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711.
Chao LIU Xian ZHANG Zhi-ming RAO Ming-long SHAO Le-le ZHANG Dan WU Zheng-hong XU Hui LI 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2015,(4)
目的:获得一株高产雄甾-4-烯-3,17-二酮( AD )的Mycobacterium neoaurum突变株。
创新点:获得了一株3-甾酮-Δ1-脱氢酶(KSDD)酶活缺陷型的高产 AD的诱变菌株 Mycobacterium neo-aurum ZADF-4,并采用菌落显色法筛选 KSDD酶活缺陷型M. neoaurum突变株。
方法:(1)诱变方法:采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术来处理出发菌株 M. neoaurum ZAD。ARTP 诱变条件如下:功率40 W ,气流量12.5 L/min,辐射距离1 cm,样品体积10μl,辐射时间为60、90、120、150和180 s;致死率统计优化后,最适辐射时间为150 s,致死率为90%~96%。(2)筛选方法:将ARTP诱变处理后的菌株点种在硝酸纤维滤膜上,30°C培养2 d,然后将长有菌落的滤膜小心取出并漂浮在4 mg/ml二氯靛酚(DCPIP)溶液(0.1 mmol/L磷酸缓冲液pH 7.0),30°C培养1 d直到全部菌落染成蓝色。然后将该滤膜取出,漂浮在250 mmol/L AD溶液(2%甲醇和50 mmol/L Tris pH 7.0缓冲液),室温放置15 min左右,观察菌落颜色变化。KSDD在底物 AD 存在时会脱氢产生雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)和H+,H+可以使被DCPIP染成蓝色的菌株褪色。因此,酶活缺陷型的菌株会仍保持蓝色,而酶活高的菌株会褪色为黄色(图3)。(3)对获得的潜在的高产AD菌株进行进一步的酶活检测以及产量验证,以期获得最优的突变株。
结论:获得了4株具有潜在的高产AD能力的菌株,其中,最优的突变株ZADF-4的KSDD酶活相较于出发菌株ZAD下降了81.2%(图4),活性胶也证明其KSDD酶活相较于出发菌株下降明显(图5)。薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)实验证明突变株 ZADF-4中,AD的产量有了明显的提高(图6和图7),提高到了(6.28±0.11) g/L, AD/ADD提高到8:1,AD的摩尔产率达到60.3%(表1)。对出发菌株ZAD和突变株ZADF-4的ksdd基因进行克隆和序列比对,发现ZADF-4的ksdd序列在5'端缺失9个核苷酸(atgttctac),导致3个氨基酸(MFY)的缺失;还发生了两个点突变,其中一个是无义突变(g.15a>6t),另一个是有义突变(g.413c>404t),并引起了相应位置上的氨基酸变化(p.138S>135L)。上述的基因突变及其引起的氨基酸序列的变化可能是引起M. neoaurum ZADF-4中KSDD酶活降低及AD产量提高的主要原因。 相似文献
创新点:获得了一株3-甾酮-Δ1-脱氢酶(KSDD)酶活缺陷型的高产 AD的诱变菌株 Mycobacterium neo-aurum ZADF-4,并采用菌落显色法筛选 KSDD酶活缺陷型M. neoaurum突变株。
方法:(1)诱变方法:采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术来处理出发菌株 M. neoaurum ZAD。ARTP 诱变条件如下:功率40 W ,气流量12.5 L/min,辐射距离1 cm,样品体积10μl,辐射时间为60、90、120、150和180 s;致死率统计优化后,最适辐射时间为150 s,致死率为90%~96%。(2)筛选方法:将ARTP诱变处理后的菌株点种在硝酸纤维滤膜上,30°C培养2 d,然后将长有菌落的滤膜小心取出并漂浮在4 mg/ml二氯靛酚(DCPIP)溶液(0.1 mmol/L磷酸缓冲液pH 7.0),30°C培养1 d直到全部菌落染成蓝色。然后将该滤膜取出,漂浮在250 mmol/L AD溶液(2%甲醇和50 mmol/L Tris pH 7.0缓冲液),室温放置15 min左右,观察菌落颜色变化。KSDD在底物 AD 存在时会脱氢产生雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)和H+,H+可以使被DCPIP染成蓝色的菌株褪色。因此,酶活缺陷型的菌株会仍保持蓝色,而酶活高的菌株会褪色为黄色(图3)。(3)对获得的潜在的高产AD菌株进行进一步的酶活检测以及产量验证,以期获得最优的突变株。
结论:获得了4株具有潜在的高产AD能力的菌株,其中,最优的突变株ZADF-4的KSDD酶活相较于出发菌株ZAD下降了81.2%(图4),活性胶也证明其KSDD酶活相较于出发菌株下降明显(图5)。薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)实验证明突变株 ZADF-4中,AD的产量有了明显的提高(图6和图7),提高到了(6.28±0.11) g/L, AD/ADD提高到8:1,AD的摩尔产率达到60.3%(表1)。对出发菌株ZAD和突变株ZADF-4的ksdd基因进行克隆和序列比对,发现ZADF-4的ksdd序列在5'端缺失9个核苷酸(atgttctac),导致3个氨基酸(MFY)的缺失;还发生了两个点突变,其中一个是无义突变(g.15a>6t),另一个是有义突变(g.413c>404t),并引起了相应位置上的氨基酸变化(p.138S>135L)。上述的基因突变及其引起的氨基酸序列的变化可能是引起M. neoaurum ZADF-4中KSDD酶活降低及AD产量提高的主要原因。 相似文献
712.
采用无溶剂-顶空-气相色谱直接测定盐酸左氧氟沙星中残留溶剂乙醇、甲苯、二甲基亚砜(DMSO)等。各残留溶剂的检出限分别在0.007-0.032μg,6次测定的相对标准偏差RSD在1.84%-1.92%,加标回收在90.9%-110%。方法简便、快速、灵敏,可应用于其他药品中残留溶剂的分析。 相似文献
713.
饶文谊 《黔南民族师范学院学报》2011,31(1):12-15
第二次鸦片战争开始后,科考末第的莫友芝出京南下,目睹英法列强的暴行及清政府的腐败无能,愤而写下七律《有感二首》。诗中表达了对国家命运、时局的深切忧思,同时对不战而逃、丧权辱国的清廷统治者进行了无情的鞭挞,对英法美俄的侵略行为表示了极大的愤恨,表现了诗人忧国伤时的爱国主义情怀。 相似文献
714.
饶睿 《合肥教育学院学报》2011,(2):22-25,38
借助技术创新扩散资料,对各肥市高新区实地调查,通过分析技求的空间扩散过程,认为技术势能、空间距离、扩散通道和扩散环境是影响技术创新扩散的主要因素,以合芜蚌自主创新综合配套改革试验区为例,分析了高技术企业的区位要求,为下一步优化试验区企业布局的方案提供有力的理论支撑。 相似文献
715.
选用非离子表面活性剂Triton X-114通过浊点萃取的方法对水样中的硝基酚类污染物进行了有效的分离和富集,并通过高效液相色谱法测定了污染物的含量.两种污染物对硝基苯酚和2,4-二硝基苯酚分别在6.9-1380 ng/mL和36.8-7360 ng/mL的浓度范围具有良好的线性相关,对硝基苯酚的最小检出限(LOD)和最低定量限(LOQ)分别为0.145ng/mL和0.484 ng/mL,2,4-二硝基苯酚的最小检出限(LOD)和最低定量限(LOQ)分别为1.104 ng/mL和3.680ng/mL. 相似文献
716.
了解CBA中国前锋比赛状况,为中国前锋训练与比赛提供一些参考。通过临场技术统计和比赛录像,对2009-2010年CBA联赛国内优秀前锋与外援前锋各项技术指标进行定量与定性分析。结果显示,中国优秀前锋在进攻能力方面整体不如对方,缺乏全面的进攻技术,非球队进攻首选,主要表现在全场比赛中投篮出手数少,最终导致得分与对方有显著性差异。在防守技术及篮板球的控制上与对方存在较大差距,主要表现在脚步移动慢,身体对抗差,抢篮板能力弱。结论:中国前锋攻防技术与外援前锋有较大的差距。 相似文献
717.
当代大学生人际关系初探 总被引:1,自引:0,他引:1
饶崛 《湖北广播电视大学学报》2011,31(10):41-42
社会的进步与变革使得人际关系在社会生活中扮演着越来越重要的角色。本文从大学生自身特点及学校、家庭、社会等因素分析大学生人际关系现状,并提出了关于帮助大学生建立良好人际关系的几点策略和思考。 相似文献
718.
采用月桂酸与二乙醇胺为原料(n(月桂酸):n(二乙醇胺)=1:2)合成一种非离子表面活性剂烷基醇酰胺.通过GC-MS检测月桂酸二乙醇酰胺在反应体系中的百分含量,考察了反应温度、反应时间对质量分数的影响,分析了反应过程中体系的折光率的变化,对反应产物进行性能测试,并将其和国家标准GB/T15046—94进行对比.结果表明,常压下合成最佳条件为反应温度170~180℃,反应时间2~3h,所得产品性能符合GB/T15046—94,考察体系折光率可以判定反应大致进程. 相似文献
719.
"心理台风眼效应"描述了民众在重大突发事件中的非理性恐慌心理和行为,是中国科学院心理研究所李纾及其团队在"5·12"汶川特大地震后发现并命名的现象。在2020年新冠肺炎疫情期间,调查身居5类疫情不同风险地区(极低风险地区、低风险地区、中风险地区、中高风险地区和高风险地区)的人群对于武汉市疫情的安全担忧和风险知觉,又发现了"心理台风眼效应",即:国外受测者反而比国内受测者对武汉市疫情表现出更多的安全担忧或害怕;随着所处地区风险水平的升高(从极低风险地区到极高风险地区),民众对武汉市疫情的风险知觉反而降低。也就是说,在空间上越接近高风险地点的民众心理越平静,越远离高风险地点的民众反而更对高风险地点的风险感到恐慌。基于"心理台风眼效应"的研究发现,提出4条有针对性的防范建议。 相似文献
720.
本文从经济社会发展对工商管理类专业人才需求的实际出发,阐述了创业导向的工商管理类专业应用型人才培养模式的内涵,并就创业导向的工商管理类专业人才培养模式的建设提出了一系列改革措施。 相似文献