日本对虾β-actin基因的克隆表达与纯化

利用RT-PCR技术从日本对虾中克隆到β-actin基因的cDNA,通过双酶切将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞,获得阳性克隆.4℃下IPTG诱导表达,Glutathione Sepharose 4B纯化后获得高纯度的β-actin蛋白.①     

肠道菌群结构多样性初筛研究

目的：探讨研究肠道菌群结构的初筛方法,为进行有效、高质量的高通量测序奠定基础.方法：用粪便采样器采集健康儿童粪便进行粪便标本预处理后,采用酚—氯仿方法提取样本菌群基因组DNA,并进行16S rDNAV3区片段PCR扩增,扩增产物用变性梯度凝胶电泳法（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）检测分析.结果：采用该方法成功地扩增出16S rDNA V3区230bp的片段,经DGGE的方法可以比较出不同儿童粪便样本菌群结构的不同.结论：基于16S rDNA V3区的PCR-DGGE技术能够应用于研究肠道微生物多样性,对于肠道微生物的研究起到了初筛的作用.     

肠三叶因子在大鼠海马内的表达

目的：探讨肠三叶因子在正常大鼠海马内的定位。方法：选择6只成年雄性SD大鼠,3只立即断头,并于冰块上快速分离海马,用于提取组织总RNA,RT—PCR检测肠三叶因子（intestinal refoil actor,ITF）mRNA转录情况。另外3只bouin’s固定,石蜡包埋,行ITF免疫组化染色,检测ITF在海马内的表达。结果：海马CAl、cA2和CA3区内均有ITF阳性信号表达,阳性细胞多分布于锥体细胞层。CA1区阳性信号较弱、CA2、CA3区较强;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）显示海马有明显的ITF mRNA表达。结论：海马能够自身合成ITF,1TF免疫阳性产物主要位于CA1、CA2和CA3区的神经元胞体和部分纤维。     

生理状态下外周血白细胞干扰素、白细胞介素2、白细胞介素4和白细胞介素10基因表达的荧光定量PCR检测

目的:建立干扰素-γ(IFN-γ),白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-4(IL-4),白细胞介素-10(IL-10)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员生理状态下外周血白细胞IFNγ-、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的表达。结果:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞IFNγ-、IL-2、IL-4和IL-10的mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99。结论:从分子水平为检测运动过程中细胞因子的改变、评估运动员免疫机能状态提供了简易和准确的检测手段。     

大鼠游泳运动后骨骼肌PGC-1αmRNA表达的时相性变化

采用实验法,检测一次长时游泳运动对大鼠骨骼肌PGC-1αmRNA表达水平的影响,以及运动后骨骼肌PGC-1αmRNA表达的时相性变化规律。将SD雄性大鼠随机分为对照组、运动后3 h组、运动后6 h组1、2 h组1、8 h组和24 h组、运动4 d后18 h组。采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量PCR方法,测定各组大鼠骨骼肌PGC-1αmRNA表达水平。结果:PGC-1α基因在运动后6 h组、运动4 d后18 h组的表达水平高于对照组及其他组。结论:PGC-1αmRNA在游泳运动后表达的改变是有时相性的;游泳运动可以刺激骨骼肌线粒体生物发生相关因子的表达,从而调节线粒体的功能。     

快速诊断小鹅瘟PCR方法的优化建立

为建立快速诊断小鹅瘟的PCR方法,根据已发表的GPV主要结构蛋白VP3基因序列,经多序列比对和Oligo6．0软件分析设计特异性PCR引物。以微量法提取病鹅肝组织DNA,优化PCR反应引物退火温度、循环次数和鉴定其特异性,并与酚氯仿法和煮沸法进行同步对比研究。结果显示,建立的PCR检测方法能够特异性检测病鹅肝组织中GPV的核酸,其扩增片段大小为343bp,最佳退火温度为58℃,最佳循环次数为35次。微量法提取的病毒核酸PCR检测灵敏度分别是酚氯仿法的50倍和煮沸法的2500倍。该PCR检测方法不与鹅副黏病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、鸭瘟病毒以及健康鹅肝组织发生交叉反应。本研究建立的GPVPCR检测方法能够快速诊断小鹅瘟。     

PCR技术在高中生物中的重要作用

<正>PCR,即聚合酶链式反应的缩写,是由美国"西特斯"(Cetus)生物技术公司的穆里斯(K.Mullis)等人于1988年发明的一种DNA(包括RNA)体外扩增技术,能在短时间内将极微量的特定核酸片段精确复制出成百万份的拷贝。在PCR技术问世前,要获得一个靶基因,必须依赖克隆技术,以活的生物体作为复制遗传物质的载体,先建立基因组文库,再从成千上万的菌落中通过Southernblot杂交筛选出含有靶基因的克隆,既费时又     

关于“利用PCR技术扩增目的基因”的教学建议

正PCR技术是生物学研究上一项非常重要的技术,它是体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,只需在eppendorf离心管中建立反应,经数小时后,就能将极其微量的目的基因或某一特定DNA片段扩增数十万倍,甚至千百万倍.这项技术不仅可以用于获取和扩增目的基因,而且在癌症治疗的监控、临床医疗诊断以及法医学等众多领域都有着重要的用途,如此一项有重要作用的技术,笔者认为高中生必要理解和掌握这项技术.但是实际情况是学生对于PCR技术的掌握情况并不是很理想,对PCR技术原理和过程的掌握不够到位.究其原因,一方面由于PCR扩增DNA技术所需设备昂贵,一般中学很少具备动手操作的条件,另一方面PCR技术在高中教材中仅有少     

浅谈PCR技术

本文就高中生物学教学中涉及的PCR技术的问题进行拓展介绍。