DNA片段的PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳实验组织与安排

DNA扩增和DNA琼脂糖凝胶电泳实验首次推广到中学课程教学中。由于中学课时有限、班级人数多、试剂微量、试剂价格较高等诸多实际情况的制约,教学实验组织、指导和安排显得更为重要。在川布兰公司的大力支持下,2009年我校9个班近400个学生顺利完成了此项实验。每班40人共分8个小组,先做琼脂糖凝胶电泳实验(用上一个班所扩增的样品),再做DNA片段的PCR扩增实验,最后观察核酸条带。扩增前模板质粒由学生加入,在实验准备和安排上,尽量给每一个学生操作的机会。此次实验所用试剂盒为川布兰公司提供,总计费用878元。     

聚合酶链式反应（PCR）技术

聚合酶链式反应（PCR）技术，是八十年代中期发展起来的新技术，它的诞生改变了分子生物学研究的指导方法，本综述了PCR技术的原理，操作方法及其在许多领域的广泛应用，随着PCR技术的进一步发展和完善，将进一步推动分子生物学的理论研究，其应用领域。     

荧光PCR基因分析仪的快速并行温度控制

提出一种模仿人工经验的智能升降温控制系统，成功地应用于荧光PCR基因分析仪，同时也给出DS18B20温度传感器的详细用法及程序。     

用PCR技术筛选小分子DNA重组菌落的研究

为解决小分子DNA与质粒载体连接，转化入大肠杆菌后，蓝白斑不能很好鉴别非重组菌落与重组菌落的问题，本实验拟建立用PCR技术快速筛选小分子DNA重组菌落的方法，并对比研究特异引物扩增和通用引物扩增的可靠性。     

过度负荷运动对大鼠空间学习记忆能力及海马生长相关蛋白的影响

目的:建立过度负荷运动模型,探讨过度负荷运动对大鼠空间学习记忆能力和海马的生长相关蛋白(GAP-43)的影响。方法:32只3月龄雄性SD大鼠,随机分4组(n=8):空白组(CN)、水迷宫训练组(CM)、过度负荷运动组(ON)、过度负荷+水迷宫训练组(OM)。ON、OM组进行过度负荷游泳训练,期间CN、CM组自然喂养;7周后CN、ON组即刻取材,CM、OM组进行10天的水迷宫训练,之后取材。采用HE染色法观察海马的形态结构,应用real-time PCR、Western-blotting定量分析海马的GAP-43表达情况。结果:1Morris水迷宫训练结果显示:OM组第2-7天较CM组同期的潜伏期非常显著增长(P<0.01);OM组第4-9天较第1-3天显著缩短(P<0.05,P<0.01),第6-9天较第4、5天显著缩短(P<0.05,P<0.01);CM组的第4-9天各天较第1-3天均显著缩短(P<0.05,P<0.01)。OM组在空间探索实验中穿越平台的次数与CM组相比没有显著差异(P>0.05)。2HE染色观察结果:ON、OM组大鼠海马出现神经元排列较紊乱,组织结构疏松等现象。3GAP-43检测结果:ON组GAP-43表达非常显著上调于CN组(P<0.01),OM组非常显著上调于CM、ON组(P<0.01)。结论:空间学习记忆能力的形成与GAP-43的基因上调有关,过度负荷运动造成海马神经元结构的轻微损伤,导致大鼠空间学习记忆能力的下降。过度负荷运动后GAP-43的基因表达上调主要参与修复损伤的海马神经元。     

聚合酶链反应检测真菌感染的实验研究

本研究以NS5-NS6为引物,扩增真菌同源性序列ssu-rDNA片段,建立广范围真菌检测的方法。用此方法扩增医学主要致病真菌、细菌和人体细胞,结果所有真菌均扩增出一个约310bp的产物,而细菌和人体细胞均扩增阴性,1pg白色假丝酵母菌DNA即可检出。     

应用PCR技术扩增SRY基因检测性别

本文介绍了一种从基因水平快速、简捷地鉴定性别的方法及该方法的实际应用价值.PCR(polymerase chain reaction)技术是目前最常用的体外扩增DNA片段的技术,SRY(sex determining regionof the Y)基因是男性特有的基因,位于Y染色体上.在SRY基因区域设计特异的引物,利用PCR技术,以管家基因GAPDH为内参照,若能扩增出SRY基因片段,即可判断为男性,否则为女性.该法可对一滴血、一根毛发、多年的尸块、胎儿、有争议的性别进行性别鉴定.广泛应用于法医鉴定、无创孕期胎儿性别鉴定以预防X连锁隐性遗传病患儿的出生以及对有性别争议的运动员体检等.目前赤峰市的各大医院还未开展此技术,值得推广.     

T克隆载体的构建

以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体,在pUC118质粒Amp~r基因的Eam11057酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam11051酶切位点,将一人工合成的具有两个Eam11051酶切位点的互补寡聚核苷酸链(两端具有BamHI接头)插入已封闭Eam1105I酶切位点的pUC118质粒的BamHI位点,构成新的克隆载体,此质粒命名为pUC118E,该载体经Eam11051酶切后,可产生3’端突出一个T碱基的T-vector,能与PCR产物直接连接,经转化大肠杆菌JM109证实,该改造过的pUC118质粒,仍可使宿主细胞具有氨苄抗性,可作为氨苄选择标记的克隆载体。     

应用荧光定量PCR对PCV2在不同类型猪群血液中感染情况的调查

应用荧光定量PCR对某规模化养猪场340头份不同类型猪群猪只血液中PCV2感染的情况进行了调查。结果表明,所有被检测的猪群均存在PCV2感染,不同类型猪群的感染率为100%,全场猪的平均感染率为76.8%(261/340)。其中,生长肥育猪群PCV2感染率最高为90%,而种公猪群感染率最低为30%。在病毒荷载量方面,整个猪群的血液中病毒荷载量处于103~104copies/μL之间。