大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法建立及鉴定

目的:纯化和鉴定体外培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞.方法:取1~3天新生大鼠大脑皮层细胞进行体外培养,通过差速贴壁和传代去除成纤维细胞和神经元等,采用免疫组化法检测星形胶质细胞特异性蛋白—胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定星形胶质细胞.结果:培养的细胞具有典型的星形胶质细胞形态且生长旺盛,第3代95%以上为星形胶质细胞,特异性抗原GFAP表达阳性.结论:该方法操作简单,可靠,是一种有效的新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法.     

神经干细胞球和单层贴壁神经干细胞的培养及鉴定

目的:探讨小鼠大脑皮层源性神经干细胞(NSCs)体外培养的两种方法并对培养的细胞进行鉴定.方法:分别取孕14～16d的昆明小鼠胚胎脑皮质并用细胞球悬浮培养和单层贴壁培养两种方法进行体外培养,用光学显微镜观察NSCs的生长情况,并用免疫细胞化学鉴定NSCs特异性抗原的表达,经过血清对NSCs分化诱导后进行胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白-2的检测.结果:①培养出来的细胞可以扩增生长;②这两种方法分别培养的神经干细胞球和单层神经干细胞经抗巢蛋白免疫细胞染色均呈阳性;③两种培养方法培养出的NSCs经诱导分化后,免疫细胞化学染色显示微管相关蛋白-2、神经胶质酸性蛋白染色阳性.结论:采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞球培养和单层贴壁两种培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs.     

右美沙芬对激活的小胶质细胞的抑制作用

目的:研究右美沙芬(DM)对激活的小胶质细胞的作用及热休克蛋白60(HSP60)在DM神经保护中的作用机制。方法:培养BV2小胶质细胞株,分为对照组,细菌脂多糖组,(LPS),实验组(DM)。Western-blot检测DM对LPS激活的BV2细胞HSP60和Caspase 3的影响,ELISA检测DM对HSP60释放的作用。结果:LPS组中HSP60和Caspase 3的表达及释放都比对照组显著增加,加入DM后,这些因子的水平都明显降低。结论:DM可能通过HSP60信号通路途径阻止小胶质细胞的凋亡而发挥神经保护作用。     

钛表面制备多孔氧化物陶瓷层的实验设计

为提高生物医用金属钛材料表面的生物活性和生物相容性,以乙酸钙、β-甘油磷酸钠混合溶液作为电解液,采用微弧氧化实验方法,在金属钛表面制备出具有多孔结构的氧化物陶瓷层。用X射线衍射仪(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)以及能谱分析仪(EDS)对氧化物陶瓷层的组成及结构进行了分析。结果表明:氧化物陶瓷层的主晶相为锐钛矿型二氧化钛,同时含有钛、金红石型二氧化钛以及钛酸钙相;试样表面形成大量的微孔,孔径1～3μm,孔洞分布均匀;电解液中的Ca、P元素也参与了反应,并沉积在氧化物陶瓷层内。通过此实验方法可以有效提高金属钛的生物活性和生物相容性。     

三维数字图像相关法测量氧化锆陶瓷的弹性模量

利用三维光学应变测量系统(ARAMIS 3D)采集不同载荷下的氧化锆陶瓷的数字图像,并进行相关计算获得了三维应变云图,测得了氧化锆陶瓷的压缩弹性模量。实验结果表明,利用数字图像相关技术可以为脆性的陶瓷材料力学性能提供一个可靠的研究途径。     

同轴生物3D打印器官原型——从营养输送到血管化（英文）

组织/器官内的血供系统,为组织提供了必要的营养及代谢交换。而在体外构造组织/器官原型时,如何在大尺寸结构中构建营养网络,是长期以来的技术难题。近年来,同轴生物3D打印技术为该问题提供了一种极具潜力的解决方案。同轴生物3D打印技术的基本原理是:使用同轴喷头将外层的水凝胶材料和内层的牺牲材料共同挤出,打印为所需的复杂结构,内层的牺牲材料去除后形成的中空通路即成为后续培养中的营养网络。该技术结合了传统生物打印方法和牺牲组分3D打印方法的优点,能够一步构造内置营养网络的大尺寸仿生结构,在组织工程和器官重建等领域具有突出的优势。本文结合课题组近年围绕同轴生物3D打印技术所做的一些工作,梳理和总结了该技术的最新研究进展。主要关注以下几点:(1)在同轴3D打印血管时必须考虑的因素;(2)首选生物材料清单;(3)内皮化通道的制造原理及其潜在机制;(4)同轴生物3D打印技术的最近进展;(5)未来的挑战。首先,本文概述了当前生物3D打印中常用的水凝胶材料,包括海藻酸钠(Alginate)、明胶/甲基丙烯酸酐化明胶(Gelatin/Gel MA)和胶原(Collagen)等,介绍了这些材料的生物相容性、可打印性和打印原理等生物3D打印技术中重点关注的因素。随后,论文详述了同轴生物3D打印技术的基本原理、技术特点以及使用该技术构造内含营养网络(特别是血管化)的大尺寸结构的最新尝试。最后,论文展望了同轴生物3D技术未来可能的发展方向。最新的研究进展表明,该技术为快速制造血管化的组织/器官原型提供了可能。     

2007年高考化学模拟试题(二)

一、选择题(本题包括15小题,每题3分,共45分.每小题只有一个选项符合题意.)1.2005年8月9日,美国发现号航天飞机在爱德华空军基地安全着落,航天飞机表层的防热瓦曾成为航天飞机能否安全着落的制约因素.防热瓦是以石墨材料为主要成分的非常疏松的泡沫陶瓷.下列有关说法合理的是()(A)石墨成为该泡沫陶瓷主要成分的主要原因是石墨的硬度大(B)石墨成为该泡沫陶瓷主要成分的主要原因是石墨熔点很高(C)石墨中碳碳键之间的夹角为109°28′(D)C60也可代替石墨用作航天飞机表层的防热瓦材料2.分类方法在化学学科的发展中起到了非常重要的作用.下列分…     

使用移液器吸头培养三维肿瘤球（英文）

目的：三维细胞培养相较于常规的二维培养在模拟肿瘤微环境上具备很大的优势。本文旨在将移液器吸头（商品化且实验室通用的一种耗材）作为独特的细胞培养容器进行细胞培养,以实现高通量、简单、省时且经济高效的三维细胞球培养。创新点：1.将移液器吸头作为细胞培养容器,其实验过程未涉及任何机械加工和化学处理,因此极大地简化了肿瘤球培养实验过程,为实验条件有限的实验室提供了三维细胞培养的替代方案;2.该培养平台集稳定、便捷、省时、低成本和高通量于一体;3.该平台在培养过程中可进行原位观测;4.除了用于细胞球的培养外,该培养方式还展示出在肿瘤球融合和药物筛选等方面的应用潜力。方法：1.将细胞悬液吸到移液器吸头中,并将吸头置于吸头盒内,然后放入细胞培养箱里进行常规细胞培养。2.培养24 h后,在显微镜下观察细胞团聚形成三维细胞球;可直接推动移液器按钮进行细胞球的转移和后续分析。3.将两个或多个在吸头内形成的细胞球转移到同一个吸头,实现多个肿瘤球的配对和融合。4.待细胞成球后,在移液器吸头内加入药物,评价药物的细胞毒性。结论：1.将移液器吸头作为三维细胞培养平台,通过简单地抽吸和培养,即可在短时间内高通量地获...     

大鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及生物学特性

目的:探讨影响大鼠胚胎成纤维细胞(REF)分离和培养的一些因素,以建立稳定的REF培养体系.方法:取SD大鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对REF的生长形态、生长曲线进行观察,以探讨不同胚胎日龄以及不同胰酶作用时间对REF分离及培养的影响,并对其进行免疫细胞化学鉴定.结果:13.5d 胎龄鼠胚的REF分离效果优于10.5d、18.5d 胎龄鼠胚;REF在体外为贴壁生长型细胞,第三代细胞增殖旺盛;并表达波形蛋白(vimentin)、层黏连蛋白(laminin,LN)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)蛋白.结论:13.5d 胎龄SD大鼠REF以H-DMEM做培养基,在第3代增殖旺盛,合成多种细胞外基质,最适宜作胚胎干细胞或其它悬浮培养细胞的饲养层.     

右美托咪定调节miR-711/GDNF信号轴对创伤性脑损伤大鼠认知障碍和神经损伤的影响

目的：探究右美托咪定（Dex）是否能够通过调节miR-711/胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）信号轴改善创伤性脑损伤（TBI）大鼠认知障碍和神经损伤。方法：将大鼠按照随机数字表法分为假手术组（Sham组）、TBI组、Dex组、miR-NC组、miR-711 agomir组、miR-711 antagomir组，每组10只。采用脑损伤打击器自由落体打击，建立TBI大鼠模型。结论：Dex可能通过调控miR-711/GDNF信号轴减轻海马组织病理损伤，抑制促神经元凋亡蛋白的表达，改善TBI后认知障碍和神经损伤，发挥脑保护作用。     

大鼠皮层星形胶质细胞体外培养的对比研究

比较3种不同培养星形胶质细胞的方法,以获得高纯度星形胶质细胞,为体外研究其生物学功能奠定基础.取新生SD大鼠的皮层区,应用原代培养法、差速贴壁培养法和震荡法,通过形态学观察、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色法和台盼蓝染色法,对比分析3种不同培养方法所获得星形胶质细胞的纯度和活性.差速贴壁组星形胶质细胞纯度（98.4%）明显高于原代培养组和震荡组.经台盼蓝染色发现,各组细胞活细胞率均大于95%,表明3种培养方法对于细胞活性没有显著影响.差速贴壁培养法培养星形胶质细胞的方法具有简便可行,纯度高的优点,可作为星形胶质细胞体外培养的良好模型.     

集成式生物3D打印构建几何结构可控的角膜替代物方法（英文）

目的:供体角膜短缺是一个全球性问题。现有的角膜替代物主要依赖于传统的组织工程制造方法,仅支持具有不可控曲率的平坦或弯曲膜的制备。我们提出构建具有设计几何特征的弯曲薄膜,以通过生物3D打印实现厚度及曲率半径可控的角膜替代物。创新点:提出一种集成的3D角膜替代物打印系统,为3D角膜支架提供了一种新颖的制作方法;提出角膜光学特性与角膜支架几何特征的关系,并分析影响角膜光学功能的相关影响因素。根据扫描数据,采用该方法可以快速构建具有天然角膜几何形状和尺度的角膜支架。使用该方法可获得具有高细胞活力的载有细胞的复杂弯曲角膜状结构。该方法具有低制造成本和高重复性,是根据需要快速构建角膜预替代物的有效方法。方法:通过建立角膜数学模型,研究维持角膜视功能和生理学的关键几何参数和其他主导因素;根据天然角膜的表面拓扑结构,通过计算机辅助设计对精确定制的人造角膜进行建模;通过集成数字光处理和挤出生物打印来制备用于角膜替代的曲面薄膜。结论:由于结构可控性等优点,生物3D打印是制备具有几何结构可控人工生物合成角膜的有效工具,可以个性化构建具有天然角膜尺度的角膜替代物。     

基于蛋白质-RuO2纳米颗粒构建电化学免疫传感器超灵敏检测甲胎蛋白

本文采用蛋白质牛血清白蛋白(BSA)为模板,绿色合成稳定、生物相容性好的金属氧化物纳米材料(BSARuO₂),基于此构建了一种夹心型免疫传感器,实现甲胎蛋白(AFP)的超灵敏检测。     

miR-638影响神经胶质瘤U251细胞发生发展研究

目的:研究microRNA-638(miR-638)在神经胶质瘤U251细胞中的表达丰度,以及miR-638的表达对神经胶质瘤U251细胞增殖和迁移能力的影响,从而探讨miR-638在U251细胞中促进胶质瘤发生发展的分子机制.方法:实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测人正常星形胶质细胞系(NHA)与胶质瘤U251细胞株中miR-638的表达水平;U251细胞转染miR-638模拟物后,MTT实验以及细胞划痕实验检测miR-638的表达对U251细胞的增殖以及迁移作用的影响.结果:与正常人脑星形胶质细胞相比,胶质瘤U251细胞株中miR-638的表达上调(P0.01);miR-638的表达能促进U251细胞的迁移能力,但是不影响细胞增殖能力(P0.05).结论:miR-638在U251神经胶质瘤细胞中高表达,对胶质瘤细胞迁移有促进作用,miR-638可能具有促进胶质瘤U251细胞发生发展的作用.     

高压静电法制备微胶囊化人视网膜色素上皮细胞

目的:探索用高压静电法制备人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelial cell,hRPE)海藻酸钠- 壳聚糖- 海藻酸钠(alginate-chitosan-alginate,ACA)微胶囊.方法:用自制的高压静电微胶囊发生装置制备包被hRPE 细胞的ACA 微胶囊,并观察所得细胞微胶囊在培养液中培养1 周的细胞总数及存活率.结果:制备出直径为(400±13) μm 的hRPE 细胞ACA 微胶囊.d 1～d 3 微胶囊内细胞总数及存活率变化不显著,而培养到d 7 后总数显著上升,存活率降低,但总的活细胞数增加.结论:用自制的高压静电微胶囊发生装置能成功制备出hRPE 细胞的ACA 微胶囊;包被在微胶囊中的细胞培养1 周后,细胞增殖显著.     

结合生物3D 打印和静电纺丝制备复合生物可吸收血管支架用于血管狭窄治疗

设计一种新型血管支架用于血管狭窄治疗。针对目前制备生物可吸收血管支架（BVS）在装备和技术上的不足,提出了结合生物3D 打印和静电纺丝制备复合生物可吸收血管支架（CBVS）的新方法。首先,用 PPDO材料通过3D 打印制备支架内层;然后,配制壳聚糖和 PVA 混合溶液,通过静电纺丝制备支架外层。力学性能测试显示,结合3D 打印和静电纺丝制备的支架要好于仅采用3D 打印制备的支架。在支架上种植细胞试验表明,细胞在支架上有良好的粘附和增殖,因为外层含有天然生物材料壳聚糖。所提出的复合成形工艺和方法,为后续构建可控携载药物支架提供了很好的思路。该 CBVS 可用于血管狭窄治疗。     

自我导向学习在《细胞生物学》教学中的应用与思考

目的:调查自我导向学习(self-directed learning,SDL)教学法在《细胞生物学》教学中的应用效果。方法:将08级生物专业的学生分为两组,分别进行两种方法教学,实验组采用SDL教学法;对照组采用传统教学方法。在实验组同学中发放问卷,调查SDL对学生各项能力的影响。对两组的教学质量进行综合评估。结果:SDL教学模式组学生的成绩优于传统模式组(P<0.01)。结论:SDL教学法在培养学生综合素质与自学能力方面优于传统教学方法。     

氧化苦参碱对活化的小胶质细胞的抑制作用

目的:研究氧化苦参碱(OMT)对激活的小胶质细胞的作用及机制。方法:培养BV2小胶质细胞株,实验分为对照组(Con),细菌脂多糖(LPS)组,OMT实验组。应用western-blot检测OMT对LPS激活的BV2细胞HSP60的影响,ELISA检测OMT对HSP60和TNF-α释放的作用。结果:LPS组中HSP60的表达及HSP60、TNF-α的释放都比对照组显著增加,加入OMT后,这些因子的水平都明显降低。结论:OMT可能抑制通过HSP60信号通路降低炎症因子的产生而发挥神经保护作用。     

神经干细胞的发育分化及其对脑损伤的修复作用

成年动物能够产生新细胞的机制靠的就是干细胞(ｓｔｅｍｃｅｌｌｓ)。长期以来 ,人们一直认为成年动物脑内没有这种干细胞 ,如人脑内的神经细胞是终生存活的细胞 ,偶然遇到损伤造成脑内失去神经细胞的现象是永久性的 ,只能由神经胶质细胞所充填 ,其原因主要是成熟的神经元不能再分裂。1　胚胎脑神经发育的启示对中枢神经系统内存在干细胞的认识最早是从研究胚胎发育开始的。应用体外亲代分析研究证实 ,脑组织所含的神经元和神经胶质细胞均来自多潜能的前体细胞 ,例如Ｔｅｍｐｌｅ从 13天大鼠胚胎脑的隔区可取出少量细胞进行单个培养 ,观察到…     

巧用“火车钻隧道”类比转换 破解一道细胞分裂难题

<正>下面这道试题出自浙江省第11届高中生物学竞赛第6题,笔者在教学中偶遇之,颇感头疼。经过一番冥思苦想之后,终得如下巧妙的解决方法。原题在某生物细胞培养液中加入用~3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸,短暂培养一段时间后,洗去~3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸。使在该段时间内已处于DNA复制期不同阶段的全部细胞中DNA被~3H标记,而当时处于其他时期的细胞则不带标记。不同时间取样做细胞放射性自显影,找出正处于有丝分裂的分裂期细胞,计算其中带~3H标记的细胞占有丝分裂细胞的百分数。得到下图(图1A～D中横轴为时间,