RNA干涉技术在基因功能研究中的应用与展望

RNA干涉是由双链RNA诱导的基因沉默现象,具有高特异性、高效性等优势,因而作为一种反向遗传技术广泛地应用于基因功能的研究.本文就近年来RNA干涉技术在基因功能研究中的应用作一综述.     

RNA干扰技术在真菌基因功能研究中的应用

RNA干扰是在真核生物中普遍存在的一种保守的基因沉默机制,该机制的发现是过去20年对科学研究领域作出最为重大的贡献之一。RNA干扰在仅仅被发现几年后,便成为反向遗传学研究领域的重要工具,尤其在基因敲除耗时长且效率低的物种中使用更为普遍。在丝状真菌基因功能研究领域,RNA干扰所具有的特点,使其逐步成为一种新颖的、高效的研究技术。本文主要阐述了RNA干扰在真菌研究领域的作用机理,并讨论了RNA干扰相关技术在丝状真菌基因功能研究方面的应用。     

反义RNA

反义RNA是指核苷酸序列与其所调控的RNA序列互补的RNA片断。反义RNA最初在原核生物中发现,后来在真核细胞中也发现有反义RNA系统的存在。反义RNA的发现,为人工控制基因表达提供了一个更为直接而有效的方法,对于基因治疗和基因功能的分析具有重要意义。一、反义RNA作用原理反义RNA是通过碱基配对,特异性地与RNA(主要是靶mRNA)结合,由此形成的     

小RNA研究中的有关概念

小RNA是近年来发现的一类长度在21-28nt的调控RNA分子,分为小干涉RNA(siRNA)、微RNA(mi RNA)和其他小RNA,与基因表达、细胞周期乃至个体发育过程密切相关,是对中心法则中RNA中介角色的重要补充。     

RNA干扰作用探究

RNA干扰作用（RNAi）是通过双链RNA介导的特异性转录后基因沉默，这一过程已在拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到提示。RNAi主要通过双链RNA被核酸酶切割成的小干扰RNA（siRNA），由siRNA介导识别并靶向切割同源靶mRNA分子而实现的。RNAi具有高效性和高特异性，已成为关闭基因的一项新技术，在基因功能研究和疾病的基因治疗中具有广阔的应用前景。     

RNA 干扰作用及其技术

RNA干扰作用(RNAi)是通过双链RNA介导的特异性转录后基因沉默，这一过程已在拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示．RNAi主要通过双链RNA被核酸酶切割成的小干扰RNA(siRNA)，由siRNA介导识别并靶向切割同源靶mRNA分子而实现的．RNAi具有高效性和高特异性，已成为关闭基因的一项新技术，在基因功能研究和疾病的基因治疗中具有广阔的应用前景．     

核糖核酸干扰及其应用研究进展

本文介绍了RNA干涉（RNAi）现象的发现过程、作用机理,以及RNAi在基因功能组学、遗传育种研究、重大传染病预防与治疗、恶性癌症的预防与治疗等方面所取得的重大成就。探讨了对RNAi技术进行深入研究的重大意义。     

功能基因组学研究方法

随着后基因组时代的到来，基因组学的研究从结构基因组学转向了功能基因组学，基因功能的研究也从单一基因转向了大规模、批量分析。本文对功能基因组学研究方法进行了综述，主要包括：微阵列分析、基因表达系列分析、基因剔除和转基因技术、RNA 干涉、蛋白质组学和生物信息学等新方法。     

植物转基因沉默

转基因沉默分为两种水平:第一种是转录水平上的基因沉默,发生原因主要是位置效应、异染色质化以及甲基化;第二种是转录后水平上的基因沉默,发生原因是通过对靶标RNA进行特异性降解而使基因失活,并就此研究提出RNA阈值模型、异常RAN模型、分子间(内)配对模型与RNA干涉模型来解释这种现象产生的机制。     

RNAi与RNAi技术

RNA干扰(RNA interference, RNAi)是近年来发展起来的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术,它利用了由小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默(silencing)现象,其本质是siRNA与对应的mRNA特异结合、降解,从而阻止mRNA的翻译.RNAi是生物进化的结果,是生物体对病毒基因外源核酸侵入的一种保护性反应.它普遍存在于各种生物中,具有抗病毒、稳定转座子及监控异常表达mRNA的生物学功能.RNA干扰现象不仅能提供一种经济、快捷、高效的抑制基因表达的技术手段,而且有可能在基因功能测定、基因治疗等方面开辟一条新思路.     

慢病毒载体介导的RNA干扰抑制TLR基因的表达

目的:研究慢病毒载体介导的RNA干扰对有TLR2 或者TLR4表达的小鼠来源的细胞株抑制干扰效率.方法:根据GeneBank小鼠的TLR2 或者TLR4基因mRNA的已知序列,在http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.htmL,寻找符合特征的靶序列.编码GeneBank模板的体外合成,收获病毒,侵染靶细胞,检测干扰效率.结果:检测表明干扰效果明显,达到80%以上.结论:慢病毒载体介导的RNA干扰是一种高效的基因沉默手段,可以对小鼠TLR基因功能进行长期的研究,检测有关蛋白基因的表达,揭示TLR在当中的作用.     

RNAi的革命

通过实验手段向细胞内导入长的双链RNA或者转基因可以产生一些短片段的双链RNA,这些短片段的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异地阻断体内特定基因的表达,使细胞出现特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi)。SiRNA(small interference RNA)就是这种短片段双链RNA分子,能够以序列同源互补的mRNA为靶目标,降解特定的mRNA。基本上所有的生物体内也都存在一种内源的小分子RNA,为单链RNA,由基因组转录生成,但是不编码蛋白质,它们的功能在于调节mRNA的翻译,称为miRNA,是由具有发夹结构的前体剪切产生的。RNAi的发现具有划时代的意义,它不仅揭示了细胞内基因沉默的机制,而且有望成为后基因组时代基因功能分析的有力工具,极大地促进了人类揭示生命奥秘的进程。     

SOE-PCR二步法构建shRNA干扰质粒

通过拼接重叠延伸PCR(SOE-PCR)二步法成功地建立了一种方便的shRNA干扰质粒的构建方法。将目的基因———半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)特异性的shRNA序列用SOE-PCR二步法插入到pEGFP-H1-shRNA质粒中,经菌液PCR、酶切、测序鉴定,证明pEGFP-H1-CSD shRNA干扰质粒与预期结果一致,可以用于细胞转染和RNA干扰实验。采用本方法能快速、高效构建RNA干扰质粒,为研究基因功能提供帮助。     

从RNA干涉的发现过程谈学生创新能力的培养

本文在反思RNA干涉发现过程的基础上，就现代教育模式下对如何培养学生创新能力提出了作者的见解，即：教师要不断学习最新知识，要注重启发学生思考和讨论，要把创新能力纳人考试范围。     

RNA的结构、功能及应用

RNA是广泛存在于生物体内的核糖核酸分子,中学生物学教材讲述的RNA包括3类,mRNA、tRNA和rRNA,它们均是直接参与蛋白质合成的重要角色.近年研究发现,细胞内还存在miRNA、siRNA、lncRNA和circRNA等,这些新型RNA主要通过调节基因表达参与特定的细胞生命活动.为帮助中学师生更全面地了解RNA组...     

脊柱侧凸患者髂骨松质骨总RNA提取方法

为了创建一种高效提取人体骨组织总RNA技术,分别采用Trizol、RNeasy lipid kit及改良CTAB提取人体松质骨总RNA,并分别用核酸蛋白检测仪、1%琼脂糖凝胶电泳和荧光Real-time PCR检测3种不同方法提取的总RNA质量。结果显示,3种方法中,Trizol方法提取的总RNA纯度最差,RNeasy试剂盒提取的总RNA纯度得到提高,但完整性差,改良的CTAB方法提取的总RNA纯度和完整性符合分子生物学实验要求。改良的CTAB法是从骨组织中提取总RNA高效便捷的方法,适于临床骨组织基因表达的研究。     

RNA干扰技术应对肿瘤多药耐药现象

在细胞中导入dsRNA会引起体内同源基因特异性的沉默(silencing),这种现象被称为RNAi(RNA interference)．该技术经过十年的发展,逐步走向成熟,并引起了生物科学的一次新的革命。它被广泛应用于细胞信号转导、发育生物学、基因功能学及肿瘤的基因治疗等多个领域,并取得了一系列开创性的成果。肿瘤细胞对抗癌药物产生抗药性是化疗失败的一个主要原因。而多药耐药现象是系指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物出现耐药性的同时,对其他多种结构不同、作用靶位不同的抗肿瘤药物也有耐药性的现象。利用RNAi技术研究和治疗肿瘤的多药耐药性为困扰医学界二十多年的难题找到了一个新的突破口。     

核糖体RNA的转录与调控

核糖体是细胞生长所需的蛋白质合成的动力工厂,每一个核糖体的大小为4兆而顿,有18S、5．8S、28S和5S四种RNA及80S等蛋白质组成,细胞中约有50％的RNA是核糖体RNA,这些RNA直接或间接地参与形成数百万的核糖体,因此,核糖体RNA基因的转录调控机制一直是细胞生长和细胞周期调控研究的热点,细胞通过进化已经形成一套完整的配合RNA聚合酶共同完成的核糖体RNA转录调控机制。本文从核糖体RNA基因结构出发,就染色质重塑、组蛋白乙酰化及细胞周期三个方面探讨核糖体RNA转录调控机制。     

核糖体RNA的转录与调控

核糖体是细胞生长所需的蛋白质合成的动力工厂,每一个核糖体的大小为4兆而顿,有18S、5.8S、28S和5S四种RNA及80S等蛋白质组成,细胞中约有50%的RNA是核糖体RNA,这些RNA直接或间接地参与形成数百万的核糖体,因此,核糖体RNA基因的转录调控机制一直是细胞生长和细胞周期调控研究的热点,细胞通过进化已经形成一套完整的配合RNA聚合酶共同完成的核糖体RNA转录调控机制。本文从核糖体RNA基因结构出发,就染色质重塑、组蛋白乙酰化及细胞周期三个方面探讨核糖体RNA转录调控机制。     

RNA知多少

20 0 2年 12月 19日 ,美国《科学》杂志评出 2 0 0 2年世界十大科技突破 ,其中第一条是miRNA。这是《科学》杂志连续第三次将RNA方面的进展列入年度世界十大科技突破 ,说明RNA研究越来越受到人们关注。1　RNA的基本种类与功能RNA的基本类型包括mRNA、tRNA和rRNA ,这些RNA承担着多种重要的生物学功能。1.1　RNA在遗传信息的翻译中起决定作用。三类RNA共同承担并完成这一过程 :rRNA起着装配蛋白质和催化肽链形成的作用 ,tRNA起着转运氨基酸和信息转换的作用 ,mRNA起信使和模板的作用。1.2　RNA具有催化功能。 1984年TomasC…