实时荧光定量PCR技术的操作实践

采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBR(R) Green I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验.介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性.     

荧光定量PCR技术的原理与应用

荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上建立起来的一种利用标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.它特异性强、灵敏度高、操作简便、快速高效,在疾病诊断、食品检测、环境监测以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景.在阐述荧光定量PCR技术原理的基础上,系统论述了该技术在各方面的应用.     

PCR技术研究进展

PCR技术是近年发展起来的一种体外特异性扩增DNA片段的新技术,在分子生物学检测与研究中得到广泛应用.本文扼要介绍了PCR技术的基本原理,对PCR技术的方法及特点作了详细阐述,特别是PCR技术在分子生物学的理论研究,遗传病的产前诊断、突变基因的检测、法医学鉴定以及病毒和癌症检测等应用研究的新进展作了综述.预测PCR技术在分子生物学的各个领域的应用具有广阔的前景.     

水样中大肠菌数定量PCR检测实验设计

为不断完善环境微生物学实验课程建设,培养学生的实际样品分析能力,设计了一套检测水样中大肠菌数的实时荧光定量PCR(pdymerase chain reaction)实验。教学实践表明,实验方案切实可行,学生完成情况良好,学生了解并践行了实时荧光定量PCR技术检测环境样品中的大肠菌数的方法,切身体会到新实验技术的简便性与灵敏性,提升了学生的学习兴趣与创新能力。     

简单快速的多糖植物双生病毒核酸提取方法

以朱槿曲叶病毒病株为材料,结合总DNA提取的CTAB法和质粒提取的离心柱方法,发展一种简单快速的多糖植物双生病毒基因组核酸的提取方法,用聚合酶链式反应(PCR)和实时定量PCR予以验证。结果显示:与目前的2种常用方法相比,改进的方法在灵敏度、时间、价格和产率上都具有一定的优势,更适合于双生病毒基因组核酸的提取和检测应用。     

基于OBE理念的药物化学生物学实验教学案例设计

蛋白质热转移法是一种经济快速简便的确证小分子与靶标蛋白相互作用的实验技术,该技术通过实时荧光定量PCR仪测试小分子和靶标蛋白结合后蛋白质熔解温度的变化,确证活性小分子与靶蛋白质分子间的直接相互作用,为科研常用实验手段,但在本科药物化学生物学实验教学中却较少涉猎。基于教研结合,成果导向教育理念(OBE),设计了蛋白质热转移法的实验教学案例。通过该实验的训练有助于药学专业本科生掌握实时荧光定量PCR仪的使用,巩固利用靶标热稳定性改变确证靶标与药物小分子相互作用的原理,培养学生的药物创新意识、团队协作精神和药学实践能力。     

PCR技术研究进展

PCR技术是近年发展起来的一种体外特异性扩增DNA片段的新技术，在分子生物学检测与研究中得到广泛应用。本文扼要介绍了PCR技术的基本原理，对PCR技术的方法及特点作了详细阐述，特别是PCR技术在分子生物学的理论研究，遗传病的产前诊断，突变基因的检测，法医学鉴定以及病毒和癌症检测等应用研究的新进展作了综述。预测PCR技术在分子生物学的各个领域的应用具有广阔的前景。     

实时荧光定量PCR技术在实验教学中的应用

设计了"实时荧光定量PCR分析IPTG诱导EGFP基因在大肠杆菌中的异源表达"实验,研究IPTG诱导浓度和温度对EGFP基因表达的影响。结果表明,IPTG浓度为270μmol/L、诱导温度为16℃、诱导时间为18h的条件下,EGFP mRNA的表达量最大。通过该实验的学习,使学生掌握实时荧光定量PCR的相关实验原理、技术以及实时荧光定量PCR仪的使用,培养学生的科研能力和综合素质。     

基于PDANPs和T4 PNK、λexo生物传感技术建立

为找到一种快速灵敏检测miRNA-199的方法,分析纳米材料PDANPs表征,构建基于聚多巴胺纳米粒子(PDANPs)和T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)、λ核酸外切酶(λexo)的新型纳米生物传感技术检测miRNA-199平台,对影响生物传感技术主要因素进行优化,分析其线性范围和检测限;与茎环引物设计荧光定量PCR方法进行比对。结果显示:合成PDANPs直径300. 0±31. 7 nm,表面含有丰富的π电子;反应体系荧光强度与miRNA-199浓度的对数成线性关系,F=65. 183lg C+157. 3、R~2=0. 973;线性范围为10pmol/m L～100 nmol/m L;检出限值为4. 62 pmol/m L;与荧光定量PCR法比对结果偏倚为-0. 221 05 pmol/m L。结果表明,基于PDANPs和T4 PNK、λexo新型纳米生物传感技术可用于miRNA-199检测。     

实时荧光定量PCR技术在发育生物学实验

实时荧光定量PCR技术是生命科学研究常用实验技术,发育生物学实验是一门综合性很强的实验课程。为不断完善我院发育生物学实验课程建设,实现培养全面发展人才的教学目标,在本科生发育生物学实验课教学中设计了完整的实时荧光定量PCR实验内容。教学实践结果表明,该实验具有可行性,学生完成情况良好。所设计的实验加深了学生对于基本理论的理解,锻炼了学生的实验技能,激发了学生的学习积极性和创造性,有助于培养学生科学思维以及团队合作精神,获得了良好的教学效果。     

荧光定量法分析液体发酵中杂菌污染的实验设计

设计了利用荧光定量PCR法检测基因工程菌液体发酵过程中杂菌污染的实验方法。实验结果表明,与纯培养相比,在由重组大肠杆菌JM109、枯草芽孢杆菌和少量未知杂菌组成的多元共培养体系中,重组大肠杆菌JM109的生长和枯草芽孢杆菌的生长均被抑制。在发酵终点两种菌体在发酵液中的总量与大肠杆菌的初始接种量具有显著的相关性。通过将核酸快速提取、荧光定量PCR和微生物生长特性分析等多项实验技术有机结合,形成一个综合性实验项目并应用于本科生实验教学,提高了本科生生物学综合实验技能。     

凯普生物:国内领先的核酸分子诊断产品提供商

4月12日,广东凯普生物科技股份有限公司(以下简称“凯普生物”)在深交所创业板上市.首次发行股数量2250万股,每股发行价格为18.39元,发行市盈率为22.99倍,股票代码“300639”. 凯普生物是国内领先的核酸分子诊断产品提供商,专注于分子诊断试剂、分子诊断配套仪器等体外诊断相关产品的研发、生产和销售,并提供相关服务. 经过十余年的发展,公司基于拥有自主知识产权的导流杂交技术平台和应用国际通用的荧光PCR检测技术平台,研发了覆盖传染病检测和遗传病检测两大领域的系列产品,广泛应用于临床检测、大规模人口筛查和优生优育管理领域,“凯普”也因此受到客户和业界的广泛认可.     

FQ-PCR技术在小儿患者巨细胞病毒感染检测中的应用

目的:探讨荧光定量检测在小儿患者巨细胞病毒(HCMV)感染中的诊断价值.方法:对102例小儿患者,取尿液用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测.结果:102例标本中28例阳性,阳性率为27.5%.结论:荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、特异等优点,在HCMV感染的早期诊断、治疗方案选择以及疗效观察方面具有广泛的应用前景.     

生物芯片技术及其应用概述

生物芯片技术是 2 0世纪 80年代末才发展起来的 ,是一项融电子学、生命科学、物理学于一体的崭新技术。生物芯片技术的本质是生物信号的平行分析 ,它利用核酸分子杂交、蛋白亲和原理 ,通过荧光标记技术检测杂交或亲和与否 ,可迅速获得所需信息。它将生命的化学过程转化为一种可控的静态形式 ,用计算机对生物样品进行检测、分析 ,使许多生物化学和分子生物学实验能在非常小的空间范围 (指甲盖大小或“随身听”大小 )内 ,以非常快的速度 (几小时就可将一个人的不正常基因检测出来 )完成。1　生物芯片的种类生物芯片可分为DNA芯片、蛋白质芯…     

生物分子系统学研究中的RAPD技术

RAPD技术在Williams等人于1990年首先提出后,在检测DNA多态性方面受到了广泛的应用.RAPD技术以其简单、快速、信息量大等特点渗透在基因诊断,法医检测,生物药品的检验,生物种群关系的研究各个领域.以核酸为指标构建的生物系统进化树,不受主观因素的影响,避免了经典植物系统学的人为影响因素,因而受到广泛应用,在分子系统研究中出现了RFLP,RAPDDNA和RNA测序等分子生物学技术,其中RAPD技术不需要经过DNA分子克隆、分子杂交等繁锁步骤,也不需用放射性同位素显示,并且多态性检出率高,因而受到普遍关注.     

RAPD标记技术及其应用进展

RAPD标记技术是在PCR技术的基础上发展起来的一种运用随机引物扩增,寻找多态性DNA片段遗传标记的分子生物学技术,具有操作简便、敏感性高,容易发现DNA的多态性和通用性等优点.文章简单介绍了RAPD技术在物种的亲缘关系、种质资源的多样性、DNA指纹和种子纯度的鉴定、构建分子标记连锁图、基因定位和数量性状的选择、居群及种系遗传分析和遗传连锁图的构建等方面的应用进展.     

广西自然科学奖一等奖

正核酸及纳米材料辅助化学发光和荧光偏振信号放大分析新技术项目发现了碳纳米管可作为化学发光共振能量转移(CRET)的受体,解决了传统均相化学发光分析技术灵敏度低的问题,为构建高灵敏化学发光生物传感器提供了新思路。提出了纳米材料协同增强荧光偏振新原理,发展了荧光偏振信号放大新策略,突破了传统荧光偏振技术难以用于生物大分子检测的局限性,为复杂样品中痕量生物分子的高灵敏荧光偏振分析提供了新方法。建立了基于DNAzyme和切     

深圳市发酵精制重点实验室简介

深圳职业技术学院深圳市发酵精制检测重点实验室创建于1997年,2004年通过深圳市科技局组织的评估验收并正式挂牌。实验室占地面积2000m2,拥有荧光定量PCR仪、凝胶成像系统、倒置荧光显微镜、全自动发酵罐、分子蒸馏仪、超临界萃取、蛋白质分离纯化系统、     

实时定量PCR技术在本科实验教学中的应用

实时定量PCR技术是生命科学研究领域中的常用实验技术,为将其引入本科实验教学,课程组设计了"实时定量PCR分析不同浓度IPTG对启动子活性的调节作用"这一综合性实验内容。实验将RNA提取、反转录PCR、SYBR GreenⅠ染料法实时定量PCR和绝对定量分析串联起来,以获得启动子利用效率的变化情况,使学生通过实验教学能够深入、全面、系统地理解和掌握实时定量PCR技术,提高学生的综合能力和科研素养。     

基于核酸适配体的荧光传感器用于检测双酚A

双酚A(Biphenol A,BPA)是一类酚类环境雌激素,在塑料制品中广泛存在,长期接触BPA会对人体造成一系列的危害.基于核酸适配体与目标物之间的特异性识别等特点,结合SYBR Green I荧光染料在单双链DNA之间荧光信号的变化,构建了一种简单快速、灵敏和高选择性的适配体传感器用于BPA分子的检测.实验结果表明,在优化条件下,当BPA的浓度在10 nM-10~5 nM范围内时,荧光信号差值与目标物浓度的对数值呈良好的线性关系,最低检测限(LOD)可达3.261 nM.