PCR技术在食品检验中的应用

近年来,由微生物及其产生的各类毒素引发的食品污染层出不穷,PCR技术以其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点,广泛地应用在食品微生物检测的各个领域,尤其对培养困难的细茵检测和抗原结构复杂的细菌鉴定方面。简要介绍了几种PCR方法的原理,以及其在食品微生物检测中的应用情况。     

禽肉在储存过程中菌群结构变化研究

研究禽肉储存过程中菌群的变化,为其长期贮存奠定理论基础.采用酚氯仿异戊醇法提取禽肉中菌群基因组DNA,并通过PCR扩增及DGGE电泳技术探讨其随保存时间延长,菌群结构变化情况.结果表明,成功扩增了菌群基因组DNA,为230bp.DGGE电泳结果发现,DGGE分子指纹图谱上条带存在显著的差异,用bionumberics软件分析DGGE结果,发现第一天和第二天样本的相似度最高为0.75,第三天与第一天相比,相似度为0.47,第四天与第三天相比,相似度又下降为0.16,表明禽肉在储存过程中不断有新的菌种出现,但是具体是什么菌种有待于高通量测序分析.     

花臭蛙线粒体DNA 12S及16S rRNA序列的测定

线粒体基因是动物起源进化及群体遗传分析的理想研究对象,其中的12S和16SrRNA这两个保守序列研究比较广泛。本文以花臭蛙(Odorrana schmackeri)为实验材料,采用TIANamp Genomic DNA Kit血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取花臭蛙肌肉组织基因组DNA,并利用聚合酶链式反应(PCR)技术进行扩增得到线粒体上12S和16SrRNA的保守片段,采用琼脂糖凝胶电泳技术对扩增产物进行检测,最后对两段基因序列进行测定并进一步分析,分别得到347bp和380bp的碱基序列。     

“PCR技术的原理和应用”高三复习课教学设计

PCR技术在《生物学·选择性必修3·生物技术与工程》模块中有多方面应用,如基因工程中目的基因的扩增,胚胎工程中的性别鉴定等。PCR技术也是必修模块DNA复制相关内容在体外应用的良好实例,是分子生物学中广泛应用的重要技术。借助真实情境引入实验设计,并通过PCR模拟加样和电泳过程加深学生对PCR技术的认识和理解。     

转基因棉花中棉41多重PCR体系的建立

利用多重PCR建立转基因棉花中棉41外源基因的检测体系.多重PCR技术的关键在于多重PCR反应条件的优化,本文从多重引物组合、PCR反应体系、PCR反应条件这三个方面对转基因棉花多重PCR反应进行优化,建立了扩增效率较高的中棉41的六重PCR反应体系,优化后的体系为HotstarTaq DNA聚合酶用量为1.25 U/50 μL,镁离子的终浓度为3.5 mM,dNTP的终浓度为400 μM,BSA(10mg/mL)的加入量为2μL,选取58℃为反应扩增的退火温度.利用优化的多重PCR体系特异性地检测到转基因棉花中棉41中的外源基因启动子CaMV 35S、终止子TNOS、报告基因NPTII和抗虫基因CrylAc.     

创新检验模式 建研究型科室——中国人民解放军总医院生化科

中国人民解放军总医院（301医院）生化科具有结构合理的学科人才梯队,他们适应临床实际需求,积极开展新技术研究、新业务推广,目前承担着近百项临床血液检测任务,包括常规生化分析、免疫化学分析、干化学分析、肿瘤标志物分析、实时荧光定量PCR和生物芯片等分析技术。作为连接基础生物化学、     

常压模拟高住低练结合高糖高脂饲料对大鼠心脏组织肾素-血管紧张素系统基因表达(RAS)的影响

目的: 检测高住低练训练方法和高糖高脂饮食对肾素血管紧张素系统(RAS)的基因表达的影响,从而提出治疗新血管疾病的新方法.方法:高住低练和高糖高脂饮食对大鼠心脏RAS基因表达的影响是通过real time PCR实现的,这种方法广泛被人们使用并且已经成为研究基因表达最为有效的方法.结果:我们的结果表明与安静组相比,高住低练和高糖高脂饮食可以显著降低ACE基因表达,其中高住低练组与高糖高脂高住低练组下调最多,血管紧张素原(AGT)的基因表达在低住低练组和高住安静组轻微上调,其他实验组都下调,其中高住低练组与高糖高脂高住低练组下调最多.与此相反的是,以上两种条件可以显著上调血管紧张素II的I型受体(AT1)基因的表达,高住低练组与高糖高脂高住低练组下调最多.结论:表明合理的训练方法(海拔2500 m的高原环境下居住,适宜的训练强度)和高糖高脂饮食可以改善优秀运动员的有氧运动能力.同时高住低练的训练方法可以抑制高糖高脂饲料引起的胰岛素抵抗等症状.     

药用植物雷公藤RAPD-PCR反应体系优化研究

采用单因子梯度试验法对影响雷公藤RAPD—PCIK反应的Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶的用量及DNA模板浓度进行了筛选。结果表明获得清晰、重复性高的雷公藤RAPD-PCR扩增条件为：20μL PCR反应体积中,2．0mmol·L^-1 MgCl2,0．2mmol·L^-1 dNTPs,0．2μmol·L^-1引物,50ng模板DNA,1UTaq DNA聚合酶。     

由一道高考题梳理基因工程考点“引物”相关知识

基因工程是当前发展最快的一项生物技术,在生物技术中处于核心地位。目的基因是基因工程操作的核心对象,基因工程的第一步是获取与制备目的基因。当前获取目的基因最常用的方式是PCR技术,关键是引物的设计。引物设计原则多,为实现不同目的,引物设计又具有多样性。高考以及各地模拟考试中基因工程是重要的考点,引物是考查的热点,考查变化多样,难度较大。以2023年高考浙江省6月选考生物学试题第19题为例,分析基因工程中“引物”的相关应用。     

新课标生物实验常规试剂盒介绍——普通PCR试剂盒

本试剂盒根据PCR反应原理,精确地提供PCR反应所需的全部试剂(包括Taq DNA聚合酶、缓冲液、MgCl2、dNTPs、引物Ⅰ、引物Ⅱ、模板质