柑橘黄龙病菌外膜蛋白的诱导表达

柑橘黄龙病病菌的外膜蛋白(omp)极易被宿主免疫系统识别为外来物质,所以其被用制备抗体来检测柑橘黄龙病菌.本实验中截取了omp基因上的一段长为1 071 bp的片段,将其连接到p GEX6P1载体中制成了重组质粒omps-6p1进行原核诱导表达.结果表明,重组质粒可成功诱导出目的蛋白.     

关键词

生化电子人一批美国工程师利用人造器官、肢体和其他身体组织,成功组装出会呼吸、说话和走路的逼真生化电子人,10月11日在纽约国际动漫展公开亮相。核聚变火箭现有技术让宇航员往返火星约需500天,但美国科学家正研制一种利用核聚变技术驱动的火箭,可将往返时间缩短至半年左右。他们预测,数十年内核聚变火箭将帮助人们进行火星等深空探索。     

洋葱黄矮病毒和韭葱黄条病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备

根据已报道的洋葱黄矮病毒(OYDV)和韭葱黄条病毒(LYSV)序列设计特异引物,分别扩增OYDV和LYSV的全长外壳蛋白(CP)基因,插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳纯化诱导产物,免疫小鼠,获得高纯度的抗CP血清。Westernblot分析表明,OYDV与LYSV血清学远缘相关。对大蒜田间样品的间接ELISA检测表明,OYDV和LYSV在田间普遍发生,且通常为复合侵染。两者间微弱的血清学交叉反应对ELISA检测结果影响极小,可用于样品检测。     

SEB超抗原受体拮抗剂在大肠杆菌中的高效可溶性表达、纯化及活性初步研究

目的:在大肠杆菌(BL21)中构建可溶性表达的金黄色葡萄球菌B型肠毒素(SEB)受体拮抗剂。方法:首先确定SEB受体桔抗剂的基因序列,然后用含有SEB受体桔抗剂的基因序列重组质粒表达载体PGEX-4T-1转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达获得蛋白,产物经GST柱纯化后,利用ELISA检测其与SEB的结合能力并进行其体内外药效学实验。结果:该质粒成功转化为可溶性表达,ELISA结果显示表达产物可与SEB特异性结合。结论:本研究成功对SEB受体拮抗剂GST可溶性表达并对其活性进行初步分析。     

鱼类抗菌肽基因工程表达系统概述

本文介绍了鱼类抗菌肽基因工程中使用的原核和真核表达系统,并展望了其应用前景.     

亚洲玉米螟肽聚糖识别蛋白OfPGRP-SA的表达与功能分析

目的:明确肽聚糖识别蛋白PGRP在亚洲玉米螟先天免疫中的功能。方法:构建质粒表达载体,进行重组蛋白表达、纯化及Western blot鉴定,对获得的OfPGRP-SA重组蛋白进行抗菌活性、细菌凝集、酰胺酶活性、酚氧化酶反应和黑化反应等体外试验。结果:通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,OfPGRP-SA蛋白纯化后条带单一,与预期大小一致。对重组蛋白体外活性分析表明,OfPGRP-SA对革兰氏阳性菌有较强的诱导作用,说明OfPGRP-SA可能参与Toll途径的激活。结论:进一步明确OfPGRP-SA在亚洲玉米螟先天免疫应答中的作用,有助于更好地利用病原微生物对亚洲玉米螟进行生物防治。     

重组人B淋巴细胞刺激因子原核表达初探

借助SDS－PAGE分析方法，以重组人B淋巴细胞刺激因子（rhBLyS）蛋白表达宿主菌株M15（pQE30a/rhBLyS）作为研究对象，对于用IPTG诱导的重组目的的产物的表达进行了优化研究，分析比较了诱导时间、IPTG浓度、温度等参数对重组产物表达的影响。实验结果表明，降低温度和IPTG浓度有利于增加靶蛋白的可溶性，27℃和0．075mmol/L为比较适合的表达条件。     

SV40早期启动子中原核增强子样序列的初步研究

萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2可在原核细胞中高效表达。该载体中含有SV40早期启动子及荧光素酶基因cDNA5'端总长共758bp的DNA碱基序列，经计算机分析发现，在SV40早期启动子中含有SV40基因组HindⅢB片断中一段长为49bp的DNA序列，且荧光素酶基因cDNA编码区的5'端含有一个原核细胞基因表达调控区相似序列。将pGL2中的荧光素酶基因cDNA（Luc）克隆入真核表达载体pED中，构建成pED-Luc。该载体经表达测定后，只在真核细胞中表达，在原核细胞不中表达。这说明荧光素酶基因cDNA编码区的5'端的原核细胞基因表达调控区相似序列不具表达有活性的荧光 素酶的功能。经DNA序列对比研究，认为pGL2含有的SV40基因组Hind ⅢB片段5123bp-5171bp长49bp的DNA序列可能就是Hind ⅢB片段的原核增强子功能的决定序列。     

肥胖基因和瘦蛋白研究新进展

本文综述了有关人肥胖基因克隆及其原核表达载体的构建等,提示人瘦蛋白在调节体重及肥胖发病学具有重要意义,为人类解决肥胖疾病展示了希望的前景。     

链霉菌查尔酮合成酶基因克隆及原核表达载体构建

根据Genbank数据库已知的链霉菌的查尔酮合成酶基因的保守区设计chs基因特异简并引物,土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该1条chs基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明：该基因为放线菌来源chs基因．分别在该基因5＇末端和3’末端分别引入的限制酶NcoI和EcoRI酶切位点,利用上述2种限制酶分别酶切导入到psimple—T／chs载体和原核表达pET32a,凝胶回收目的片段后,将二者连接并转化大肠杆菌感受态细胞,转化子经菌液PCR筛选、双酶切鉴定后,3730测序结果表明,该基因全长编码区为1089bp,推测该基因编码全长为362个氨基酸残基,等电点（PI）为5．41、分子量为3965道尔顿含有cHs保守功能区的酸性蛋白质．分析表明,该基因与Streptomyceslividans来源的查尔酮合成酶RppA基因核苷酸相似性高达93％,氨基酸序列相似性高达87．70％．测序结果表明,该基因已经成功插入到pET32a载体中．