玉带凤蝶铁蛋白亚基的鉴定及组织表达谱分析

生物体内的铁蛋白Ferritin在储存和释放铁离子、抗氧化胁迫和病菌侵染过程中发挥着重要作用.为探索玉带凤蝶(Papilio polytes)铁蛋白的功能,本研究开展了对玉带凤蝶铁蛋白亚基的鉴定,分析其组织表达谱和铁离子胁迫下的表达水平.基于玉带凤蝶基因组数据库,鉴定了铁蛋白轻链亚基(PpFerLCH)和重链亚基(PpFerHCH)基因并且克隆出2个基因的开放阅读框(ORF);利用生物信息学,对其结构域以及与其他物种的进化关系进行分析;采用实时荧光定量PCR技术分析两个亚基在不同组织以及铁离子胁迫下的表达水平.玉带凤蝶PpFerLCH基因cDNA全长为1207 bp,其开放阅读框为696 bp,编码231个氨基酸,预测其蛋白分子量为26.5 kDa,理论等电点为5.64;PpFerHCH基因cDNA全长为1 300 bp,ORF为636 bp,编码211个氨基酸,预测其蛋白分子量为23.7 kDa,理论等电点为6.53.结构域分析显示PpFerLCH和PpFerHCH都含有一个保守的铁蛋白结构域,而PpFerHCH具有Ferrihydrite nucleation center.系统发育树分析揭示PpFerLCH主要与烟草天蛾(Manduca sexta)以及大蜡螟(Galleria mellonella)铁蛋白重链亚基保持较高的同源性,而PpFerHCH与烟草天蛾具有较近的亲缘关系.实时荧光定量PCR分析表明PpFerLCH和PpFerHCH在玉带凤蝶的中肠和马氏管中表达量较高,而在其他组织表达量相对较低.此外,FeCl_3刺激24以后,PpFerLCH和PpFerHCH能够被显著诱导上调表达.本研究为进一步研究玉带凤蝶铁蛋白的功能奠定基础.     

水稻叶片失绿过程中Rubisco酶活性与其蛋白亚基的变化

本研究应用１４Ｃ放射技术对１，５一二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（Ｒｕｂｉｓｃｏ）活性进行了测定，并通过 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ不连续电泳凝胶技术对其蛋白亚基进行分离研究．结果发现：Ｒｕｂｉｓｃｏ的大亚基（ＬＳ）和小亚基（ＳＳ）在水稻叶片失绿过程中相对稳定，而其活性却有明显不同．说明 Ｒｕｂｉｓｃｏ在光合作用过程中的活性，除与自身的分子结构稳定性有关外，还与叶绿体中其他调节蛋白的存在密切相关．     

夏大豆提取蛋白质的组分及其亚基组构成变异分析

选取在山东省济宁地区大豆产区曾经或正在生产上推广使用的35个品种为供试品种．采用SDS-PAGE电泳技术测定提取蛋白质11S组分、7s组分、亚基组和亚基的相对含量以及亚基数量．研究其变异特点．在济宁地区同一条件下的结果表明：（1）1IS和7s组分的亚基总数变异范围为15-23个,平均为18．03个．7s组分亚基数量变异范围为3-7个,平均4．49个,有5个亚基组存在不同程度的缺失．11S组分亚基数量变异范围为11-19个,平均13．54个,没有亚基组缺失现象．（2）7s组分相对含量的变异范围为14．78-27．54％,平均为22．07％;11S组分的变异范围为49．04-63．52％,平均为59．77％．11S／7S比值变异范围为2．12-4．11,平均为2．77．（3）7s组分6个亚基组的相对含量平均为4．38-6．62％,11S组分4个亚基组平均相对含量为7．02-21．72％．（4）7s组分相对含量与11S组分之间有微弱的正相关（r=0．08）,7S组分相对含量与11S／7S比值之间存在极显著的负相关（r=-0．94）．而11S组分相对含量与11S／7S比值之间存在微弱的正相关（r=0．19）．7s的6个亚基组中相邻的2个亚基组之间都存在显著或极显著的负相关（r=-0．38--0．85）．11S组分的相邻亚基组之间存在负相关关系（r=-0．78--0．95）,不相邻的亚基组之间相关关系微弱．     

揭秘细胞内“蛋白质合成工厂”——核糖体

从核糖体的发现、组成、类别、结构、功能诸方面进行概述,介绍核糖体的研究与新型抗生素生产的关系及2009年诺贝尔化学奖的研究成果.     

运动对成长期骨骼肌神经肌肉接头N乙酰胆碱受体表达的影响

研究目的:通过分析骨骼肌神经肌肉接头(NMJ)N乙酰胆碱受体(nAChR)亚基在成长期(离乳-性成熟)的表达特征,了解NMJ发育过程中的变化及运动对这一过程的影响.研究方法:对3周龄SD雄性大鼠进行运动增强(跑台运动)和运动减弱(尾部悬吊)干预,测定γ-、ε-、δ-nAChR mRNA在3～8周龄的表达水平.结果:1)大鼠腓肠肌γ-、ε-、δ-nAChR的表达水平在出生后3～5周迅速下降,至5周龄时仅有微量的表达;2)悬吊组γ-nAChR在5周龄时表达水平高于对照组;运动组y-nAChR在8周龄时表达水平低于对照组;3)ε-和δ-nAChR表达水平在组间无显著性差异.结论:骨骼肌NMJ的发育在出生后早期具有典型的敏感期;运动训练可以促进胚胎型γ-nAChR的消退,限制运动则显著延缓这一过程;成熟后的NMJ具有一定的结构稳定性.     

跑台训练对大鼠窦房结ClC-2型内向整流氯离子通道的影响

目的探讨大鼠2周力竭跑台训练对心脏窦房结ClC-2型内向整流氯离子通道的影响。方法 SD大鼠分为对照组(C组)、一次力竭组(O组)、2周反复力竭组(R组),每组10只。C组大鼠不进行任何运动训练,O组大鼠在正常饲养2周后,进行1次跑台训练至力竭,R组每天进行1次跑台训练,训练时长为2周。训练组大鼠分别于运动后0 h及24 h取材,O组以O-0h和O-24h命名,R组以R-0h和R-24h命名。用实时荧光定量PCR和Western Blot技术测定ClC-2通道亚基ClC-2 mRNA及蛋白质表达,用全细胞膜片钳技术测定通道电流密度。结果(1)R-0h及R-24h组ClC-2 mRNA及蛋白质表达明显低于C组及O-0h组(P<0.01)。(2)R-0h及R-24h组ICl,ir通道电流密度分别为-2.35±0.22p A/p F和-2.61±0.20 p A/p F,比较明显地低于C组及O-0h组的3.99±0.35p A/p F和3.50±0.20p A/p F(P<0.01)。结论 2周跑台训练可引起大鼠心脏窦房结细胞膜ClC-2型内向整流氯离子通道亚基ClC-2基因表达及电流密度减少,这可能成为运动引发窦房结功能障碍的离子通道机制之一。     

乳酸脱氢酶及其同工酶在游泳选材中的应用

乳酸脱氢酶（LDH）同工酶含量的差异影响运动员机体的有氧和无氧代谢能力，而LDH同工酶的合成受遗传基因调控，为此我们对青少年游泳运动员进行了LDH同工酶谱的调查，结果是长距离游泳项目运动员血清LDH1和LDH2百分含量相对较高，中距离项目运动员LDH4和LDH5百分含量相对较高。LDH同工酶百分含量可作为中距离和长距离游泳运动员的选材指标之一。     

蒺藜苜蓿液泡膜H~+-ATPase A亚基cDNA的电子克隆与序列分析

根据物种间同源基因相对保守的特点,利用生物信息学的方法,以大豆液泡膜H+-ATPase A亚基基因cDNA序列为信息探针,通过电子克隆得到了蒺藜苜蓿液泡膜H+-ATPase A亚基cDNA,命名为MtVHA-A。该cD-NA长2750bp,其中含5’非翻译区220bp,开放阅读框1875bp,3’非翻译区655bp,其推断的编码产物由624个氨基酸组成,理论分子量为69kDa,与蜜柑、番茄、拟南芥、棉花等植物中液泡膜H+-ATPase A亚基氨基酸序列同源性高达90%以上,且有很高的功能区段保守性。     

缺氧相关因子HIF-1α、AQP-1表达与宫颈癌血管生成关系的研究

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（HIF一1α）、水通道蛋白-1（aquaporin—1,AQP-1）表达对宫颈癌血管生成的作用。方法：应用免疫组织化学方法检测54例宫颈鳞状细胞癌中HIF-1a、AQP-1的表达,利用CD105标记肿瘤微血管密度。结果：HIF-1α在宫颈癌中的阳性表达率为50％,表达水平与分化程度、浸润深度明显相关（r=-0．674P〈0．05和r=0．897P〈0．001）,与临床分期、肿瘤体积、淋巴结转移无明显相关（P〉0．05）;AQP-1在子宫颈癌中的表达率为87．1％,表达水平与肿瘤体积、临床分期明显相关（r=0．989P〈0．05和r=0．807 P〈0．001）,与分化程度、淋巴结转移、浸润深度之间无明显相关（P〉0．05）;微血管密度与肿瘤体积、浸润深度之间存在明显相关（r=0．609P〈0．05和r=0．845P〈0．001）,与临床分期、分化程度、淋巴结转移之间无明显相关（P〉0．05）;AQP-1的表达水平与微血管密度之间不存在明显相关（P〉0．05）;HIF-1a的表达水平与微血管密度之间存在明显相关（r=0．989P〈0．05）;AQP-1的表达水平与HIF-1α的表达水平之间存在明显相关（r=0．648P〈0．05）。结论：HIF—1α、AQP-1都参与宫颈癌缺氧诱导新生血管过程,并且与微血管密度密切相关。其中HIF-1α发挥重要作用。     

重新认识“酶”

酶是活细胞产生的一类具有催化作用的有机物。1926年美国科学家萨姆纳从刀豆种子中提取了脲酶,又用多种方法证明了脲酶是蛋白质。后来科学家又相继获得了胃蛋白酶、胰蛋白酶等许多酶的结晶,并证明这些酶都是蛋白质。直到20世纪80年代,美国科学家切赫和奥特曼发现少数RNA也具有催化作用。人类对酶的概念又有了新的认识。