DNA分子体外重组实验教学的两种优选方案

DNA分子体外重组技术是基因工程的核心技术之一。国内许多高校在开设这一技术的实验教学中都采用了TA克隆法这一比较落后的实验方法。为了使学生更好地掌握DNA分子体外重组技术,增强技术的实用性,有必要在实验教学内容上作出调整。姊妹PCR克隆法和平末端克隆法是2种简单、经济、重复性好的克隆方法,其中姊妹PCR克隆法不需对目的基因进行酶切处理,即能得到具有各种黏性末端的DNA分子,可直接定向克隆到经相应内切酶消化的载体中。这2种方法不仅能够满足实验教学的需要,也适用于科研工作中各类载体的构建。     

3种土壤微生物基因组DNA提取方法的比较

该实验通过SDS高盐法（常规法）、SDS高盐法（改良法）和Soil gDNA Kit法提取土壤微生物基因组DNA,用DNA Nanophotometer仪测定样本DNA的纯度和浓度,以确定最佳提取方法.结果表明,用SDS高盐法（常规法）、SDS高盐法（改良法）和Soil gDNA Kit法和土壤微生物基因组DNA的浓度分别为41.45 ng/μl、96.48 ng/μl和58.40 ng/μl,纯度（OD260/OD280）分别1.45、1.57和1.82.由结果可知,改良法提取DNA的浓度最高,而Soil gDNA Kit法的纯度最高,但其成本较高,因此,SDS高盐法（改良法）是节省成本且适合提取大批量土壤微生物基因组DNA的方法,今后在提取DNA过程中进一步优化,以提高其纯度.     

引物——生物高考命题的新视点

<正>引物是什么?引物是从哪里来的?引物的碱基序列如何确定?引物有哪些特点?关于引物的基础知识,高中生物教材选修3除了"引物"两字外没有其他任何文字叙述,教学参考资料及教辅资料对引物也没有作相关介绍,师生在这方面的认知可谓空白。而近年来各地调研或高考试题常涉及"引物"类问题,如江苏省2008年生物高考第32题首次考查了有关引物方面的知识,2011年江苏省高考第33题则更多地考查了有关引物的知识。"引物"俨然成为高考命题的新材料、新视点,因此对引物知识的全面了解就显得很有必要。     

辣椒SRAP-PCR反应体系优化与引物筛选

本研究以辣椒基因组DNA为模板,优化辣椒SRAP反应体系中的参数,建立了一套适用于辣椒的SRAP-PCR最佳反应体系。在25μL反应体系中,模板DNA 50 ng、上下游引物各0.1μmol/L、dNTPs 0.1mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U、Mg2+浓度为2.0 mmol/L。扩增程序为:94℃3 min;94℃30 s、35℃30 s、72℃1.5 min,5 cycles;94℃30 s、54℃30 s、72℃30 s,35 cycles;72℃10 min,用2%琼脂糖凝胶电泳和8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增结果。利用该优化体系筛选引物,筛选出条带清晰、重复性好的15对SRAP引物组合,验证了体系的实用性。     

转基因抗虫棉田杂草中外源基因成分的PCR检测

采用定性PCR的方法,以转基因植物常用的调控序列CaMV35S启动子、NOS终止子及报告基因gus、选择标记基因nptⅡ的序列设计特异引物;以转基因抗虫棉田里的杂草基因组DNA为模板,对棉田杂草进行转基因成分的检测。发现在检测的五种棉田杂草中两种存在转基因成分,初步说明转基因抗虫棉的种植过程中存在转基因逃逸现象。     

蚕微卫星DNA的体外自我扩增条件初步研究

采用一种类似PCR的基因组自我引发PCR(GSP—PCR)法，初步研究了家蚕、野蚕、天蚕、蓖麻蚕和柞蚕的微卫星DNA的体外基因组自我引发PCR扩增的条件。结果发现。浓度为100ng/μl的基因组DNA在100℃变性15min后，与等量的同浓度的未变性的DNA混合作为模板。在80m扩增体系中[含0．2mM dNTPs、50mM KCl、10mM Tris—HCl(pH9．0)、4mM MgCl2、1．25U Tap plymerase]，加入1μl此混合模板，在92℃，1min→55℃，2min→72℃，2min，30→90次循环的扩增条件下，成功地得到了PCR产物。基因组DNA的适宜浓度为1．25ng/μl反应体系；GSP—PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后的部分片段经回收后，在同样条件下，30—60个循环可得到同样大小范围的产物。GSP—PCR产物经6％的变性测序胶电泳，得到典型的梯状带，表明为微卫星DNA。     

SRY基因的分子机制及其在奶牛性别控制中的应用

综述了性别决定的生物学机制和性别决定基因（SRY）的定位、结构、功能、表达特异性及其作用的分子机制,在此基础上阐述了SRY在奶牛精子性别控制与胚胎性别鉴定中的应用,着重介绍了用于胚胎鉴定的PCR扩增法和DNA探针法。     

mRNA差异显示技术及其改进

mRNA差异显示技术是近几年发展起来的分离与克隆新基因的方法 ,在植物学上主要用于研究和克隆与植物抗逆、抗病相关基因。文章对该技术的优势与不足及近些年的主要改进进行分析综述