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为了在小鼠模型中更深入地研究nulp1蛋白在心脏发育中的功能,采用PCR技术扩增出小鼠nulp1基因的部分编码区并连接入pET-28a表达载体中,之后将重组质粒转入大肠杆菌(E.coli)通过IPTG诱导表达Hisnulp1融合蛋白,对该融合蛋白采用Ni-IDA凝胶柱层析纯化后,免疫新西兰兔制备了多克隆抗体,并用western blotting对抗体进行分析.结果表明,获得了高效价的特异性兔抗nulp1多克隆抗体.这为nulp1功能的进一步研究奠定了基础. 相似文献
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孙晓东 《陕西教育学院学报》2010,26(2):106-107,121
为了构建人C6orf210基因原核表达载体,并在E.coliBL21中表达并纯化。采用RT—PCR扩增人C6orf210基因片段,并将其克隆到原核表达载体Pet21a中,构建重组质粒pET21a—C6ort210。经限制性内切酶EcoRI与XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21,经IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示获得全长为1188bp的人的CAiorf210基因片段。以构建的重组质粒pET21a—C6orf210转化E.coliBL21后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约66000的融合蛋白。经SINS—PAGE、Western blot分析显示,诱导表达的蛋白为C6orf210。 相似文献
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《赣南师范学院学报》2021,(6):74-77
柑橘黄龙病菌CpaB基因编码一种菌毛组装蛋白(Flp pilus assemble protein),前期研究已经证实该蛋白具有外分泌性.在本研究中,首先构建pET30a-CpaB重组载体,然后将其转化BL21(DE3)感受态细胞,重组菌在37℃,0.2 mmol·L(-1) IPTG诱导下,CpaB蛋白可被成功诱导表达,经过Ni-NTA亲和柱纯化后,获得纯度较高的CpaB重组蛋白,分子量为28.2 kDa,以其为抗原,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗血清;采用Western blot对多抗血清的特异性进行分析,结果显示该多抗能特异性结合纯化的CpaB蛋白;进一步使用制备好的CpaB抗血清对感染黄龙病和健康的柑橘样品进行DTBIA检测,具有较好的区分度.这些研究结果为柑橘黄龙病快速检测体系的建立提供理论参考. 相似文献
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研究者只是单独对增强子或增强子样的特性夏其机制进行过研究,并未见将二者结合起来,故对增强子与增强子样调控基因表达的特性夏其机制的研究进展和存在问题进行讨论. 相似文献
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点突变是导致癌症突变中最常见的类型。那么,癌症相关点突变是否存在某些共有的特征,或者它们在基因编码区的分布是否有某些特异性?到目前为止,仍不是十分清晰。这里利用生物信息学方法对99个基因中1227个癌症相关点突变进行了分析,以期发现它们的特征。结果显示超过60%的癌症相关点突变位于外显子剪接增强子内(ESE)。 相似文献
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在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在大肠杆菌BL21(DE3)菌中获得表达,重组融合蛋白的相对分子量约为43 kD,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经溶解包涵体,体外复性和Ni-NTA亲和柱纯化,获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,纯化蛋白得率约16.2%。成果为抗人B7-2单链抗体的生物学活性研究和抗肿瘤药物开发奠定了基础。 相似文献