泽泻18S-26SrRNA及其ITS片断的克隆及序列分析

对采集自福建、江西、四川3个地区4个泽泻样品的18S-26SrRNA及其ITS片断进行克隆及序列分析，结果表明福建高叶泽泻、福建矮叶泽泻和江泽泻的18S-26SrRNA及ITS片断的序列完全一致，与川泽泻则有2个碱基的区别。     

ITS序列鉴别三七及其伪品

用ITS序列作为DNA条形码来区分三七及其伪品的基源植物。通过PCR直接测序和在genbank中进行序列下载两种方法共选用了16条三七正品及伪品的ITS序列做变异分析,经Clustal X 2.0软件比对后用MEGA4.0计算种间的K2P距离并基于该距离建立了NJ系统树,并计算了"barcode gap"。结果显示,三七与其伪品水田七、姜黄、竹节参、白术、藤三七可明显区分开。表明ITS序列可作为区分三七和其常见伪品的参考DNA条形码。     

胡枝子属部分植物的ITS序列分析

利用ITS序列分析技术对胡枝子属植物进行了亲缘关系分析,探讨其遗传多样性及其亲缘关系,试图为胡枝子属植物资源开发利用提供依据。将从Gen Bank检索获得的24条胡枝子属植物(19个种)的ITS序列做系统发育分析,Clustal 2.0软件进行序列比对,Mega4.0计算序列核苷酸比例及遗传距离,并构建邻接树(Neighbor-joining tree,NJ Tree)。胡枝子的19种植物ITS序列全长为622 bp,变异位点占总序列的16.6%;K-2-P遗传距离为0.001-0.085;鉴定成功率为57.9%,19种胡枝子可以聚为3支,与形态学分类结果并不完全一致。     

脱硫菌16S rDNA片段的克隆与序列分析

生物脱硫技术在能源工业发展和环境保护等方面显示出潜在的优势。本文利用NaAc法抽取总DNA作模板，用真细菌专一性引物进行PCR方法扩增HB2的16S rDNA片段并进行琼脂糖凝胶的回收，选用PUCm—T—vector，用T4连接酶连接，转化大肠杆菌DH5α的感受态细胞，然后在含氨卞青霉素Ap／IPTG／X2gal的平板上筛选阳性克隆，PCR检测阳性克隆最后进行测序。结果表明，所测片段序列与多种假单胞杆菌的16S rDNA的同源性达98％以上。     

马氏珠母贝核糖体蛋白S13基因的克隆和序列分析

构建马氏珠母贝腹足SMART cDNA质粒文库,测序和在GenBank中进行同源性查找,得到了核糖体40s亚基S13基因的全长cDNA序列。马氏珠母贝S13的cDNA全长554bp,推测的开放阅读框位于27-479,编码151个氨基酸,其中亮氨酸16个,所占比例为10.6%。马氏珠母贝S13同鲶鱼以及真菌纲的球毛壳的同源氨基酸序列相似性分别为90.05%和72.85%,很保守,可以用于种以上生物的进化关系研究。聚类分析显示,马氏珠母贝与脊椎动物和昆虫的亲缘关系较近,同线虫、水稻、啤酒酵母和球毛壳等动植物、真菌等相距较远。     

花生苹果酸脱氢酶基因的克隆及其蛋白序列分析

根据已知植物的苹果酸脱氢酶基因序列设计简并引物,采用RT-PCR技术从花生叶片中克隆得到苹果酸脱氢酶基因,命名为Ah MDH,Genbank登录号为KF499119,该基因编码区长度为1071bp,编码356个氨基酸。序列比对结果表明,Ah MDH编码蛋白与大豆、蒺藜苜蓿和豌豆等具有较高的相似性。     

不同绿藻核rDNA间隔区ITS的序列和系统发育分析

通过分析石莼(Ulva lactuca),裂片石莼(Ulva fasciata),礁膜(Monostroma nitidum)和浒苔(En-teromorphaprolifera)样品的ITS+5.8S rDNA区序列,与GenBank中相应序列进行比对,分析了多种绿藻的系统发育关系.结果显示,浒苔(E. prolifera)与浒苔属和石莼属内其他种的同源性系数分别约为93.0%和63.8%;石莼属和浒苔属GC%含量均在62.6%左右,聚类分析显示两属区分不明显.本研究表明:浒苔(E.prolifera)归属到浒苔属是有依据的;浒苔属与石莼属并非严格区分的属;地理距离对绿藻分子演化具有较大的影响.     

珙桐rbcL基因的克隆与序列分析

根据已知植物rbcL基因设计引物,以珙桐叶片总DNA为模板,PCR扩增目的DNA片段,克隆入pDM19-T载体.阳性克隆鉴定后进行测序,序列分析结果表明:该基因片断长为1266 bp,包括1031 bp的编码区序列,编码343个氨基酸;其编码区氨基酸与烟草、菠菜、玉米、甘薯、拟南芥、水稻、葡萄、地钱和葡萄柚等9个物种的同源性94.13%以上,并构建了它们间的亲缘关系树.该基因片断的预测晶体结构与菠菜的最相近,推测Lys86、Lys60、Lys179等残基对酶的活性影响较大.     

虎杖芪合酶基因保守区的克隆及序列分析

芪合酶是白藜芦醇合成的关键酶。本文分别以传统CTAB法、传统SDS法和改良SDS法对虎杖基因组DNA进行提取,获得符合分子生物学试验要求的高质量DNA。利用芪合酶基因保守区段的特异引物进行PCR扩增,将获得的片段进行测序分析,长度为809bp,成功克隆出虎杖芪合酶基因的保守区段,为芪合酶基因工程奠定基础。     

鸡γ-干扰素的克隆和序列分析

根据GenBank发表的鸡γ-干扰素核苷酸序列,使用primer 5设计一对特异性引物,通过RT-PCR技术从ConA诱导培养的鸡脾脏淋巴细胞中克隆出鸡γ-干扰素基因并对其进行测序,测序结果表明,鸡γ-干扰素基因全长495bp,具有一个完整的开放阅读框,编码164个氨基酸,与国外发表的序列比较,两序列间同源性为100%.计算机软件对鸡γ-干扰素编码的氨基酸序列进行了抗原性分析,结果表明鸡γ-干扰素具有良好的免疫原性.     

克隆技术的研究及其影响

概述了动植物克隆技术的理论基础和方法 ,以及该技术在动植物中的应用和发展 ,并就克隆技术对生物多样性及人类社会的影响进行了讨论。     

Changes in the gut microbiota of osteoporosis patients based on 16S rRNA gene sequencing: a systematic review and meta-analysis

Background

Osteoporosis (OP) has become a major public health issue, threatening the bone health of middle-aged and elderly people from all around the world. Changes in the gut microbiota (GM) are correlated with the maintenance of bone mass and bone quality. However, research results in this field remain highly controversial, and no systematic review or meta-analysis of the relationship between GM and OP has been conducted. This paper addresses this shortcoming, focusing on the difference in the GM abundance between OP patients and healthy controls based on previous 16S ribosomal RNA (rRNA) gene sequencing results, in order to provide new clinical reference information for future customized prevention and treatment options of OP.

Methods

According to the Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses (PRISMA), we comprehensively searched the databases of PubMed, Web of Science, Embase, Cochrane Library, and China National Knowledge Infrastructure (CNKI). In addition, we applied the R programming language version 4.0.3 and Stata 15.1 software for data analysis. We also implemented the Newcastle-Ottawa Scale (NOS), funnel plot analysis, sensitivity analysis, Egger’s test, and Begg’s test to assess the risk of bias.

Results

This research ultimately considered 12 studies, which included the fecal GM data of 2033 people (604 with OP and 1429 healthy controls). In the included research papers, it was observed that the relative abundance of Lactobacillus and Ruminococcus increased in the OP group, while the relative abundance for Bacteroides of Bacteroidetes increased (except for Ireland). Meanwhile, Firmicutes, Blautia, Alistipes, Megamonas, and Anaerostipes showed reduced relative abundance in Chinese studies. In the linear discriminant analysis Effect Size (LEfSe) analysis, certain bacteria showed statistically significant results consistently across different studies.

Conclusions

This observational meta-analysis revealed that changes in the GM were correlated with OP, and variations in some advantageous GM might involve regional differences.

     

甲壳动物卵黄蛋白原基因的分子克隆和表达研究进展

对近年来甲壳动物卵黄蛋白原基因的分子克隆和该基因在体内表达研究等方面进行分析,显示甲壳动物卵黄蛋白原的cDNA及其推断的氨基酸序列有很高的相似性,且有类似的分裂位点.卵巢和肝胰腺是甲壳动物卵黄蛋白原基因表达的主要位点.     

克隆人技术伦理根基之思考

从克隆人技术目的看,基础研究性克隆一般不会引起伦理上强烈冲击,治疗性和生殖性克隆则强烈冲击着人类伦理道德。生殖性克隆伦理问题的突出表现在于有损人类的尊严,治疗性克隆伦理问题的核心则是胚胎的权利与道德地位问题。考虑到克隆人技术的真理性和实践性两个层面,以及评判标准的相对性,对该技术进行绝对的善恶评判有失慎重。不过,生命伦理领域制定规范该技术的伦理原则是必须的,其中,知情同意原则理应是一个重要原则,其伦理学依据在于:人是目的,而不是手段。     

真核生物ITS2高级结构及其系统发育应用

ITS2是真核生物rRNA基因的重要组成部分,在rRNA基因加工成熟过程中起到至关重要的作用．ITS2的高级结构相对保守,对其序列进化表现一定程度的限制作用．ITS2保守的结构域和二级结构为广范围遗传距离排序提供了重要的技术保障．正因为如此,ITS2在高级阶元系统发育关系分析中展示出诱人的前景．     

哺乳动物克隆技术的应用前景与亟待解决的几个问题

哺乳动物克隆技术在组织工程、遗传育种、医药生产、拯救濒危动物等方面均显示出广阔的发展前景.但是目前动物体细胞克隆的成功率只有1%～3%,还很低.解决这一现状的关键问题是要解决细胞质、核周期的相容性,部分个体生理或免疫缺陷,重构胚完成整个发育过程等问题.     

沼生花褶伞rDNA的ITS序列测定及分析

采用分子生物学手段,运用PCR技术,以rDNA的ITS区为分子指标,首次对我国沼生花褶伞的核糖体DNA中的转录间隔区(ITS)序列进行了测定.通过对沼生花褶伞和紧缩斑褶菇的ITS序列进行相似性比对和分析,序列同源性高达84.3%,从分子水平上证明它们具有较近的亲缘关系.     

假单胞茵产弹性蛋白酶基因的克隆与表达

从假单胞菌（Pseudomonassp．）XZG36中克隆弹性蛋白酶基因,构建原核表达载体,实现其在大肠杆菌（Escherichiacoli）中的高效表达,并对表达产物进行酶学性质分析,为微生物发酵生产弹性蛋白酶奠定基础．以假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增弹性蛋白酶基因,并将其开放阅读框（0RF）克隆至融合表达载体pET30a（＋）进一步IPTG诱导表达;表达产物经His·Bind亲和层析纯化后对弹性蛋白酶进行酶学性质分析．实验成功克隆了弹性蛋白酶基因,DNA基因片段为1672bp、编码497个氨基酸残基的多肽,与预计长度相符合;实现了其在E．coli中的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的20％;经SDS-PAGE分析,相对分子质量为48000,与预期的一致;提纯后的表达蛋白SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92％以上．表达蛋白具有良好活性．