可能对HIF1a mRNA的表达有一定的促进作用。     

纳米氧化锌对人肺腺癌细胞A549的毒性

探讨纳米氧化锌（ZnO）对体外培养的人肺腺癌细胞A549的生物学效应。使用原子力显微镜（AFM）、透射电镜（TEM）和X射线衍射仪（XRD）研究纳米ZnO颗粒物的理化性质。然后,使用0mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、5mmol/L、10mmol/L的纳米ZnO处理体外培养的人肺腺癌A549细胞,MTT 法测定细胞生长活性。并且测定1mmol/L 纳米ZnO染毒24h后细胞培养液上清中,乳酸脱氢酶（LDH）和胞内的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量。使用透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。荧光染色检测细胞产生活性氧（ROS）的生成。实验所用的ZnO纳米颗粒为长75 nm、直径20nm的针状纤锌矿晶体。细胞实验结果表明,纳米ZnO颗粒对A549细胞的生长活性具有明显的抑制作用,存在剂量－效应关系。培养液上清中LDH活性显著升高（P < 0.05）,胞内CAT活性显著下降、MDA含量显著升高（P < 0.01）,但SOD活性下降不明显。荧光染色检测发现染毒后A549细胞出现细胞凋亡,而且细胞内ROS的生成与纳米ZnO存在剂量－效应关系。结论是纳米氧化锌诱导人肺腺癌A549细胞产生活性氧,引发细胞凋亡,并产生细胞毒性。     

消化性溃疡患者根除HP后发生胃食管反流病的研究

目的:观察消化性溃疡患者根除幽门螺杆菌(HP)后发生胃食管反流病的情况,探讨HP与胃食管反流病(GERD的关系。方法:将60例HP阳性消化性溃疡患者随机分为观察组和对照组,各30例,观察两组患者总体疗效,GerdQ评分,HP根除情况及两组患者治疗前、后及停药3个月胃食管反流发生情况。结果:对照组总有效率明显低于观察组(P0.05);对照组GerdQ评分明显低于观察组(t=2.243,P0.05);观察组HP根除率高于对照组(χ2=7.2,P0.05);治疗后,在消化性溃疡患者发生胃食管反流病方面,观察组与对照组差异无统计学意义(χ2=0.3,P0.05);停药3月后,观察组有3例消化性溃疡患者发生胃食管反流病,对照组有5例,差异无统计学意义(χ2=0.577,P0.05)。结论:消化性溃疡患者经根除HP后效果显著,HP与胃食管反流病的发生可能不存在相关性。     

医用无菌敷料细胞毒性的检验方法

目的:比较医用无菌敷料不同浸提方法所获得的供试液对其细胞毒性的影响.方法:采用四唑盐(MTT)比色法进行细胞毒性试验.结果:面积浸提法得供试液细胞毒性为3级,质量浸提法得供试液细胞毒性为2级.结论:采用质量浸提法得供试液比面积浸提法得供试液的细胞毒性小.     

氯沙坦对百草枯诱导HK-2细胞损伤的影响

目的:探讨氯沙坦对百草枯诱导HK-2细胞损伤的影响及机制。方法:常规培养HK-2细胞,分为空白对照组:未采用任何药物干预培养24h;模型组:以800μmol/L百草枯培养24h;氯沙坦预治疗组:先以75μmol/L氯沙坦培养1h,再以75μmol/L氯沙坦+800μmol/L百草枯培养24h。观察各组细胞TLR-4、NF-?B、TNF-α、IL-6的表达。结果:与空白对照组相比,模型组TLR-4、NF-?B、TNF-α、IL-6表达升高(P0.05);与模型组相比,氯沙坦预治疗组TLR-4、NF-?B、TNF-α、IL-6表达水平显著降低(P0.05)。结论:氯沙坦预处理能够抵抗百草枯诱导的HK-2细胞损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-?B信号通路活化,减少炎症因子的表达有关。     

急性淋巴细胞白血病患者外周血原始淋巴细胞DNA修复功能的初步研究

配对观察了11例急性淋巴细胞白血病患者用UV诱发~3H-T_dR掺入外周血原始淋巴细胞非程序DNA合成(Unscheduled DNA Synthesis, UDS)的水平,发现急性淋巴细胞白血病组的UDS水平明显地低于正常对照组:实际CPM值是115±13对257±13(P<0.01);UI_1是0.50±0.05对1.09±0.04(P<0.01);UI_2是1.53±0.02对2.11±0.02(P<0.01);提示急性淋巴细胞白血病患者存在着DNA修复功能缺陷。     

科技杂志要览

肝胚瘤细胞株HepG2中HBx蛋白对SOCS3表达的影响及其机制The influence of Hepatitis B Virus X Protein on the expressionof SOCS3 protein and its mechanisms in HepG2 cells管世鹤[1]潘颖[1]杨凯[1]吴圆圆[1]杨东亮[2]目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)对肝胚瘤细胞株HepG2表达信号抑制因子3(SOCS3)的影响及其机制.方法将表达HBx蛋白的重组质粒FL1-145HBx转染HepG2细胞,以不同浓度的SRC抑制剂PP2处理转染细胞,运用Westem blot和RT-     

细胞癌细胞系的建立与生物学特性的关联研究

目的以原代培养的喉鳞状细胞癌组织细胞为例,观测细胞癌细胞系的生物学特性。方法通过组织块培养法,体外原代培养喉鳞状细胞癌组织细胞,细胞传代超过25次时,观察细胞的样态、细胞角蛋白的组织化学染色、检验细胞增值周期、培养法检验支原体、聚合酶链反应法(PCR法)鉴别细胞种类、STR-短串联重复序列基因分型。结果新建立一株喉鳞状细胞癌细胞系,定名为TR-LCC-1,其大多数形态为多边形细胞,铺路石样变异、叠层生长,除了形态区别于其他细胞外,其体积也比较大。细胞角蛋白的组织化学染色呈阳性。繁衍30代之后,细胞群体倍增时间提高到201.2小时。对细胞间期进行检验,发现DNA合成前期(G1期)占51.71%,DNA合成期(S期)占44.56%,DNA合成后期(G2期)占2.28%。培养法检验支原体,未发现污染。聚合酶链反应法(PCR法)鉴别TR-LCC-1种类属于人来源细胞。对STR-短串联重复序列进行检验,发现P26与P6一致,异于已知细胞的短串联重复序列。结论人来源喉鳞状细胞癌的细胞系TRLCC-1,可以作为样本以研究喉鳞状细胞癌的特性。     

细胞癌细胞系的建立与生物学特性的关联研究

目的以原代培养的喉鳞状细胞癌组织细胞为例,观测细胞癌细胞系的生物学特性。方法通过组织块培养法,体外原代培养喉鳞状细胞癌组织细胞,细胞传代超过25次时,观察细胞的样态、细胞角蛋白的组织化学染色、检验细胞增值周期、培养法检验支原体、聚合酶链反应法(PCR法)鉴别细胞种类、STR-短串联重复序列基因分型。结果新建立一株喉鳞状细胞癌细胞系,定名为TR-LCC-1,其大多数形态为多边形细胞,铺路石样变异、叠层生长,除了形态区别于其他细胞外,其体积也比较大。细胞角蛋白的组织化学染色呈阳性。繁衍30代之后,细胞群体倍增时间提高到201.2小时。对细胞间期进行检验,发现DNA合成前期(G1期)占51.71%,DNA合成期(S期)占44.56%,DNA合成后期(G2期)占2.28%。培养法检验支原体,未发现污染。聚合酶链反应法(PCR法)鉴别TR-LCC-1种类属于人来源细胞。对STR-短串联重复序列进行检验,发现P26与P6一致,异于已知细胞的短串联重复序列。结论人来源喉鳞状细胞癌的细胞系TRLCC-1,可以作为样本以研究喉鳞状细胞癌的特性。     

大蒜素对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用研究

目的:研究大蒜素对人肝癌HepG2细胞生长的抑制作用。方法:体外培养人肝癌HepG2细胞,形态学观察大蒜素作用下HepG2细胞的生长变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测实验各组HepG2细胞的生长增殖情况。结果:形态学观察显示,在大蒜素作用下,HepG2细胞失去原有"铺路石"样排列,细胞间连接减少或消失,细胞黏附性下降,出现细胞凋亡特征;MTT比色法检测发现,不同浓度的大蒜素均能抑制肝癌细胞的生长(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:大蒜素对人肝癌HepG2细胞的生长起一定的抑制作用。     

五种重组人源IL-18突变子表达质粒的构建及其在BxPC-3细胞中的表达

目的:设计获得5段hIL-18异构体,定向插入pEGFP-C1质粒形成融合基因,转染胰腺癌Bx-PC-3细胞并表达,为进一步研究改建的hIL-18蛋白功能奠定实验基础.方法:设计引物从pGEM-T-hIL-18质粒中PCR扩增得到5段不同的hIL-18片段,分别连接入pEGFP-C1载体构建不同的突变子(Mu0、Mu1、Mu2、Mu3和Mu4),转染原位胰腺癌BxPC-3细胞,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法检测转染细胞中hIL-18表达水平.结果:(1)五种重组质粒经酶切与测序证实构建成功;(2)BxPC-3细胞转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:(1)成功构建了hIL-18五种异构体的绿色荧光蛋白表达载体;(2)改建的hIL-18蛋白可与绿色荧光蛋白在BxPC-3细胞融合表达.     

草鱼细胞融合及融合细胞生长的观察

一、前言鱼类细胞融合是鱼类细胞工程一个重要组成部分。白经修对哺乳类细胞经PEG诱导融合处理后,作了为期10天的培养观察。而对鱼类融合细胞作较长时间的培养观察,尚未见报道。我们用50％PEG(聚乙二醇)和50％PEG+10％DMSO(二甲基亚砜)分别诱导草鱼细胞融合,并在其后进行了13天的培养观察,目的在于探讨经融合剂处理后形成的     

CHO细胞无血清培养基的研究进展

由于血清会增加支原体、病毒和朊病毒污染,使纯化过程复杂化,因此中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞的悬浮培养最好使用无血清培养基(serum-free medium,SFM),但是没有通用的SFM以用于所有细胞系的培养。因此,需要针对每种单独的细胞系开发特定的SFM。本文综述了CHO细胞SFM的研究进展。     

银掺杂剂量对内皮细胞增殖性能的影响

利用BCA蛋白测定法对银掺杂的二氧化钛(Ag-TiO2)薄膜表面人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖性能进行了研究,并利用细胞毒性LDH实验、免疫荧光标记等方法对影响因素进行了初步探讨。实验结果表明,随着薄膜中掺银剂量的增加,细胞增殖性能降低。其降低原因不是由银的细胞毒性引起的,而是由于银离子的存在影响了内皮细胞的贴壁性能,进而影响了其后续增殖。     

ECH-931长程治疗对老年性痴呆的分子基因药效学研究

阿尔茨海默病(AD)是最常见的与年龄有关的神经退行性疾病.全世界约15%的65岁以上人群和30%的80岁以上老人患有AD.AD的病因仍未明确,目前尚无有效的预防和治疗方法.随着人类社会的老龄化,本病已成为一个世界性的重大医学和社会难题.许多证据显示β-淀粉样肽在阿尔茨海默病(AD)的病因学和/或病程发展中起着关键作用.很多研究提示β-淀粉样肽的神经毒性与氧的负荷和自由基损伤密切相关.最近的研究表明,NF-κB在神经元存活和突触的可塑性方面发挥重要作用,CREB是长时程记忆(LTM)和长时程增强效应(LTP)的必要基因开关.本研究观察了科研新药ECH-931对β-淀粉样肽1～40,β-淀粉样肽25～35和H202所诱导的B104中枢神经系神经元细胞株神经毒性的预防和治疗作用.ECH-931的低,中,高实验浓度分别为50μg/mi,100μg/mi和150/200μg/mi,用ECH-931处理的方案如下细胞经ECH-931预处理3天后,用ECH-931和H202(100～200μM)共同处理3～12小时,以观察ECH-931对H202神经毒性的防治效果;细胞经ECH-931预处理3天后,用ECH-931和Abeta 1～40(10μM)处理48小时来预防性治疗Abeta1～40的神经毒性;在细胞暴露于Abeta25～35(25μM)8小时后再用ECH-931处理48小时(经ECH-931和Abeta25～35共同处理48小时)以观察ECH-931对Abeta神经毒性的治疗作用在NF-κB和CREB基因转染后以ECH-931处理5天,以观察ECH-931对NF-κ B和CREB基因表达的影响;在NF-κB基因转染并加Abeta1～40(5μM)后以ECH-931处理3天,以观察ECH-931拮抗Abeta1～40对NF-κB基因表达影响的效果.结果表明经ECH-931(50～200μg/mi)预处理和共同处理B104神经元能完全拮抗β-淀粉样肽1～40(10μM)诱导的神经毒性(P〈0.05～0.01〉;用ECH-931(50～200μg/mi)治疗性处理能显著阻止由β-淀粉样肽25～35(25μM)诱导的B104神经元细胞死亡/凋亡(P＜0.05～0.01);用ECH-931(50～200μg/mi)预处理和共同处理能显著保护由H202(100～200μM)诱导的B104神经元细胞死亡/凋亡;用ECH-931(50～150μg/mi)治疗性处理能显著上调在B104 CNS神经元细胞中转染基因NF-κB和CREB的表达(P〈0.05～0.01〉;ECH-93150～150μg/mi能拮抗由β-淀粉样肽1～40诱导的NF-κB表达抑制(P〈0.01〉.并且,所有ECH-931的处理效应都呈现剂量依赖性(P＜0.05～0.01).基于以上研究结果,我们认为ECH-931能保护(预防和治疗)神经元免受由β-淀粉样肽诱导的神经毒性.其机制与拮抗活性氧/氢氧根自由基损伤和激活NF-κB细胞存活信号通路有关.ECH-931治疗AD的另一个重要机理可能是它能调节CREB的表达,而CREB是长期记忆的基因开关.ECH-931的神经元保护效应尤其是其阻止β-淀粉样肽诱导的毒性和细胞死亡的效力显示出它治疗神经退行性疾病(如AD)的潜力,具有重要的研究开发价值和广阔的应用前景.     

ECH-931长程治疗对老年性痴呆的分子基因药效学研究

阿尔茨海默病(AD)是最常见的与年龄有关的神经退行性疾病.全世界约15%的65岁以上人群和30%的80岁以上老人患有AD.AD的病因仍未明确,目前尚无有效的预防和治疗方法.随着人类社会的老龄化,本病已成为一个世界性的重大医学和社会难题.许多证据显示β-淀粉样肽在阿尔茨海默病(AD)的病因学和/或病程发展中起着关键作用.很多研究提示β-淀粉样肽的神经毒性与氧的负荷和自由基损伤密切相关.最近的研究表明,NF-κB在神经元存活和突触的可塑性方面发挥重要作用,CREB是长时程记忆(LTM)和长时程增强效应(LTP)的必要基因开关.本研究观察了科研新药ECH-931对β-淀粉样肽1～40,β-淀粉样肽25～35和H202所诱导的B104中枢神经系神经元细胞株神经毒性的预防和治疗作用.ECH-931的低,中,高实验浓度分别为50μg/mi,100μg/mi和150/200μg/mi,用ECH-931处理的方案如下:细胞经ECH-931预处理3天后,用ECH-931和H202(100～200μM)共同处理3～12小时,以观察ECH-931对H202神经毒性的防治效果;细胞经ECH-931预处理3天后,用ECH-931和Abeta 1～40(10μM)处理48小时来预防性治疗Abeta1～40的神经毒性;在细胞暴露于Abeta25～35(25μM)8小时后再用ECH-931处理48小时(经ECH-931和Abeta25～35共同处理48小时)以观察ECH-931对Abeta神经毒性的治疗作用:在NF-κB和CREB基因转染后以ECH-931处理5天,以观察ECH-931对NF-κ B和CREB基因表达的影响;在NF-κB基因转染并加Abeta1～40(5μM)后以ECH-931处理3天,以观察ECH-931拮抗Abeta1～40对NF-κB基因表达影响的效果.结果表明:经ECH-931(50～200μg/mi)预处理和共同处理B104神经元能完全拮抗β-淀粉样肽1～40(10μM)诱导的神经毒性(P〈0.05～0.01〉;用ECH-931(50～200μg/mi)治疗性处理能显著阻止由β-淀粉样肽25～35(25μM)诱导的B104神经元细胞死亡/凋亡(P＜0.05～0.01);用ECH-931(50～200μg/mi)预处理和共同处理能显著保护由H202(100～200μM)诱导的B104神经元细胞死亡/凋亡;用ECH-931(50～150μg/mi)治疗性处理能显著上调在B104 CNS神经元细胞中转染基因NF-κB和CREB的表达(P〈0.05～0.01〉;ECH-93150～150μg/mi能拮抗由β-淀粉样肽1～40诱导的NF-κB表达抑制(P〈0.01〉.并且,所有ECH-931的处理效应都呈现剂量依赖性(P＜0.05～0.01).基于以上研究结果,我们认为ECH-931能保护(预防和治疗)神经元免受由β-淀粉样肽诱导的神经毒性.其机制与拮抗活性氧/氢氧根自由基损伤和激活NF-κB细胞存活信号通路有关.ECH-931治疗AD的另一个重要机理可能是它能调节CREB的表达,而CREB是长期记忆的基因开关.ECH-931的神经元保护效应尤其是其阻止β-淀粉样肽诱导的毒性和细胞死亡的效力显示出它治疗神经退行性疾病(如AD)的潜力,具有重要的研究开发价值和广阔的应用前景.     

细胞生物学课程现代教学方法的探讨与思考

细胞生物学是生命科学中最重要的基础学科之一,随着生命科学自身和生物产业的不断发展,对生命科学相关领域创新型高水平人才的需求也在不断增加。作为从事高等教育的我们,宜在教学过程中不断总结和探索,以期逐步实现细胞生物学教学手段的现代化、教学模式的多元化、教学内容的先进化和教学思维的创新化,迎合时代和社会发展的需求,为祖国培养出更多不仅具有扎实的基本知识还具有非凡创新能力的人才。     

镉在不同品种小白菜中的亚细胞分布

以差速离心法,研究了Cd在苏州青和沪青一号两小白菜品种不同器官的亚细胞分布.结果表明,不同器官Cd分布量依次为根系>叶片>叶柄,品种间略有差异.在植株各器官中,Cd主要分布在细胞可溶性成分、细胞壁和质体(或叶绿体)中,而在细胞核、线粒体和核糖体中分布较少.根系四种重要细胞器(质体、细胞核、线粒体和核糖体)中Cd分配率随Cd处理浓度增加而增加,沪青一号Cd分配率上升更明显;叶片中叶绿体、线粒体和核糖体中的Cd随Cd处理量增加而增加,沪青一号表现更为明显;叶柄中,沪青一号四种细胞器Cd分配率高于苏州青,增加Cd浓度两品种线粒体和核糖体Cd分配率上升但叶绿体和细胞核Cd分配率下降.高Cd处理对沪青一号重要细胞器中Cd增加更明显,推测Cd浓度增加对沪青一号细胞生命活动的危害有可能比苏州青更为严重.     

大鼠Kupffer细胞分离、培养及永生化实现

枯否细胞(Kupffer Cells,KC)是肝脏免疫防御的第一道防线,其与多种肝脏疾病密切关联。Kupffer细胞分离纯化技术要求较高,且该细胞分化增殖能力极弱,成为开展大规模细胞实验的主要障碍。课题组简化了Kupffer细胞分离纯化步骤,构PDS152_p Lenti-GFP-IRES-SV40LT表达载体,包装形成慢病毒颗粒侵染Kupffer细胞,侵染后细胞生长速度变快,能多次传代,细胞状态稳定,巨噬细胞特异性标志F4/80呈阳性表达。将SV40LT片段导入Kupffer细胞可实现细胞永生化,且转染后的kupffer细胞仍维持巨噬细胞的功能特性。