果蝇EF-1α蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

为进一步研究延长因子-1（elongationfactor-1α,E-1α）在调控心脏发育和果蝇心脏功能中发挥的作用,制备延长因子-1的抗体．利用生物信息学选择果蝇EF-1α基因抗原亲水区,并设计出特异性引物,PCR扩增出的片段克隆到原核表达pET-28a载体中,转入E．coli中后通过IPTG诱导融合蛋白表达,将His—EF-1α融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,再用WesternBlot检测抗体的效价和特异性．研究结果表明,获得了EF-1α原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗EF-1α多克隆抗体．EF-1α多克隆抗体的效价可以达到1比1500,并且有很强的特异性,为后续研究EF-1α基因在心脏发育和心脏功能中的作用奠定了基础．     

柑橘黄龙病菌CpaB基因的原核表达和抗体制备

柑橘黄龙病菌CpaB基因编码一种菌毛组装蛋白(Flp pilus assemble protein),前期研究已经证实该蛋白具有外分泌性.在本研究中,首先构建pET30a-CpaB重组载体,然后将其转化BL21(DE3)感受态细胞,重组菌在37℃,0.2 mmol·L^(-1) IPTG诱导下,CpaB蛋白可被成功诱导表达,经过Ni-NTA亲和柱纯化后,获得纯度较高的CpaB重组蛋白,分子量为28.2 kDa,以其为抗原,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗血清;采用Western blot对多抗血清的特异性进行分析,结果显示该多抗能特异性结合纯化的CpaB蛋白;进一步使用制备好的CpaB抗血清对感染黄龙病和健康的柑橘样品进行DTBIA检测,具有较好的区分度.这些研究结果为柑橘黄龙病快速检测体系的建立提供理论参考.     

果蝇血液发育标记基因Dox-A3多克隆抗体的制备

从野生型成体果蝇体内提取总RNA,以cDNA作为模板进行PCR扩增,获取Dox-A3部分基因片段,将这片段连接于原核表达载体pET-28a上,成功构建重组质粒pET-28a-Dox-A3.将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,用ITPG诱导表达出融合蛋白,然后将经Ni-IDA凝胶柱纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备Dox-A3多克隆抗体,通过Western-Blot检测效价和特异性.结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体.     

昆虫神经毒素AaIT原核表达、纯化及抗体制备

人工合成Aa IT的成熟基因,连接到p ET32载体并转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,纯化重组Aa IT蛋白并免疫小鼠,经蛋白质-G柱对抗血清进行纯化.研究结果表明,纯化得到了Aa IT蛋白经免疫小鼠和纯化抗血清得到了特异性强的Aa IT抗体蛋白.     

人铁蛋白基因的克隆与原核表达

通过PCR技术扩增出人铁蛋白基因,经酶切后与表达载体质粒pGEX-4T-2连接,重组质粒转化感受态大肠杆菌,利用菌落PCR、质粒双酶切、测序,证实成功地构建了人铁蛋白基因表达载体,利用IPTG对重组菌进行诱导表达,通过尿素洗涤纯化目的蛋白用于制备抗体．     

小鼠nulp1基因多克隆抗血清的制备及检测

为了在小鼠模型中更深入地研究nulp1蛋白在心脏发育中的功能,采用PCR技术扩增出小鼠nulp1基因的部分编码区并连接入pET-28a表达载体中,之后将重组质粒转入大肠杆菌(E.coli)通过IPTG诱导表达Hisnulp1融合蛋白,对该融合蛋白采用Ni-IDA凝胶柱层析纯化后,免疫新西兰兔制备了多克隆抗体,并用western blotting对抗体进行分析.结果表明,获得了高效价的特异性兔抗nulp1多克隆抗体.这为nulp1功能的进一步研究奠定了基础.     

人KLK7基因的表达及其对细胞增殖与凋亡的影响

本研究旨在对人激肽释放酶7 (KLK7)基因进行原核与真核表达,研究其功能,并为后续KLK7新型生物抑制剂的研制提供基础材料。采用PCR扩增KLK7基因,将其克隆至原核表达载体pGEX4T-1和真核表达载体pEGFP-C1,构建重组表达质粒pGEX4T-1-KLK7和pEGFP-C1-KLK7,分别转化Transetta (DE3)和DH5α感受态细胞,筛选阳性菌株,用IPTG诱导重组KLK7蛋白（rKLK7）表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。将pEGFP-C1-KLK7转染人角质形成细胞HaCaT,观察KLK7在细胞中的定位,检测KLK7基因过表达对角质化细胞增殖的影响。KLK7基因开放阅读框为762 bp,编码254个aa。原核系统表达的rKLK7分子量为53.5 kDa。EGFP-KLK7融合蛋白定位在细胞质。KLK7的过表达对HaCaT细胞的增殖有一定的抑制作用,但差异不显著（P>0.05）。DNA检测表明,KLK7过表达可促进HaCaT细胞的凋亡。KLK7在原核表达系统和真核细胞中均成功表达,KLK7蛋白过表达对HaCaT细胞的增殖有一定的抑...     

日本对虾Rab基因的克隆、结构分析与重组表达

通过3′RACE和5′RACE获得对虾Rab基因(命名为PjRab)的cDNA全长,其ORF为636bp,编码212个氨基酸.序列分析发现,PjRab具备Rab蛋白的基本特征,但在C-端与已知的Rab蛋白不同,可能是一种新的Rab蛋白,这是首次在海洋无脊椎动物体内克隆到该基因.对该基因进行了原核表达,并得到了有活性的表达产物.     

人C6orf210基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

为了构建人C6orf210基因原核表达载体,并在E．coliBL21中表达并纯化。采用RT—PCR扩增人C6orf210基因片段,并将其克隆到原核表达载体Pet21a中,构建重组质粒pET21a—C6ort210。经限制性内切酶EcoRI与XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E．coliBL21,经IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示获得全长为1188bp的人的CAiorf210基因片段。以构建的重组质粒pET21a—C6orf210转化E．coliBL21后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量（Mr）约66000的融合蛋白。经SINS—PAGE、Western blot分析显示,诱导表达的蛋白为C6orf210。     

浅谈原核表达的技巧

原核表达是表达外源基因常用的方法,具有操作简单、快捷,需时较短,表达产量高,适合工业化等优点。本文作者根据自己的实践经验,总结了原核表达的一些技巧。     

人神经生长抑制因子的单克隆抗体制备及抗原决定簇的研究

神经生长抑制因子（ＦＩＦ）是一种特异存在于哺乳动物脑中的金鹰硫蛋白 （ＭＴ），又称ＭＴ－Ⅲ，具有特异神经细胞生长抑制效应．ＭＴ－Ⅲ与ＭＴ有７０％的序列 同源性，但ＭＴ却无此功能．在患ＡＤ症病人的大脑中，ＧＩＦ和ｍＲＮＡ的含量均显著降 低．为了进一步研究，ＭＴ－Ⅲ的结构与功能及与ＡＤ症的关系，制图示ＧＩＦ的单克隆抗 体，用ＥＬＩＳＡ方法研究了ＧＩＦ，α－结构域和β－结构域，Ｎ－末端六肽和Ｎ－末端＋肽分别 与ＧＩＦ的单克隆抗体的相互作用，并对单克隆抗体的抗原决定簇进行了分析．结果显示 了ＧＩＦ的抗原决定簇与其一定的空间构象有密切的关系．     

中药中活性物质单克隆抗体的制备及其免疫检测应用

中药活性成分检测是中药质量控制的关键环节,但中药中许多重要活性物质如甾体皂苷、多数三萜皂苷和大多数真菌中的多糖化合物光谱吸收只有弱的末端吸收甚至无特征紫外吸收,分析、检测比较困难.在单克隆抗体技术基础上的小分子化合物的免疫学检测可应用于这些活性成分化合物的快速检测以及研究其在体内的代谢和分布.该方法与传统检测方法相比,省时、便携、易操作,将在中药材标准研究上发挥更大的作用.     

基因工程抗体的种类与应用

简要论述了基因工程抗体的种类及应用前景。     

连接素抗体与重症肌无力

部分重症肌无力（MG）患者血清中不但有乙酰胆碱受体抗体（AChR Ab）,还存在连接素抗体（Titin Ab）.研究发现约95%的MGT及近50%的晚发MG患者血清中存在Titin Ab;Titin Ab还可以预测胸腺切除术后MG患者的预后.     

抗体药物的研究进展

随着人们对抗体的结构与功能的了解不断深入,抗体不仅在抵抗外来生物物质方面有着重要作用,而且利用它本身的特点来防治疾病更是人们的研究热点。特别是单克隆抗体技术的问世,使得研究和生产单抗药物成为现实。本文就单抗药物的历史、现状、存在的问题及未来展望做一简要综述。     

单克隆抗体在肿瘤治疗中的应用

随着一些单克隆抗体获准被应用于临床,单抗在肿瘤治疗中的运用得到了快速发展。其中代表性的有抗血管内皮生长因子的单抗bevacizumab(Avastin),和抗表皮生长因子的cetuximab(Erbitux)。结合常规的化疗,bevacizumab能够显著延长结肠癌、乳腺癌及肺癌患者的生命。Cetuximab无论与化疗联合使用或单独使用对于对化疗有耐药性的结肠癌直肠癌均有显著的临床意义。